肝胆癌类器官培养液、培养试剂组合及培养方法技术

本申请涉及生物组织工程技术领域，公开一种肝胆癌类器官培养液，包括原代培养液和传代培养液，原代培养液和传代培养液均包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子。根据肝胆癌类器官的特性，在原代培养液中减去了辅助蛋白条件培养基和地塞米松，且提高了青霉素

【技术实现步骤摘要】
肝胆癌类器官培养液、培养试剂组合及培养方法


[0001]本申请涉及生物组织工程
，例如涉及一种肝胆癌类器官培养液、培养试剂组合及培养方法。

技术介绍

[0002]肝胆癌是肝的恶性肿瘤，包括肝癌、胆囊癌、胆管癌，这三种癌症早中期均有机会治好，对于晚期癌症治好可能性较小。但是，在临床上，肝胆癌的早期缺乏典型的临床表现，一旦出现症状和体症，疾病多已进入中晚期。
[0003]在体外构建的肝胆癌类器官是研究肝胆癌的优势模型。3D培养近年来被广泛应用，相较于传统2D培养更具有优势，为细胞提供更生理的环境。3D培养体系为细胞提供类似体内生长环境的基质，细胞通过与胞外基质间的联系形成一定的三维结构，与体内细胞生长情况更为相似。
[0004]在实现本公开实施例的过程中，发现相关技术中至少存在如下问题：3D培养过程中所采用的培养液是构建3D类器官的关键因素，目前针对肝胆癌类器官培养用的培养液种类少，且培养效果有限，且已有类器官培养基培养的类器官成形成率低，增殖缓慢。

技术实现思路

[0005]为了对披露的实施例的一些方面有基本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肝胆癌类器官培养液，其特征在于，包括原代培养液和传代培养液；其中，原代培养液包括条件培养基、基础培养基和复合生长因子，所述复合生长因子包括human EGF 40～100 ng/mL，HEPES 10～15 mM，Glutamax 1x，N2 1x，B27 1x，n
‑
Acetylcysteine1～2 mM，青霉素
‑
链霉素 1.5x～2x，Primocin 0.2～2 mg/mL，Niacinamide10 mM，Gastrin10～20 nM，Prostaglandin E2 1 μM，Y
‑
27632 5～15 μM，A83
‑
01 500～5000 nM，SB202190 3 μM，FGF 40～100 ng/mL，Forskolin 5～15 μM和TGFa 10～50 ng/mL；所述条件培养基为R
‑
spondin1条件培养基，R
‑
spondin1条件培养基的体积占条件培养基和基础培养基体积之和的8%～30%；传代培养液是在原代培养液的基础上，复合生长因子还包括地塞米松2～5 nM，且青霉素
‑
链霉素的含量为0.5x～1x；所述条件培养基还包括辅助蛋白条件培养基且所述辅助蛋白条件培养基包括Wnt
‑
3a条件培养基和/或Noggin条件培养基，其中，R
‑
spondin1条件培养基与辅助蛋白培养基的体积比为1﹕0.5～1，R
‑
spondin1条件培养基的体积占条件培养基和基础培养基体积之和的8%～30%。2.根据权利要求1所述的肝胆癌类器官培养液，其特征在于，在传代培养液中，复合生长因子包括human EGF 80 ng/mL，HEPES 12 mM，Glutamax 1x，N2 1x，B27 1x，n
‑
Acetylcysteine1.5 mM，青霉素
‑
链霉素 0.75x，Primocin 1 mg/mL，Niacinamide10 mM，Gastrin15 nM，Prostaglandin E2 1 μM，Y
‑
27632 10 μM，A83
‑
01 2000 nM，SB202190 3 μM，FGF 60 ng/mL，Forskolin 10 μM、地塞米松3 nM和TGFa 30 ng/mL。3.根据权利要求1所述的肝胆癌类器官培养液，其特征在于，在传代培养液中，R
‑
spondin1条件培养基和辅助蛋白条件培养基的体积比例为1﹕0.5～0.8；且传代培养液中R
‑
spondin1条件培养基体积与原代培养液中R
‑
spondin1条件培养基体积相同。4.根据权利要求3所述的肝胆癌类器官培养液，其特征在于，在传代培养液中，R
‑
spondin1条件培养基和辅助蛋白条件培养基的体积比例为1﹕0.7。5.根据权利要求1所述的肝胆癌类器官培养液，其特征在于，辅助蛋白培养基包括Wnt
‑
3a条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖荣荣，刘建闯，郭鸽，付燕，张晓会，周宇，
申请(专利权)人：北京大橡科技有限公司，
类型：发明
国别省市：