一种高效表达胶原蛋白水解酶的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种高效表达胶原蛋白水解酶的方法及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术采用含有胶原蛋白水解酶突变体的宿主细胞进行发酵，生产的胶原蛋白水解酶酶活显著提升，且在宿主菌中的可溶性表达也大幅提升，实现了胶原蛋白水解酶的高效表达，其中，胶原蛋白水解酶突变体是将来自Bacillus cereus VD021的胶原蛋白水解酶经过截短改造得到。将该酶应用于不同来源胶原蛋白的水解催化时可将胶原蛋白全部转化为低分子量胶原蛋白肽，降解效果良好，具有重要的应用前景。具有重要的应用前景。具有重要的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种高效表达胶原蛋白水解酶的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种高效表达胶原蛋白水解酶的方法及其应用，属于生物


技术介绍

[0002]胶原蛋白，简称胶原，是一种结构蛋白，大量存在于人体结缔组织如软骨和皮肤等的细胞外基质中，同时也是哺乳动物中含量最丰富的蛋白，约占人体总蛋白的三分之一。胶原蛋白种类繁多，目前已经发现30种不同的胶原蛋白。胶原蛋白是由原胶原也就是单个胶原分子组成的胶原纤维，而胶原分子通常是由三条左螺旋的氨基酸链以右螺旋的方式组成三螺旋结构，最常见的Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型胶原蛋白的三螺旋结构长度约为300nm平均直径为1.5nm，氨基酸的组成却存在共同特点，三条链呈现Gly
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X
‑
Y的排列方式，甘氨酸残基占了总氨基酸残基的三分之一，X和Y通常分别为脯氨酸和羟脯氨酸，两者约占总氨基酸组成的四分之一。由于其特殊的三螺旋结构，天然胶原蛋白具有异常的稳定性，很难被一般的蛋白酶所降解。
[0003]低分子量的胶原蛋白的制备方法主要分为两类：化学降解法和生物酶解法。化学降解法是目前商业化生产胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效表达胶原蛋白水解酶的方法，其特征在于，采用含有胶原蛋白水解酶突变体的宿主细胞进行发酵生产，所述胶原蛋白水解酶突变体通过截去SEQ ID NO.1所示氨基酸序列N端的第1
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30位氨基酸得到。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞包括大肠杆菌或毕赤酵母。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶原蛋白水解酶突变体由SEQ ID NO.3所示的启动子或lac启动子启动表达。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶原蛋白水解酶突变体由SEQ ID NO.4所示的信号肽调控表达。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵为分批发酵或补料分批发酵。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，分批发酵时，包括如下步骤：将种子液接种于发酵培养基中，于28
‑
32℃、230
‑
270rpm培养2
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4h，后于23
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27℃、580
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620rpm下诱导表达，发酵过程中通气量保持在1.5

【专利技术属性】
技术研发人员：康振，刘平，陈坚，堵国成，李江华，王阳，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：