CD244在作为抗非洲猪瘟的基因编辑靶点中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CD244在作为抗非洲猪瘟的基因编辑靶点中的应用。本发明专利技术提供了能够抑制CD244表达的物质在制备用于治疗和/或预防非洲猪瘟病毒感染的产品中的应用。本发明专利技术在猪原代肺泡巨噬细胞(PAM)中抑制CD244基因的表达可显著干扰ASFV复制，过表达CD244可显著促进ASFV在iPAM细胞系中的复制。本发明专利技术为抗ASFV感染药物研发和开展猪的抗病育种研究提供了新的素材。的素材。

【技术实现步骤摘要】
CD244在作为抗非洲猪瘟的基因编辑靶点中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及CD244在作为抗非洲猪瘟的基因编辑靶点中的应用。

技术介绍

[0002]抗病育种一直是动物遗传育种领域研究的重点和热点，其最终目的是为有效的疾病防控而产生新的抗病品系或品种。非洲猪瘟病毒(ASFV)是一种烈性传染病毒，严重威胁着全球养猪业。截止目前，还未发现行之有效的疫苗和治疗手段，抗病育种是控制病毒传播的可行途径之一。当前，加强病毒感染分子机理研究，结合多组学数据鉴定出候选的宿主抗性功能位点，为抗病育种提供靶点是突破非洲猪瘟抗病育种瓶颈的关键。虽然各国科学家已经在非洲猪瘟疫苗的研究上获得了重大突破，但是我们目前仍然没有可以投入产业化的可靠疫苗。这让研究者不得不从另外一个方向思考，如何抵御非洲猪瘟病毒的侵袭。1998年，对靠近马拉维边境的莫桑比克太特省Angonia区的乡村猪进行血清学调查发现，在采样的54头健康猪中，有近40％的猪都具有ASFV抗体。此后攻毒实验也证实了存在天然抗性的猪种，但遗憾的是研究者并没有发现这种抵抗能力是可遗传的，这表明非洲猪瘟病毒有着复杂的致病机理。肌瘤病毒抗性(Mx)基因是干扰素调控的基因，可以抑制多种病毒的复制。研究表明，MxA同样可以抑制ASFV在宿主细胞中的复制，这种抑制作用与MxA蛋白被招募到核周围的病毒组装点有关。进一步研究发现，ASFV进入细胞似乎直接刺激了宿主葡聚糖的吸收、肌动蛋白的极化以及EGFR、PI3K
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Akt、Pak1和Rac1的激活，通过抑制这些细胞关键调节基因或者用药物EIPA(一种TRPP3通道抑制剂)治疗，会显著降低ASFV的入侵和病毒复制。研究者还发现，ARG1
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聚胺的宿主代谢途径对病毒的复制很重要，暗示ASFV可能通过调节宿主细胞中的小分子水平来促进自身的复制。虽然研究者已经寻找出一些ASFV感染过程的关键参与基因，但是并未锁定关键的抗性基因和受体基因。我国非洲猪瘟已经呈现大面积流行，虽然各地已经实施行之有效的防疫政策，但是非瘟病毒已经存在于我国自然环境中，目前并没有有效的疫苗防疫手段。结合我国畜牧业现状，疫病净化是疫病防控的最根本策略，抗病育种作为疫病净化最有效的手段之一，将成为未来畜牧业防控非洲猪瘟的重要策略。开展非洲猪瘟病毒抗性基因研究，将为非洲猪瘟抗病猪培育奠定重要基础，为非洲猪瘟防控提供新的途径。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供CD244在作为抗非洲猪瘟的基因编辑靶点中的应用。
[0004]第一方面，本专利技术要求保护能够抑制CD244表达的物质在如下任一中的应用：
[0005](A1)制备用于治疗和/或预防非洲猪瘟病毒(ASFV)感染的产品；
[0006](A2)治疗和/或预防非洲猪瘟病毒(ASFV)感染。
[0007]第二方面，本专利技术要求保护能够抑制CD244表达的物质在如下任一中的应用：
[0008](B1)制备用于在宿主细胞中抑制非洲猪瘟病毒(ASFV)复制的产品；
[0009](B2)在宿主细胞中抑制非洲猪瘟病毒(ASFV)复制；
[0010](B3)制备对非洲猪瘟病毒(ASFV)抗性增强的细胞模型或动物模型。
[0011]在第一方面和第二方面中，所述产品可为抗ASFV的药物或疫苗。
[0012]在第一方面和第二方面中，所述能够抑制CD244表达的物质可为直接以CD244为靶点的敲除CD244表达的物质或敲低CD244表达的物质或CD244抑制剂。
[0013]进一步地，所述能够抑制CD244表达的物质可为CD244 siRNA。
[0014]在本专利技术的具体实施方式中，所述CD244 siRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0015]第三方面，本专利技术要求保护能够促进CD244表达的物质在如下任一中的应用：
[0016](C1)制备用于提高宿主细胞对非洲猪瘟病毒(ASFV)易感性的产品；
[0017](C2)提高宿主细胞对非洲猪瘟病毒(ASFV)易感性；
[0018](C3)制备对非洲猪瘟病毒(ASFV)易感的细胞模型或动物模型；
[0019](C4)制备用于在宿主细胞促进非洲猪瘟病毒(ASFV)复制的产品；
[0020](C5)在宿主细胞促进非洲猪瘟病毒(ASFV)复制；
[0021](C6)制备对非洲猪瘟病毒(ASFV)抗性减弱的细胞模型或动物模型。
