【技术实现步骤摘要】
一种用于培养狂犬病毒的病毒维持液
[0001]本专利技术涉及一种用于培养狂犬病毒的病毒维持液，属于生物医药
技术介绍
[0002]狂犬病毒(Rabies virus,RV)是一种嗜神经性病毒，其含糖蛋白(G)、核蛋白(N)、双聚酶(L)、磷蛋白(NS)及基质(M)这5种蛋白。其中，糖蛋白产生的抗体具有中和力，可用于对抗病毒攻击，而核蛋白产生的抗体不具有中和力，可用于检测浆内包涵体。
[0003]狂犬病是狂犬病毒引起的一种侵犯中枢神经系统为主的急性人兽共患传染病。临床表现有狂躁型和麻痹型，狂躁型症状为特有的恐水，怕风，恐惧不安，咽肌痉挛，进行性瘫痪等，狂躁型因有典型的恐水症状又名恐水症。至今该病尚无特效药物治疗，一旦发病，死亡率100％。
[0004]狂犬病疫苗是用于暴露前或暴露后预防狂犬病的特殊药物，且暴露后处置是暴露后预防狂犬病的唯一有效手段。目前，狂犬病疫苗主要有Vero细胞狂犬病疫苗、地鼠肾细胞狂犬病疫苗、鸡胚细胞狂犬病疫苗以及人二倍体细胞狂犬病疫苗这几种。其中，人二倍体细胞狂犬病疫苗是当前市场上最安全的疫苗，与其他狂犬病疫苗相比，人二倍体细胞狂犬病疫苗具有更高的安全性和良好的免疫原性的优势。
[0005]MRC
‑
5细胞(人胚肺成纤维细胞)是常用的用于制备人二倍体细胞狂犬病疫苗的人二倍体细胞之一。使用MRC
‑
5细胞作为宿主细胞制备人二倍体细胞狂犬病疫苗时，需先对MRC
‑
5细胞进行细胞培养以获得需要量的贴壁MRC>‑
5细胞，再将狂犬病毒接种至MRC
‑
5细胞中进行病毒培养以获得人二倍体细胞狂犬病疫苗病毒液。MRC
‑
5细胞在培养过程中对营养物质的要求较高，尤其是在病毒培养阶段，由于此阶段使用的病毒维持液中不含牛血清，必须通过其他营养成分维持细胞生长，否则会影响病毒产量，最终导致病毒收获液滴度不高，抗原较低。亟需找到能够很好地维持MRC
‑
5细胞生长，并且，能够确保在狂犬病毒培养过程中得到高滴度和高抗原含量病毒收获液的病毒维持液。
技术实现思路
[0006]为解决上述问题，本专利技术提供了一种病毒维持液，所述病毒维持液的成分包含日水培养基以及培养基补充剂；所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白、甘氨酸、山梨醇、谷氨酰胺以及碳酸氢钠，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白、山梨醇、谷氨酰胺以及碳酸氢钠，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白、甘氨酸、谷氨酰胺以及碳酸氢钠。
[0007]在本专利技术的一种实施方式中，所述甘氨酸在病毒维持液中的浓度为0～0.7g/100mL；所述山梨醇在病毒维持液中的浓度为0～1.4g/100mL。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述甘氨酸在病毒维持液中的浓度为0.2～0.7g/100mL。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述甘氨酸在病毒维持液中的浓度为0.5g/100mL；
所述山梨醇在病毒维持液中的浓度为1.0g/100mL。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，所述人血白蛋白在病毒维持液中的浓度为0.1～0.5g/100mL；所述谷氨酰胺在病毒维持液中的浓度为0.01～0.05g/100mL；所述碳酸氢钠在病毒维持液中的浓度为0.0375～0.225g/100mL。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述人血白蛋白在病毒维持液中的浓度为0.2g/100mL；所述谷氨酰胺在病毒维持液中的浓度为0.03g/100mL；所述碳酸氢钠在病毒维持液中的浓度为0.075g/100mL。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白溶液、甘氨酸溶液、山梨醇溶液、谷氨酰胺溶液以及碳酸氢钠溶液，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白溶液、山梨醇溶液、谷氨酰胺溶液以及碳酸氢钠溶液，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白溶液、甘氨酸溶液、谷氨酰胺溶液以及碳酸氢钠溶液；所述人血白蛋白溶液的浓度为0.1～0.5g/100mL；所述甘氨酸溶液的浓度为0.1～0.3g/100mL；所述山梨醇溶液的浓度为0.2～0.6g/100mL；所述谷氨酰胺溶液的浓度为0.01～0.05g/100mL；所述碳酸氢钠溶液的浓度为0.0375～0.225g/100mL。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述人血白蛋白溶液的浓度为0.2g/100mL；所述甘氨酸溶液的浓度为0.2g/100mL；所述山梨醇溶液的浓度为0.4g/100mL；所述谷氨酰胺溶液的浓度为0.03g/100mL；所述碳酸氢钠溶液的浓度为0.075g/100mL。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，以体积百分比计，所述病毒维持液的成分包含日水培养基90.0～94.5％、人血白蛋白溶液1％、甘氨酸溶液0.0～3.5％、山梨醇溶液0.0～3.5％、谷氨酰胺溶液1％以及碳酸氢钠溶液1％。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，以体积百分比计，所述病毒维持液的成分包含日水培养基91.0～94.5％、人血白蛋白溶液1％、甘氨酸溶液1.0～3.5％、山梨醇溶液0.0～3.5％、谷氨酰胺溶液1％以及碳酸氢钠溶液1％。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，以体积百分比计，所述病毒维持液的成分包含日水培养基92％、人血白蛋白溶液1％、甘氨酸溶液2.5％、山梨醇溶液2.5％、谷氨酰胺溶液1％以及碳酸氢钠溶液1％。
