ICAM-1工程化间充质干细胞株的构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种ICAM

【技术实现步骤摘要】
ICAM
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1工程化间充质干细胞株的构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种ICAM
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1工程化间充质干细胞株的构建方法和应用。

技术介绍

[0002]自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)是一种慢性免疫介导的肝实质损害性疾病。可以影响所有年龄、性别和种族，临床上以血清转氨酶升高、自身抗体阳性、高免疫球蛋白G和(或)γ
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球蛋白血症、肝组织存在以淋巴细胞和浆细胞浸润为主的中、重度界面性肝炎为特征。
[0003]糖皮质激素单独或与硫唑嘌呤联合治疗是AIH的主要治疗方案，但是30％
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50％的患者会在激素减量过程中或停药后复发，数十年来没有显著突破。另外，激素治疗还要综合考虑患者的疾病状况、合并症及依从性问题。我国人口基数大、AIH患者越来越多。然而治疗AIH的药物多年来尚无突破性进展。因此，寻找有效的治疗方法是我们亟待解决的重要问题。
[0004]间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)是一种来源于发育早期中胚层、具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于骨髓、脂肪、脐带、胎盘和牙髓等组织中。MSCs在免疫调控等方面展现出了良好的临床应用前景，尤其是对自身免疫性疾病的治疗。
[0005]目前研究表明，MSCs发挥免疫调节的方式之一是MSCs与免疫细胞直接接触作用。MSCs通过抑制T、B淋巴细胞的增殖分化，产生未成熟树突状细胞(DCs)，间接诱发调节性T细胞(Tregs)等多种途径发挥免疫调节作用。值得注意的是，MSCs顺利归巢并定植于靶器官是其发挥免疫抑制功能的前提条件。在缺血、损伤等刺激时，MSCs表面的细胞间粘附分子ICAM
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1表达增加，更加促进其趋化至全身炎症反应最重要的部分。
[0006]细胞间粘附分子1(intercellular cell adhesion molecule
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1,ICAM
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1)，又称CD54。大量研究表明，MSCs在炎症环境中高表达ICAM
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1，其介导了MSCs与T细胞间的密切接触。当封闭ICAM
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1或者促使其无法表达后，MSCs的免疫抑制能力会显著降低。因此，ICAM
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1是MSCs发挥免疫调控的重要分子。
[0007]目前，国内外尚无将MSCs与ICAM
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1结合来治疗自身免疫性疾病的报道。而现阶段传统治疗自身免疫性肝炎的手段及传统药物，虽然其能缓解自身免疫性肝炎的症状，但治疗效果不明显，且病情复发率较高，副作用较大。因此，将MSCs与ICAM
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1有效结合，使MSCs更大程度的抑制T细胞增殖和活化，进而调节免疫效应与炎症反应。此治疗方法有望成为治疗自身免疫性肝炎的新手段，能够有效改善自身免疫性肝炎的症状，降低不良反应率，安全性好，并有助于患者回归正常生活，改善患者的生活质量。
[0008]因此，为了解决上述问题，本文提出一种ICAM
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1工程化间充质干细胞株的构建方法和应用。

技术实现思路

[0009]为了解决上述技术问题，本专利技术设计了一种ICAM
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1工程化间充质干细胞株的构建方法和应用，本专利技术的过表达ICAM
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1基因的间充质干细胞株静脉注射自身免疫性肝炎小鼠模型后，能够显著减轻自身免疫性肝炎症状，降低肝脏损伤程度，并调节炎性因子的表达，抑制炎症反应，在治疗自身免疫性肝炎方面具有显著疗效。
[0010]为了达到上述技术效果，本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种ICAM
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1工程化间充质干细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0011]Step1、构建携带有ICAM
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1基因的重组慢病毒；
[0012]Step2、将所述携带有ICAM
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1基因的重组慢病毒转染间充质干细胞，经嘌呤霉素筛选，得到ICAM
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1工程化间充质干细胞株。
[0013]进一步的，所述间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。
[0014]进一步的，所述间充质干细胞的细胞表型为表达CD29、CD44、CD73、CD90和CD105，不表达CD34，CD45，CD11b，CD19，HLA
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DR。
[0015]本专利技术的另一目的在于提供一种一种ICAM
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1工程化间充质干细胞株的应用，其特征在于，用于治疗自身免疫性肝炎。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017]本专利技术提供的间充质干细胞经ICAM
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1工程化修饰，通过嘌呤霉素筛选，得到稳定过表达ICAM
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1基因的间充质干细胞株；过表达ICAM
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1基因的间充质干细胞株静脉注射自身免疫性肝炎动物模型后，能够显著减轻自身免疫性肝炎症状，降低肝脏损伤程度，并调节炎性因子的表达，抑制炎症反应，在治疗自身免疫性肝炎方面具有显著疗效。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1为实施例1中人脐带间充质干细胞的形态图；
[0020]图2为实施例1中人脐带间充质干细胞的细胞表型鉴定图；
[0021]图3为实施例1中人脐带间充质干细胞三系分化能力检测；
[0022]图4为实施例2中pLV
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ICAM1
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EGFP慢病毒载体图谱；
[0023]图5为实施例3中GFP标记检测pLV
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ICAM1
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EGFP转染人脐带间充质干细胞效率；
[0024]图6为实施例3中RT
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PCR法检测ICAM
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1基因表达；
[0025]图7为实施例3中流式细胞术验证ICAM
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1转染人脐带间充质干细胞情况；
[0026]图8为实施例4中小鼠血液中ALT和AST检测结果；
[0027]图9为实施例4中小鼠肝脏HE染色结果；
[0028]图10为实施例4中小鼠血浆中炎性细胞因子检测结果；
[0029]图11为实施例5中小鼠血液中ALT和AST检测结果；
[0030]图12为实施例5中小鼠肝脏HE染色结果。
具体实施方式
[0031]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ICAM
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1工程化间充质干细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1、构建携带有ICAM
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1基因的重组慢病毒；Step2、将所述携带有ICAM
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1基因的重组慢病毒转染间充质干细胞，经嘌呤霉素筛选，得到ICAM
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1工程化间充质干细胞株。2.根据权利要求1所述的一种ICAM
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1工程化间充质干细胞株的构建方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：白喜龙，李天晴，刘婷婷，杨莉婷，
申请(专利权)人：西安超越干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：