用于治疗糖尿病的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了一种载体，该载体中含有可操纵性连接着启动子、内含子、分泌前导序列编码核酸、人β细胞素（ＢＴＣ）编码核酸或者其功能性片段、以及多聚腺苷酸化信号序列的核酸，其中ＢＴＣ的表达产生分泌的成熟ＢＴＣ。本发明专利技术还提供一种治疗或预防糖尿病的方法，其包括施加有效量的含有所述载体的病毒颗粒。本发明专利技术也提供一种如下的载体，其含有可操纵性连接着巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子和增强子区域、β－珠蛋白嵌合内含子、白蛋白前导序列编码核酸、人β细胞素（ＢＴＣ）编码核酸或者其功能性片段、以及ＳＶ４０多聚腺苷酸化信号序列的核酸，其中ＢＴＣ的表达产生分泌的成熟ＢＴＣ。本发明专利技术另外提供含有本发明专利技术载体的宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及治疗和预防糖尿病的方法，更具体地，涉及用于治疗的(5细胞的再生和新生(neogenesis )。
技术介绍
在具有正常血液葡萄糖调控的个体中，胰腺激素胰岛素响应于 升高的血糖水平而分泌。通常在々反后出现血液葡萄糖增加，其是由 于胰岛素作用在外周组织比如骨骼肌和脂肪上而产生的。胰岛素刺 激这些外周组织的细胞活跃地^jk液中摄取葡萄糖并将其转化成储 藏的形式。这一过程也被称为葡萄糖处置(glucose disposal)-个体 在一天中的血液葡萄糖水平从低到正常再到高发生变化，其取决于 此人是处于禁食状态、中间状态、还是摄食状态。这些水平也分别 被称为低血糖、正常血糖、和高血糖。在糖尿病患者个体中，由于 胰岛素分泌的缺陷或者作用的缺陷，这些葡萄糖动态平衡方面的变 化失调，导致了慢性的高血糖症。糖尿病是一种常见疾病，其发病率约为4-5%。糖尿病发生的风 险随体重的增加而增加，多达卯。/。的成年型糖尿病患者^J巴胖的。 因此，由于肥胖成年人的高出现率，成年型糖尿病患者的发病率在 世界范围内正在升高。糖尿病分为三个主要类型。II型糖尿病是一 种类型，也被称为非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)或者成年型糖 尿病。I型糖尿病是第二种类型，其被称为胰岛素依赖性糖尿病 (IDDM)。第三种糖尿病是遗传性的，其是由于控制胰岛p细胞功 能的基因发生突变造成的。尽管胰岛素的诊断基于葡萄糖检测，对 所有患者进行准确分类却不总是可行的。II型糖尿病在成人中更加 普遍，而I型糖尿病在儿童和十几岁的青少年中占主要。I型和II型糖尿病都与预期寿命的缩短相关，并且与其它并发症 比如心血管疾病和动脉J更化相关。为预防后期并发症，糖尿病的长 期处置经常包括胰島素治疗，而无论患者分类是I型还是II型。I 型糖尿病是自身免疫性疾病，其与产生胰岛素的 P细胞的几乎 完全丧失有关。P细胞的这种丧失导致终生的胰岛素依赖。I型糖尿 病可发生在任何年龄，并且据估计在所有剖宫产新生儿中有约0.3-1 %在他们的 一生中会出现此疾病。治疗I型糖尿病和在一定程度上治疗II型糖尿病的普遍使用的 方法在传统上由胰岛素维持疗法组成。此疗法的最简单的形式需要 在>^反后或者一天中以有规律的间隔时间，将纯化的或重组的胰岛素 注射到患者体内，以维持正常的血液葡萄糖水平。这些注射最好需 要以每天4次的频率进行。尽管上述治疗方法给患者提供了一些益 处，但是胰岛素治疗的这种方法仍然受到对血液葡萄糖控制不足的 困扰，并且需要患者极大的依从。I型糖尿病的另 一个治疗方法包括^_用比如胰岛素泵的装置，其 使得可以定期递送胰岛素。此方法对于上文描述的方法是优选的， 因为不需要经常的注射。但是，胰岛素泵疗法的使用也有缺陷，因 为其仍需要每隔三天替换一次针头。类似于胰岛素维持疗法，胰岛 素泵方法也不能达到最优的葡萄糖调控，因为胰岛素的递送不是根 据血液葡萄糖水平的变化来调控的。因此这些治疗糖尿病的方法是 繁瑣且不足的。另外，这些方法对于平均成人寿命的时间也不是完 全有效的，或者显示出对于预防此疾病是有效的。已经尝试了用于代替生物活性胰岛素进入糖尿病患者个体的多 种细胞治疗方法。这些包括基因疗法、免疫疗法和人工p细胞的应 用。用于胰岛素或其它多肽表达的体内基因疗法包括在动物才莫型中 肝脏靶向的病毒介导的转导。