一种裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用。本发明专利技术以金黄色葡萄球菌株做宿主，从污水中分离的裂解性噬菌体，该噬菌体能裂解耐药金黄色葡萄球菌，对耐药金黄色葡萄球菌的最适MOI范围为0.03

【技术实现步骤摘要】
一种裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用


[0001]本专利技术属于微生物制剂领域，具体涉及一种裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物，与皮炎的发生与加重密切相关。金葡菌在健康人皮肤中定植率约5
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30％，而在皮损患者皮肤上定植率能达到75
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100％，非皮损患者皮肤也能达到至少30％。临床上常用抗生素来对抗细菌引起的感染，然而随着抗生素的大规模生产与使用，特别是对抗生素的滥用，催生出大量耐药菌，最终导致多重耐药(multidrug resistant，MDR)菌和ESKAPE超级耐药菌的产生。
[0003]噬菌体是侵袭细菌的病毒，由于其特异性杀灭病原菌、毒副作用小、不破坏机体正常微生物群和不引发严重内毒血症的特点被视为替代抗生素最有潜力的一种策略，重新引起了研究者们的重视。专利CN109082414A公开了一种金黄色葡萄球菌噬菌体，其对耐药性金黄色葡萄球菌具有良好的体内外抗菌作用。由于其感染复数MOI为1时，不能抑制金黄色葡萄球菌，感染复数MOI为10时，才能有效治疗金黄色葡萄球菌引起的皮肤感染，而通常MOI值越高的细胞越难被感染，因此，其噬菌体抑制耐药性金黄色葡萄球菌的效果并不理想，有必要获得抑制耐药金黄色葡萄球菌效果更好的噬菌体，用于皮肤抗感染治疗。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种裂解金黄色葡萄球菌的噬菌体，所述噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2023496。
[0005]进一步地，所述噬菌体是裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。
[0006]进一步地，所述噬菌体是裂解皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。
[0007]进一步地，所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。
[0008]本专利技术还提供了一种前述噬菌体在制备抑制金黄色葡萄球菌的抑菌剂中的用途。
[0009]进一步地，所述抑菌剂是抑制耐药金黄色葡萄球菌的抑菌剂。
[0010]进一步地，所述抑菌剂是抑制皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌的抑菌剂；所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。
[0011]本专利技术最后提供了一种前述噬菌体在制备抗菌药物中的用途，所述药物是抗金黄色葡萄球菌的药物。
[0012]进一步地，所述药物是抗耐药金黄色葡萄球菌的药物。
[0013]进一步地，所述药物具有抑制皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌生长的作用；所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛
酯的金黄色葡萄球菌。
[0014]本专利技术金黄色葡萄球菌噬菌体VB
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SauM_SI2(Staphylococcus aureus bacteriophage VB
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SauM_SI2)，于2023年04月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2023496，保藏地址为：中国武汉，武汉大学，邮编：430072。
[0015]本专利技术金黄色葡萄球菌噬菌体，是以金黄色葡萄球菌株做宿主，从污水中分离的裂解性噬菌体，该噬菌体能裂解宿主菌，并在双层平板上形成清晰透亮、边缘整齐、直径约1.65
±
0.24mm的噬菌斑；电镜结果显示其头部直径96
±
3.9nm，颈部长16.4
±
1.4nm，尾部长110
±
4.4nm、直径27
±
0.1nm，尾管长104
±
5.6nm，核酸链型为dsDNA，属于Caudovirales(尾病毒目)下的Myoviridae(肌病毒科)；主要结构蛋白分子量约55kDa，低于50℃下60min内具有稳定感染活性，在pH5.0
±
2.0范围内60min内稳定；对宿主菌的最适MOI范围为0.03
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0.27；能在不同MOI范围内抑制皮炎来源耐药金葡菌株生长，具有较好抑菌效果，为耐药金葡菌株引起的皮炎治疗提供了新的更有效的选择。
[0016]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0017]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0018]图1基因组1％琼脂糖凝胶电泳图(a：部分测试细菌基因组，M泳道：DL5000 bp DNA marker，泳道1
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2：其中两个测试菌株；b：部分测试菌株16S扩增结果，M：DL5000 DNA marker，泳道1
‑
8：其中8个测试株)
[0019]图2测试菌株与参比菌株进化关系树图
[0020]图3spa分型PCR扩增产物1％琼脂糖凝胶电泳图(M泳道：DL5000 DNA Marker；1
‑
9泳道：9株皮炎来源金葡菌PCR扩增产物)
[0021]图4噬菌体VB_SauM_SI2的噬菌斑和形态(a：噬菌体在双层平板上的噬菌斑；b：噬菌体在透射电镜下的形态)
[0022]图5基因组和经酶切后1％琼脂糖凝胶电泳图(泳道1均为噬菌体VB
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SauM_SI2；a：基因组；泳道M：DL5,000DNA marker；b：DNaseΙ酶切产物；泳道M：DL7,000DNA marker；c：RNase A酶切产物；泳道M：DL15,000DNA marker；d：ExonucleaseΙ酶切产物；泳道M：DL5,000DNA marker)
[0023]图6噬菌体VB_SauM_SI2系统发育树
[0024]图7噬菌体VB
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SauM_SI2结构蛋白SDS
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PAGE分析
[0025]图8噬菌体VB
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SauM_SI2稳定性曲线(a：热稳定性。60min内，噬菌体VB
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SauM_SI2在不同温度下的滴度变化，纵坐标为滴度的平均值
±
标准差(SD)；b：pH稳定性；60min内，噬菌体VB
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SauM_SI2在不同pH下的滴度变化，纵坐标为滴度的平均值
±
标准差SD)
[0026]图9噬菌体VB
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SauM_SI2对10株金葡菌的抑菌效果
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解金黄色葡萄球菌的噬菌体，其特征在于：所述噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2023496。2.如权利要求1所述的噬菌体，其特征在于：所述噬菌体是裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。3.如权利要求2所述的噬菌体，其特征在于：所述噬菌体是裂解皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。4.如权利要求2或3所述的噬菌体，其特征在于：所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。5.权利要求1～4任一项所述噬菌体在制备抑制金黄色葡萄球菌的抑菌剂中的用途。6.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述抑菌剂是抑制耐药金...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辂，杨蓉，李端华，赵晨，李进军，饶峻，
申请(专利权)人：成都大学，
类型：发明
国别省市：