[0022]其中，所述能够促进CD244表达的物质可为能够编码CD244的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒或重组载体或CD244促进剂。
[0023]在本专利技术的具体实施方式中，所述能够促进CD244表达的物质为能够表达CD244的重组慢病毒。
[0024]第四方面，本专利技术要求保护如下任一方法：
[0025]方法I：一种制备对非洲猪瘟病毒(ASFV)抗性增强的细胞模型或动物模型的方法，包括如下步骤：降低宿主细胞或动物中CD244的表达，得到重组细胞或动物；与所述宿主细胞或动物相比，所述重组细胞或动物对非洲猪瘟病毒(ASFV)的抗性增强。
[0026]方法II：一种制备对非洲猪瘟病毒(ASFV)抗性减弱的细胞模型或动物模型的方法，包括如下步骤：提高宿主细胞或动物中CD244的表达，得到重组细胞或动物；与所述宿主细胞或动物相比，所述重组细胞或动物对非洲猪瘟病毒(ASFV)的抗性减弱。
[0027]方法III：一种制备对非洲猪瘟病毒(ASFV)易感的细胞模型或动物模型，包括如下步骤：提高宿主细胞或动物中CD244的表达，得到重组细胞或动物；与所述宿主细胞或动物相比，所述重组细胞或动物对非洲猪瘟病毒(ASFV)更加易感。
[0028]在所述方法I中，降低所述宿主细胞或动物中CD244的表达可通过任何技术手段实现，如通过向所述宿主细胞或动物中导入CD244 siRNA。在本专利技术的具体实施方式中，所述CD244 siRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0029]在所述方法II和所述方法III中，提高所述宿主细胞或动物中CD244的表达可通过任何技术手段实现。在本专利技术的具体实施方式中，是通过将能够表达CD244的重组慢病毒感染所述宿主细胞或动物实现的。进一步地，包装所述重组慢病毒时采用的三质粒系统，具体质粒为携带有CD244编码基因的pLVX
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2A
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mCHerry
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puro重组载体、PMD2.G和PSPAX，包装细胞为293T细胞。
[0030]第五方面，本专利技术要求保护如下任一应用：
[0031](D1)CD244作为靶点在调控宿主细胞或动物对非洲猪瘟病毒(ASFV)易感性中的应
用；
[0032](D2)CD244作为靶点在调控非洲猪瘟病毒(ASFV)在宿主细胞或动物中的复制能力中的应用；
[0033](D3)CD244作为靶点在制备用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能够抑制CD244表达的物质在如下任一中的应用：(A1)制备用于治疗和/或预防非洲猪瘟病毒感染的产品；(A2)治疗和/或预防非洲猪瘟病毒感染。2.能够抑制CD244表达的物质在如下任一中的应用：(B1)制备用于在宿主细胞中抑制非洲猪瘟病毒复制的产品；(B2)在宿主细胞中抑制非洲猪瘟病毒复制；(B3)制备对非洲猪瘟病毒抗性增强的细胞模型或动物模型。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述能够抑制CD244表达的物质为直接以CD244为靶点的敲除CD244表达的物质或敲低CD244表达的物质或CD244抑制剂；进一步地，所述能够抑制CD244表达的物质为CD244 siRNA；更进一步地，所述CD244 siRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。4.能够促进CD244表达的物质在如下任一中的应用：(C1)制备用于提高宿主细胞对非洲猪瘟病毒易感性的产品；(C2)提高宿主细胞对非洲猪瘟病毒易感性；(C3)制备对非洲猪瘟病毒易感的细胞模型或动物模型；(C4)制备用于在宿主细胞促进非洲猪瘟病毒复制的产品；(C5)在宿主细胞促进非洲猪瘟病毒复制；(C6)制备对非洲猪瘟病毒抗性减弱的细胞模型或动物模型。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述能够促进CD244表达的物质为能够编码CD244的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒或重组载体或CD244促进剂；或所述能够促进CD244表达的物质为能够表达CD244的重组慢病毒。6.如下任一方法：方法I：一种制备对非洲猪瘟病毒抗性增强的细胞模型或动物模型的方法，包括如下步骤：降低宿主细胞或动物中CD244的表达，得到重组细胞或动物；与所述宿主细胞或动物相比，所述重组细胞或动物对非洲猪瘟病毒的抗性增强；方法II：一种制备对非洲猪瘟...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵书红，齐晓龙，付亮亮，项月，周鹏，赵秋林，李京津，张赛仙，李新云，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：