水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于蛋白质工程改造技术领域，公开了一种水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体及其制备方法和应用。本发明专利技术首先基于亲疏水性能理论设计，用分子动力学计算方法测试改变碱性蛋白酶2709氨基酸分子的亲疏水性能对其在水溶液中稳定性的影响。以减少蛋白酶发生脱酰胺反应的几率为基准，选择2709碱性蛋白酶分子中对水溶液稳定性贡献最大的氨基酸残基位点进行蛋白质工程改造，获得了具有较高水溶液稳定性能的碱性蛋白酶2709突变体，而且在不加任何保护剂和稳定剂的前提下，添加本发明专利技术碱性蛋白酶2709突变体的标准液体洗涤剂的剩余酶活力更高，稳定性更好，可以用于洗涤剂或清洁剂中。可以用于洗涤剂或清洁剂中。可以用于洗涤剂或清洁剂中。

【技术实现步骤摘要】
水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于蛋白质工程改造
，具体涉及一种水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]碱性蛋白酶2709是由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌2709经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶，最适温度为40℃，最适pH值为10.5。它是一种丝氨酸型的内切蛋白酶，在一定温度、pH值下能将大分子的蛋白质水解成多肽及氨基酸等产物，具有较强的分解蛋白质的能力。广泛应用于皮革加工、纺织和洗涤剂中。在皮革加工中，碱性蛋白酶2709可分解毛、表皮同真皮层连接处的蛋白质，使毛同皮的联结松开而脱毛；在纺织加工中，主要用来解决羊毛仿羊绒物质的生硬、粗糙等问题，并能改善和提高丝绸与棉、麻、毛等纤维混纺产品的手感和风格；在洗涤方面，能与洗涤剂配方成分有更好的配伍性，大幅度提高洗涤去污能力，对血渍、汗渍、奶渍、油渍等蛋白类污垢，有很好的洗涤效果。
[0003]但是，碱性蛋白酶常常会因保存不当而造成酶活力下降影响其使用效果。碱性蛋白酶产品开启后要尽量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体的疏水性参数
△
G
′
值，即乙醇和水之间自由能变化比原地衣芽孢杆菌蛋白酶2709亲本序列氨基酸增加1kJ/mol及以上，所述碱性蛋白酶2709突变体至少包含有以下位置的疏水性氨基酸修饰中的一个：25、43、57、61、76、96、116、122、127、140、154、160、162、182、184、211、217、239、247、268，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。2.根据权利要求1所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体包含以下氨基酸修饰置换中的一种或三种或六种：第61位氨基酸残基突变为丝氨酸、第96位氨基酸残基突变为丙氨酸、第116位氨基酸残基突变为丙氨酸、第122位氨基酸残基突变为酪氨酸、第140位氨基酸残基突变为色氨酸、第160位氨基酸残基突变为丝氨酸、第162位氨基酸残基突变为丝氨酸、第182位氨基酸残基突变为丝氨酸、第211位氨基酸残基突变为丝氨酸、第217位氨基酸残基突变为丙氨酸、第217位氨基酸残基突变为丝氨酸、第247位氨基酸残基突变为丙氨酸，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。3.根据权利要求2所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体为将第116位氨基酸残基突变为丙氨酸、第140位氨基酸残基突变为丙氨酸、第247位氨基酸残基突变为丙氨酸，其中所述位置对应于氨基酸序列SEQ ID NO：1的位置。4.根据权利要求2所述的水溶液稳定性碱性蛋白酶2709突变体，其特征在于，所述碱性蛋白酶2709突变体为将第96位氨基酸残基突变为丙氨酸、第122位氨基酸残基突变为丙氨酸、第217位氨基酸残...

【专利技术属性】
技术研发人员：张剑，石赟，杨媛，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：