[0017]本专利技术还提供了一种制备人二倍体细胞狂犬病疫苗病毒液的方法，所述方法为：使用细胞培养液对MRC
‑
5细胞进行细胞培养，得到宿主细胞；将宿主细胞进行消化后，使用细胞培养液对宿主细胞进行重悬，得到宿主细胞悬液；将狂犬病毒接种至宿主细胞悬液中进行感染培养，得到经病毒感染的宿主细胞；将经病毒感染的宿主细胞进行洗涤后，在经病毒感染的宿主细胞中加入上述病毒维持液进行病毒培养，得到人二倍体细胞狂犬病疫苗病毒液。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述方法包含如下步骤：
[0019]步骤一：将MRC
‑
5细胞接种至添加有细胞培养液的培养容器中进行细胞培养，得到宿主细胞；将胰酶添加至培养容器中对宿主细胞进行消化后，在培养容器中加入细胞培养液对宿主细胞进行重悬，得到宿主细胞悬液；
[0020]步骤二：将狂犬病毒接种至含有宿主细胞悬液的培养容器中进行感染培养，得到经病毒感染的宿主细胞；使用缓冲液洗涤培养容器中的经病毒感染的宿主细胞后，在培养容器中加入上述病毒维持液进行病毒培养，得到人二倍体细胞狂犬病疫苗病毒液。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，所述细胞培养的温度为36.5～37.5℃、时间为120～168h；所述感染培养的温度为36.5～37.5℃、时间为120～168h；所述病毒培养的温度为36.5～37.5℃，所述病毒培养过程中，每隔18～26h收获一次人二倍体细胞狂犬病疫苗病毒液，共收获1～5本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种病毒维持液，其特征在于，所述病毒维持液的成分包含日水培养基以及培养基补充剂；所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白、甘氨酸、山梨醇、谷氨酰胺以及碳酸氢钠，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白、山梨醇、谷氨酰胺以及碳酸氢钠，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白、甘氨酸、谷氨酰胺以及碳酸氢钠。2.如权利要求1所述的病毒维持液，其特征在于，所述甘氨酸在病毒维持液中的浓度为0～0.7g/100mL；所述山梨醇在病毒维持液中的浓度为0～1.4g/100mL。3.如权利要求2所述的病毒维持液，其特征在于，所述甘氨酸在病毒维持液中的浓度为0.2～0.7g/100mL。4.如权利要求1～3任一项所述的病毒维持液，其特征在于，所述人血白蛋白在病毒维持液中的浓度为0.1～0.5g/100mL；所述谷氨酰胺在病毒维持液中的浓度为0.01～0.05g/100mL；所述碳酸氢钠在病毒维持液中的浓度为0.0375～0.225g/100mL。5.如权利要求1～3任一项所述的病毒维持液，其特征在于，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白溶液、甘氨酸溶液、山梨醇溶液、谷氨酰胺溶液以及碳酸氢钠溶液，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白溶液、山梨醇溶液、谷氨酰胺溶液以及碳酸氢钠溶液，或者，所述培养基补充剂的成分包含人血白蛋白溶液、甘氨酸溶液、谷氨酰胺溶液以及碳酸氢钠溶液；所述人血白蛋白溶液的浓度为0.1～0.5g/100mL；所述甘氨酸溶液的浓度为0.1～0.3g/100mL；所述山梨醇溶液的浓度为0.2～0.6g/100mL；所述谷氨酰胺溶液的浓度为0.01～0.05g/100mL；所述碳酸氢钠溶液的浓度为0.0375～0.225g/100mL。6.如权利要求5所述的病毒维持液，其特征在于，以体积百分比计，所述病毒维持液的成分包含日水培养基90.0～94.5％、人血白蛋白溶液1％、甘氨酸溶液0.0～3.5％、山梨醇溶液0.0～3.5％、谷氨酰胺溶液1％以及碳酸氢钠溶液1％。7.如权利要求6所述的病毒维持液，其特征在于，以体积百分比计，所述病毒维持液的成分包含日水培养基91.0～94.5％、人血白蛋白溶液1％、甘氨酸溶液1.0～3.5％、山梨醇溶液0.0～3.5％、谷氨酰胺溶液1％以及碳酸氢钠溶液1％。8.一种制备人二倍体细胞狂犬病疫苗病毒液的...
【专利技术属性】
技术研发人员：安祺，田大勇，赵玉瑛，
申请(专利权)人：北京赛尔富森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。