但是，这些方法不提供葡萄糖调控的 胰岛素递送，它们也不能恢复或再生产生胰岛素的P细胞，并且在 患者中的应用是有限的。对于胰岛P细胞的遗传修饰和生成人工p细胞是通过细胞疗法 治疗糖尿病的方法。为表达胰岛素的异种移植以及甚至同种异体细 胞递送需要细胞包嚢化以防止宿主免疫应答，以及已经确定了与细 胞存活和持续胰岛素递送有关的问题。也尝试了胰腺和胰岛移植作 为对糖尿病的治疗。此治疗的应用显示出有限的成功，这是因为每 个接受者需要从2-5个成人供体中获得匹配的组织。此方法也难以成 功，部分是由于所移植的组织无法维持正常的葡萄糖调控的胰岛素分泌，也无法在一个合理的时间段内保持活力。因此，需要有简便且更有效的可调节糖尿病患者个体中葡萄糖 动态平衡、从而恢复生成胰岛素的P细胞的生理能力的方法。本发 明满足了这一需求，同时也提供了相关的优点。
技术实现思路
本专利技术提供了一种含有核酸的载体，该核酸可操作性地连接着启动子、内含子、分泌前导序列编码核酸、人p细胞素(betacellulin， BTC)编码核酸或者其功能性片段、以及多聚腺苷酸化信号序列， 其中BTC的表达产生分泌的成熟BTC。也提供一种含有核酸的载 体，该核酸可操作性地连接着巨细胞病毒(CMV)启动子以及增强 子区域、p-珠蛋白嵌合内含子、白蛋白前导序列编码核酸、人p细 胞素(BTC )编码核酸或者其功能性片段、以及SV40多聚腺苷酸化 信号序列，其中BTC的表达产生分泌的成熟BTC。也提供含有本 专利技术载体的宿主细胞。另外提供了治疗或预防糖尿病的方法。该方 法包括对个体施用有效量的带有载体的病毒颗粒，该载体表达分泌 的成熟人P细胞素(BTC)或者其功能性片段，所述载体含有这样 的核酸，该核酸可操作性地连接着启动子、内含子、分泌前导序列 编码核酸、人p细胞素(betacellulin, BTC )编码核酸或者其功能 性片段、以及多聚腺苦酸化信号序列。附图说明图1显示在STZ i秀导的糖尿病NOD.scid和Balb/c小鼠中，通 过全身施用rAd-CMV-BTC使得糖尿病好转。图2显示通过rAd-CMV-BTC使糖尿病好转，其原因在于p细 胞量和胰岛素增加。图3显示ErbB-2参与了通过rAd-CMV-BTC达到的糖尿病的好转。图4显示在使用rAd-CMV-BTC治疗的自身免疫性糖尿病NOD 小鼠中糖尿病好转。具体实施例方式本专利技术涉及一种用于在体内分泌治疗性多肽的重组载体，也涉 及治疗或预防糖尿病的方法。所述载体对于表达和分泌用于治疗糖尿病的人P细胞素(BTC)是特别有用的。本专利技术的方法涉及将上 述编码可分泌性BTC的重组载体导入到糖尿病患者体内，用以再生 或新生生成胰岛素的胰岛p细胞，以及恢复葡萄糖动态平衡。所述 载体以及其在糖尿病治疗中应用的优点是BTC经分泌进入细胞外环 境，在此处它可通过它正常的细胞信号通路产生作用。如此的体内体内进4t^防。在一个实施方案中，本专利技术涉M达人p细胞素(BTC)的腺 病毒载体。该腺病毒栽体包含巨细胞病毒(CMV)启动子/增强子和 BTC编码区域5，端的增强子区域、P-珠蛋白嵌合内含子、和白蛋白 前导序列，以促进BTC的分泌。定位于BTC编码区域3，端的是SV40 多聚腺苷酸化信号序列。编码成熟BTC的BTC[1-801 cDNA被插在 5，和3，表达和调控区之间。在另一个实施方案中，本专利技术涉及通过施用含有融合了白蛋白 前导序列的人BTC cDNA的重组腺病毒载体来治疗糖尿病。BTC的 分泌性表达使得糖尿病在两周内完全好转，而使用免疫调节物治疗 的自身免疫性糖尿病NOD小鼠保持正常血糖超过一百天。糖尿病的 好转是由于胰腺中BTC介导的p细胞再生，并且所述好转通过抑制 ErbB-2受体而被消除，该受体是BTC的配体。如本文所使用的，术语"糖尿病(diabetes)"意指已知为糖尿病本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含核酸的载体，该核酸可操作性地连接着启动子、内含子、分泌前导序列编码核酸、人β细胞素（ＢＴＣ）编码核酸或者其功能性片段、以及多聚腺苷酸化信号序列，其中ＢＴＣ的表达产生分泌的成熟ＢＴＣ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹址垣，
申请(专利权)人：国际创新生物技术研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]