一种解除细菌基因组碳代谢物阻遏效应（CCR）的新方法技术

CRISPR基因编辑技术是利用细菌获得性免疫机制，以及DNA复制过程的自我修复功能，对生物体中某一个或多个特定的目标基因或靶点进行编辑改造，碳分解代谢物阻遏效应(Carbon Catabolite Repression CCR)，即细菌总是优先利用不需要经过复杂代谢的碳源，当这种底物存在时就会抑制代谢其他底物的基因表达，产生代谢物阻遏效应。本发明专利技术提供了一种采用基因编辑方法解除一株短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)全基因组CCR效应的新方法，对细菌基因工程技术的发展具有重要意义。采用CRES的共有序列WWGNAANCGNWNNCW作为gRNA，设计出一种多靶点结合的非特异性gRNA编辑系统UgRNA/Cas9。采用该系统针对一株野生型Bacillus pumilus全基因组CRES进行编辑，在显著变化的通路中随机选取35个基因，进行DNA测序，结果表明这35个基因的突变位点均发生在CRES类似序列中。列中。列中。

【技术实现步骤摘要】
一种解除细菌基因组碳代谢物阻遏效应(CCR)的新方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，探究一种新型的解除短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)全基因组碳代谢物阻遏效应(CCR)的基因编辑方法。

技术介绍

[0002]CRISPR基因编辑技术是利用细菌获得性免疫机制，以及DNA复制过程的自我修复功能，对生物体中某一个或多个特定的目标基因或靶点进行编辑改造，如常见的基因敲除或敲入、抑制或激活，以及筛选功能基因组等等。CRISPR/Cas系统一共分为三类，其中最常用，同时也是最简单的一类是II型CRISPR/Cas9系统，可对特定的目标片段准确定位剪切。
[0003]碳分解代谢物阻遏效应(Carbon Catabolite Repression CCR)，是1942年Monod等人在大肠杆菌中首次发现，即细菌总是优先利用不需要经过复杂代谢的碳源，当这种底物存在时就会抑制代谢其他底物的基因表达，产生代谢物阻遏效应。1987年，Nicholson等人在Bacillus subtilis 168淀粉酶基因amyE的启动子区，发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型的解除短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)全基因组碳代谢物阻遏效应(CCR)的编辑方法，利用CRISPR/Cas9技术全局编辑CRE序列，包括：a.根据CRE共有序列WWGNAANCGNWNNCW设计简并的UgRNA；b.组合型重组质粒UgRNA/Cas9编辑子转化G
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细菌；c.DNA测序重组菌中CRES突变位点。2.根据权利要求书1所述CRE共有序列WWGNAANCGNWNNCW设计简并UgRNA，共有序列两端补充G或者A作为保护序列，将UgRNA补充为20bp，其中W代表A或T；N代表A、T、G、C四种核苷酸中的任意一种。所设计UgRNA与CRE靶标序列保持大于50％的相似性。3.根据权利要求书1所述将所设计的UgRNA与pCas9质粒连接构成多种组合的重组质粒U...

【专利技术属性】
技术研发人员：应明，毕美营，
申请(专利权)人：天津理工大学，
类型：发明
国别省市：