一种犬软骨肉瘤细胞系及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种犬软骨肉瘤细胞系及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。该犬软骨肉瘤细胞系，于2023年5月18日，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCCNO：C2023116。目前尚无可应用的犬软骨肉瘤细胞系，鉴于肿瘤细胞系的建立在肿瘤的基础研究中具有重要作用，本发明专利技术建立了一种犬软骨肉瘤细胞系(命名为Mango)，该细胞系可在体外连续传代培养而保持犬软骨肉瘤细胞特性不变，适合作为研发犬软骨肉瘤相关免疫治疗、诊断和药物的细胞材料。本发明专利技术为进一步探究犬软骨肉瘤的病因学、转移机制、耐药机理及临床干预等奠定了基础。机理及临床干预等奠定了基础。机理及临床干预等奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种犬软骨肉瘤细胞系及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种犬软骨肉瘤细胞系及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]软骨肉瘤是常见的恶性骨肿瘤，发病率仅次于骨肉瘤。犬作为伴侣动物与人类有着相似的饮食习性，作息规律以及生活环境，因此骨肿瘤患犬是研究人类骨肿瘤极佳的动物模型。在全球范围内，目前已建立的犬骨肿瘤细胞系并不多见，而犬软骨肉瘤细胞系更是未见报道。
[0003]鉴于肿瘤细胞系的建立在肿瘤的基础研究中具有重要作用，但是目前世界范围内无可应用的犬软骨肉瘤细胞系，因此，亟需建立一种犬软骨肉瘤细胞系，为进一步探究犬软骨肉瘤的病因学、转移机制、耐药机理及临床干预等奠定基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种犬软骨肉瘤细胞系及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术建立了一种犬软骨肉瘤细胞系，为进一步探究犬软骨肉瘤的病因学、转移机制、耐药机理及临床干预等奠定了基础。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种犬软骨肉瘤细胞系，所述犬软骨肉瘤细胞系于2023年5月18日，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2023116。
[0007]本专利技术还提供一种上述的犬软骨肉瘤细胞系的制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)将犬软骨肉瘤病灶组织进行消化处理后，分离得到消化液；
[0009](2)将所述消化液离心，去除上清后，加入含血清培养基制成细胞悬液，再经过原代培养和传代培养，得到所述犬软骨肉瘤细胞系。
[0010]进一步地，在步骤(1)中，所述消化处理采用胶原酶或中性蛋白酶进行。
[0011]进一步地，在步骤(1)中，所述消化处理的温度为37℃。
[0012]进一步地，在步骤(2)中，所述含血清培养基为含有20wt％胎牛血清和1wt％双抗溶液的DMEM培养基；所述双抗溶液中含有10kU/mL青霉素和10mg/mL链霉素。
[0013]进一步地，在步骤(2)中，所述原代培养在37℃，5％CO2的恒温培养箱中进行。
[0014]进一步地，在步骤(2)中，所述传代培养的培养基为含15wt％胎牛血清、1wt％L
‑
谷氨酰胺和1wt％双抗溶液的DMEM细胞培养基；所述双抗溶液中含有10kU/mL青霉素和10mg/mL链霉素。
[0015]进一步地，在步骤(2)中，所述传代培养的温度为37℃，气体环境为5％CO2/95％空气，湿度为饱和湿度。
[0016]本专利技术还提供上述的犬软骨肉瘤细胞系在研发犬软骨肉瘤相关免疫治疗方法、诊
断技术和治疗药物中的应用。
[0017]本专利技术还提供上述的犬软骨肉瘤细胞系在犬软骨肉瘤病因、转移机制或耐药机理研究中的应用。
[0018]本专利技术公开了以下技术效果：
[0019]目前尚无可应用的犬软骨肉瘤细胞系，鉴于肿瘤细胞系的建立在肿瘤的基础研究中具有重要作用，本专利技术建立了一种犬软骨肉瘤细胞系(命名为Mango)，该细胞系可在体外连续传代培养而保持犬软骨肉瘤细胞特性不变，适合作为研发犬软骨肉瘤相关免疫治疗、诊断和药物的细胞材料。本专利技术为进一步探究犬软骨肉瘤的病因学、转移机制、耐药机理及临床干预等奠定了基础。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为Mango细胞系取材来源；其中，A为金毛猎犬左前肢肩胛骨溶骨处；B为取材部位指示图；
[0022]图2为不同放大倍数下的犬软骨肉瘤病灶组织的组织触片；其中，A中标尺为50μm，B中标尺为100μm；
[0023]图3为不同放大倍数下的犬软骨肉瘤病灶组织的病理切片；其中，A中标尺为500μm，B中标尺为50μm；
[0024]图4为不同放大倍数下的犬软骨肉瘤病灶组织的Masson染色结果；其中，A中标尺为100μm，B中标尺为50μm；
[0025]图5为犬软骨肉瘤病灶组织细胞原代培养72h后的状态；
[0026]图6为犬软骨肉瘤病灶组织细胞原代培养10d后的状态；
[0027]图7为犬软骨肉瘤病灶组织细胞原代培养21d后的状态；
[0028]图8为Mango细胞系倒置显微镜下的细胞形态(10
×
)；
[0029]图9为Mango细胞系倒置显微镜下的细胞形态(20
×
)；
[0030]图10为不同放大倍数的透射电镜下Mango细胞形态及结构；其中，A中标尺为2μm，B中标尺为500nm；
[0031]图11为Mango细胞系染色体核型分析图；
[0032]图12为Mango细胞系染色体数量分析图
[0033]图13为40
×
(A)和100
×
(B)镜下，Mango细胞系的甲苯胺蓝染色图；其中，A中标尺为100μm，B中标尺为50μm；
[0034]图14为40
×
镜下，Mango细胞系的茜素红染色图；图中标尺为50μm；
[0035]图15为Mango细胞的免疫荧光染色与其肿瘤组织免疫组织化学染色图；
[0036]图16为BALB/c裸鼠荷瘤实验结果。
具体实施方式
[0037]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0038]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0039]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0040]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0041]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种犬软骨肉瘤细胞系，其特征在于，所述犬软骨肉瘤细胞系于2023年5月18日，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCCNO：C2023116。2.一种如权利要求1所述的犬软骨肉瘤细胞系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将犬软骨肉瘤病灶组织进行消化处理后，分离得到消化液；(2)将所述消化液离心，去除上清后，加入含血清培养基制成细胞悬液，再经过原代培养和传代培养，得到所述犬软骨肉瘤细胞系。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述消化处理采用胶原酶或中性蛋白酶进行。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述消化处理的温度为37℃。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述含血清培养基为含有20wt％胎牛血清和1wt％双抗溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱昌伟，周涵，王美磷，贺丽欣，李文萱，王潇，王晓维，陈思瑶，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：