一种结核杆菌PGL-tb多糖抗原的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种结核杆菌PGL

【技术实现步骤摘要】
一种结核杆菌PGL
‑
tb多糖抗原的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种分枝杆菌PGL
‑
tb多糖抗原的制备方法，属于结核疫苗研制


技术介绍

[0002]结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)感染引起的慢性传染病。全世界大概有1/3的人感染MTB，2020年世界卫生组织报告显示全球新增结核病患者987万，其中有100万人因结核病而失去生命。
[0003]分枝杆菌细胞壁上特殊的多糖复合物在维持细胞壁结构和致病过程中发挥着极其重要的作用。酚糖脂(Phenolic GlycoLipid,简称PGL)组成分枝杆菌细胞壁的重要成分,也是分枝菌感染宿主的重要毒力因子(上海交通大学学报,2013,33,7)。结核分枝杆菌酚糖脂PGL
‑
tb由多糖部分(oligosaccharide)，长链β
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二醇(phthiocerol)脂质核心，甲基支链脂肪酸(mycocerosic acids)等组成(Acta Leprol,1989,7,81)。结核分枝杆菌PGL
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tb的三糖结构域具有抑制Toll样受体2(TLR2)诱导的NF
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κB活化，从而抑制炎性细胞因子TNF
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α的产生(ACS Chem Biol,2016,11,2865)。因此，PGL
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tb在结核杆菌的致病机制中发挥了重要作用，可以作为一种良好的候选靶向抗原(Adv Exp Med Biol,2021,1313,155)。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有技术的不足，一种结核杆菌PGL
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tb多糖抗原的制备方法，其中的多糖是结核杆菌细胞壁中酚糖脂的糖基部分。PGL
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tb多糖抗原结构为：
[0005][0006]另外，本专利技术涉及所述的结核杆菌PGL
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tb多糖抗原的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)氩气保护、分子筛存在下，NIS
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TMSOTf催化化合物2和化合物3在二氯甲烷中反应，终止反应后分离纯化得化合物4；化合物4在甲醇钠的甲醇溶液中脱保护，然后在NaH存在下与碘甲烷发生反应得到化合物5；化合物5在TBAF的四氢呋喃溶液中室温反应得到化合物6；氮气保护、分子筛存在下，TMSOTf催化化合物6和化合物2于二氯甲烷中反应，终止反应后分离纯化得化合物7：
[0008][0009](2)化合物7在TBAF的四氢呋喃溶液反应，TLC跟踪反应，室温搅拌至反应完全，体系浓缩后用硅胶柱分离得到化合物8：
[0010][0011](3)氩气保护、分子筛存在下，TMSOTf催化化合物8和化合物9在二氯甲烷中反应，终止反应后分离纯化得化合物10；化合物10在甲醇钠的甲醇溶液中脱保护得到化合物11；隔氧条件下，化合物11的甲醇溶液加入碳负载20％氢氧化钯，以氢气加氢，在氮气保护下过滤，分离纯化后得到PGL
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tb多糖抗原1：
[0012][0013]本专利技术具有以下优点：
[0014]本专利技术所述的结核杆菌PGL
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tb多糖抗原的化学结构是明确且单一的，可以通过化学方法大量合成，可用于载体蛋白偶联制备疫苗，克服由天然多糖导致的疫苗制备和质量控制困难等问题，有望加速抗结核疫苗的研发。
附图说明：
[0015]图1是结核杆菌PGL
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tb多糖抗原的核磁1H NMR谱图；
[0016]图2是结核杆菌PGL
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tb多糖抗原的核磁
13
C NMR谱图。
具体实施方案
[0017]下面结合附图以及结合实施例对本专利技术做更详细的分析。
[0018]实施例1结核杆菌PGL
‑
tb多糖抗原的制备
[0019][0020](1)将干燥除水的化合物2(0.528g，1.08mmol)和化合物3(0.439g，1.62mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，体系中加入分子筛。室温氩气下保护性搅拌10分钟，然后冷却至
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20℃，加入NIS(0.315g，1.40mmol)，逐滴加入TMSOTf(0.1mL，0.108mmol)。在
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20℃下搅拌2小时后，用磷酸盐缓冲液(PH＝7)猝灭反应。用二氯甲烷萃取水相三次，然后用水洗涤合并的有机相，用无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到化合物4(0.515g，69％收率)。
[0021]1H NMR(400MHz,CDCl3):δ0.15and 0.17(s,6H,Si(CH3)2),0.91(s,9H,t
‑
Bu),1.39(d,3H,3J＝6.0Hz,H
‑
6),2.16(s,3H,OAc),2.79(t,2H,3J＝6.4Hz,H
‑
e),3.41
‑
3.50(m,2H,H
‑
f),3.70(dd,1H,3J＝9.0Hz,3J＝9.0Hz,H
‑
4),3.84
‑
3.93(m,1H,H
‑
5),4.26(dd,1H,3J＝9.0Hz,3J＝3.5Hz,H
‑
3),5.22(dd,1H,3J＝3.5Hz,3J＝2.0Hz,H
‑
2),5.37(d,1H,3J＝2.0Hz,H
‑
1),7.01(d,2H,3J＝8.8Hz),7.12(d,2H,3J＝8.4Hz).
[0022]HRMS C
38
H
52
NO9Si:Calcd.[M+H]+
694.3411,Found 694.3391.
[0023](2)将新制备的甲醇钠溶液(1mL，0.5M的甲醇溶液)加入化合物4(0.549g，0.789mmol)的甲醇(30mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，并通过TLC进行监测。真空除去甲醇，残留物用二氯甲烷萃取，有机相用水洗涤，用无水MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将浓缩物用THF(5mL)溶解，在0℃、氩气保护下分批加入氢化钠(60％分散在矿物油中，用石油醚洗涤两次)(29mg，0.724mmol)，搅拌0.5小时后，向体系中加入碘甲烷(0.048mL，0.724mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸乙酯萃取三次。有机相用水、盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。将粗产品在硅胶(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)上进行色谱分离，得到化合物5(0.219g，91％收率)。
[0024]1H NMR(400MHz,CDCl3):δ0.18and 0.21(s,6H,Si(CH3)2),0.98(s,9H,t
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结核杆菌PGL
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tb多糖抗原的制备方法，其特征在于其结构式如下：2.一种如权利要求1所述的PGL
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tb多糖抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)氩气保护、分子筛存在下，NIS
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TMSOTf催化化合物2和化合物3在二氯甲烷中反应，终止反应后分离纯化得化合物4；化合物4在甲醇钠的甲醇溶液中脱保护，然后在NaH存在下与碘甲烷发生反应得到化合物5；化合物5在TBAF的四氢呋喃溶液中室温反应得到化合物6；氮气保护、分子筛存在下，TMSOTf催化化合物6和化合物2于二氯甲烷中反应，终止反应后分离纯化得化合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓，杨小琴，王金，沈雷雷，倪瑞尧，饶帆，刘丹，秦颢瑜，王彦卿，
申请(专利权)人：盐城师范学院，
类型：发明
国别省市：