位点特异性修饰和标记的抗病毒肽氰病毒素N制造技术

本申请公开了一种抗病毒肽氰病毒素N类似物，在氰病毒素N的Gln14、Asn26、Ser38、Ser52、Gln62、Ser66、Asp89作为突变位点进行修饰，其中，修饰基团来自含有氨基酸的叠氮化物，或者含有氨基酸的叠氮化物和炔烃之间点击化学反应产生的共价产物基团。本申请选择了Gln14X、Asn26X、Ser38X、Ser52X、Gln62X、Ser66X、Asp89X等作为突变位点，可用于测试位点特异性的PEG化等。化等。化等。

【技术实现步骤摘要】
acid building blocks)可以在市场上买到。
[0011]如下市售的含炔试剂，包括荧光染料，可以在水介质中温和条件下通过点击化学偶联到含有叠氮基团的肽化合物上：
[0012][0013][0014]科学界在抗病毒研究和抗病毒化合物的发现和开发方面取得了发展。抗病毒肽在提供有效的治疗和预防选择方面发挥着重要作用。因此，获得抗病毒肽，对于COVID
‑
19等病毒的抑制，具有重要的意义。
[0015]氰病毒素N(CVN)是一种培养蓝藻(Nostoc ellipsosporumwith)的组成部分，具有强大的抗HIV活性，是一种独特的环肽，有101个氨基酸，长11kDa。一级氨基酸结构与任何已知的蛋白质具有<20％的同源性，因此提供了一个独特的三维结构和序列。CVN的晶体结构显示了一个结构域交换二聚体。它主要是一种具有内部双伪对称性的β
‑
片状蛋白(β
‑
sheet protein)。这两个序列重复(1
‑
50残基和51
‑
101残基)共享32％的序列同一性，但没有形成单独的结构域，因为整体折叠依赖于它们之间的大量接触。相反，两个对称相关的结构域是由两个重复序列之间的链交换形成的。氰病毒素N的序列结构如下：LGKFSQTCYN SAIQGSVLTS TCERTNGGYN TSSIDLNSVI ENVDGSLKWQ PSNFIETCRN TQLAGSSELAAECKTRAQQF VSTKINLDDH IANIDGTLKYE(SEQ ID NO:1)。
[0016]CVN的一级结构包含101个残基，分为两个结构域A(残基1
‑
50)和B(残基51
‑
101)，两个结构域具有高度的内部序列和结构相似性。我们发现，在晶体学实验条件下(低pH和26％异丙醇)，两个对称相关的单体通过结构域交换形成二聚体，这样一个单体的结构域A与其晶体学对称伴侣的结构域B0相互作用，反之亦然。由于两个交换的域彼此距离较远，域交换不会导致额外的分子内相互作用。尽管其中一种用于结晶的蛋白质样品溶液明显含有100％的CVN分子，但根据各种方法判断，我们只能获得含有结构域交换二聚体的晶体。
[0017]CVN对所有免疫缺陷病毒(HIV
‑
1、HIV
‑
1的M
‑
和T型毒株、HIV
‑
2、SIV(猿类)、FIV(猫))以及其他包膜病毒：包括流感病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、严重急性呼吸综合征冠状病毒、丙型肝炎病毒、疱疹病毒6和麻疹病毒，具有强活性。
[0018]因此，强大的抗病毒活性、无毒副作用、耐物理化变性以及对耐药性的超高遗传屏障，表明CVN及其类似物是一种很有前途的抗HIV分子，可用作局部杀微生物剂。具有生物活性的CVN能有效地、不可逆地使多种HIV
‑
1初级毒株失活，包括参与艾滋病毒性传播的嗜CVN型病毒；CVN还能阻止艾滋病毒感染的细胞间传播。由于CVN直接杀灭病毒，因此CVN及其类似物的使用可能导致一种全新的抗HIV(人类免疫缺陷病毒)药物。
[0019]CVN对各种理化降解(physicochemical degradation)均表现出高度的抗性，用变性剂、洗涤剂、有机溶剂、多次冻融循环和热处理对其抗病毒活性没有影响。因此，CVN及其功能类似物可能被证明是一种很好的候选药物，用于各种治疗和预防用途。
[0020]在赖氨酸残基上的无规PEG化(PEGylation)导致了抗病毒活性的不良保留。因此，需要确定定点突变体被用来测试位点特异性的PEG化。CVN其中一个突变体中，谷氨酰胺62被半胱氨酸取代(CVN(Q62C))取代，并被马来酰亚胺激活的PEG化，在体外保留了显著的抗HIV活性(H.Zappe,et al.,Advanced Drug Delivery Reviews,60(2008):79
–
87)。因此，CVN的位点特异性、选择性修饰和衍生化能提供更多样化的分子，为治疗目的和需要提供不同的化学/物理/生物/药理特性。

