一种低温高活力碱性蛋白酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及通过重叠PCR技术进行迭代饱和突变获得酶活力提高的碱性蛋白酶酶突变体及其制备与应用。本发明专利技术利用重叠PCR技术对克劳氏芽孢杆菌来源的碱性蛋白酶基因apr进行迭代饱和突变，筛选出低温下高活力的突变体，并在解淀粉芽孢杆菌中进行高效表达和制备，解决了低温洗涤环境下碱性蛋白酶活性较低的问题。蛋白酶活性较低的问题。蛋白酶活性较低的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种低温高活力碱性蛋白酶突变体及其应用

：
[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及通过重叠PCR技术进行迭代饱和突变获得酶活力提高的碱性蛋白酶酶突变体及其制备与应用。
技术背景：
[0002]蛋白酶广泛存在于动物、植物和微生物中，由于微生物具有生长速度快，生长条件简单、代谢过程特殊和分布广等特点，使之成为生物酶的重要来源。其应用主要围绕其水解蛋白质肽键的功能展开，生产生活中，有几个主要的需求：使复杂的大分子蛋白质结构变成简单的小分子肽链或者氨基酸，从而变得易于吸收或洗去，比如食品、洗涤剂、饲料等领域；部分破坏蛋白质结构，使物质组分之间实现分离，这在皮革、丝绸等含蛋白质丰富的材料加工时十分有效；促进环境污染物降解，用于环保领域。蛋白酶既能催化水解反应，也能催化其逆反应，而且具备高度的活性和专一性，非常适合医药工业对某些特定分子的生产需求。
[0003]按照最适pH值的不同，蛋白酶可分为碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶。碱性蛋白酶的最适pH为8.0
‑
11.0，其多来源于微生物，特别是工业微生物产生的碱性蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体是在SEQ ID NO.1所示野生型碱性蛋白酶的基础上发生G95P、A96D、S99W、S101T、P127S、S126T突变中的至少一种获得的。2.如权利要求1所述的一种碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶突变体为G95P突变体、G95P/A96D突变体、G95P/A96D/S99W突变体、G95P/A96D/S99W/S101T突变体、G95P/A96D/S99W/S101T/P127S突变体、或G95P/A96D/S99W/S101T/P127S/S126T突变体。3.如权利要求2所述的一种碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述G95P突变体，具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；所述G95P/A96D突变体，具有SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；所述G95P/A96D/S99W突变体，具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列；所述G95P/A96D/S99W/S101T突变体，具有SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；所述G95P/A96D/S99W/S101T/P127S突变体，具有SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列；所述G95P/A96D/S99W/S101T/P127S/S126T突变体，具有SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列。4.权利要求2所述碱性蛋白酶突变体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：路福平，刘逸寒，李玉，马向阳，刘夫锋，张会图，王洪彬，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：