技术实现思路

[0021]本专利技术提供了一种位点特异性修饰和标记的抗病毒肽氰病毒素N及其类似物，以及含有它的组合物，以及使用和获得他们的方法，特别是在临床和诊断中的应用，如在抗病
毒治疗和预防中的应用。
[0022]本申请第一个方面是提供一种抗病毒肽氰病毒素N类似物I，所述类似物I为在氰病毒素N的Gln14、Asn26、Ser38、Ser52、Gln62、Ser66、Asp89作为突变位点进行修饰，其中，修饰基团来自含有氨基酸的叠氮化物和炔烃之间点击化学反应产生的共价产物基团，
[0023]本申请第二个方面是提供一种抗病毒肽氰病毒素N类似物II，所述类似物II为在氰病毒素N的Gln14、Asn26、Ser38、Ser52、Gln62、Ser66、Asp89作为突变位点进行修饰，其中，修饰基团来自含有氨基酸的叠氮化物。
[0024]其中，含有氨基酸的叠氮化合物选自：
[0025]或者n＝1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
[0026]其中，所述炔烃选自：其中，所述炔烃选自：
[0027][0028]在一种优选实施例中，所述含有氨基酸的叠氮化合物可以是选自：
[0029][0030]等、
[0031]更优选地，所述含有氨基酸的叠氮化合物可以是Fmoc
‑
保护或者Boc
‑
保护的化合物。
[0032]本申请还提供了一种合成所述抗病毒肽氰病毒素N类似物I的方法，包括将含有氨基酸的叠氮化合物链接到抗病毒肽氰病毒素N的肽链Gln14、Asn26、Ser38、Ser52、Gln62、Ser66、Asp89中的至少一个位点上。
[0033]其中，含有氨基酸的叠氮化合物可以是通过酰基叠氮法等现有技术链接抗病毒肽氰病毒素N的肽链的Gln14、Asn26、Ser38、Ser52、Gln62、Ser66、Asp89位点上。
[0034]本申请还提供了一种合成所述抗病毒肽氰病毒素N类似物II的方法，通过点击化学反应，将炔烃化合物链接到抗病毒肽氰病毒素N类似物I上(即叠氮化合物的基团上)。
[0035]本申请选择了Gln14X、Asn26X、Ser38X、Ser52X、Gln62X、Ser66X、Asp89X等作为突变位点，可用于测试位点特异性的PEG化等。
附图说明
[0036]图1为CuAAC
‑
Cu催化炔叠氮化物环加成反应流程示意图。
具体实施方式
[0037]本专利技术提供一种抗病毒肽氰病毒素N的位点特异性修饰和标记方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实例对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗病毒肽氰病毒素N类似物，其特征在于，所述类似物为在氰病毒素N的Gln14、Asn26、Ser38、Ser52、Gln62、Ser66、Asp89作为突变位点进行修饰，其中，修饰基团来自含有氨基酸的叠氮化物。2.根据权利要求1所述的抗病毒肽氰病毒素N类似物，其特征在于，含有氨基酸的叠氮化合物选自：或者n＝1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。3.根据权利要求2所述的抗病毒肽氰病毒素N类似物，其特征在于，含有氨基酸的叠氮化合物选自：化合物选自：4.一种抗病毒肽氰病毒素N类似物，其特征在于，所述类似物为在氰病毒素N的Gln14、Asn26、Ser38、Ser52、Gln62、Ser66、Asp89作为突变位点进行修饰，其中，修饰基团来自含有氨基酸的叠氮化物和炔烃之间点击化学反应产生的共价产物基团。5.根据权利要求4所述的抗病毒肽氰病毒素N类似物，其特征在于，含有氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏良增，
申请(专利权)人：青岛双元泰和药业有限公司，
类型：发明
国别省市：