一种高效的类器官包埋方法技术

本发明专利技术公开了高效的类器官包埋方法，包括以下步骤：用超纯水、琼脂糖粉和明胶制备琼脂糖

【技术实现步骤摘要】
一种高效的类器官包埋方法


[0001]本专利技术属于包埋方法
，具体涉及一种高效的类器官包埋方法。

技术介绍

[0002]类器官是指由胚胎干细胞、诱导多能干细胞、组织前体细胞或者成体细胞，在体外自组装形成的能部分模拟体内组织结构与功能的细胞聚合体，其能够模拟组织器官发生过程，保持相应的生理功能及病理状态,在基础和临床研究等方面具有广阔的应用前景。
[0003]借助病理学形态分析可以检测类器官的形态结构，目前类器官一般使用以下两种方式进行包埋：第一种即固定后直接脱水、透明、浸蜡包埋，但是由于类器官体积小，结构复杂，容易出现样品丢失、形态结构被破坏等问题，因此要求研究者进行类器官包埋时提高样本量，造成实验成本的增加。此外，目前有研究报道，使用琼脂糖进行类器官预包埋后再进行样本的脱水、透明、浸蜡包埋等操作，但该方法仍然存在问题，单独使用琼脂糖作为预包埋材料时，其使用浓度对包埋结果影响较大。一方面如果琼脂糖使用浓度低，形成的琼脂糖凝胶柔软，容易在转移过程中发生破碎，造成类器官的损失；另一方面，如果使用浓度较高，则影响后续的脱水及透明过程，琼脂糖凝胶在脱水过程中发生皱缩聚集现象明显，在类器官周围出现明显的“胶圈”，影响美观。因此有必要设计一种适用于类器官的包埋方法，解决类器官包埋过程中样本丢失、结构损伤等问题。

技术实现思路

[0004]本申请的主要目的在于提供一种使用琼脂糖
‑
明胶溶液进行预包埋，以减少类器官在操作过程中的损失，又可以维持类器官原有的形态，避免其结构被破坏的高效的类器官包埋方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种高效的类器官包埋方法，包括以下步骤：
[0007](1)用超纯水、琼脂糖粉和明胶制备琼脂糖
‑
明胶溶液；
[0008](2)向预包埋类器官中加入4％多聚甲醛混合，进行固定，一般固定2h以上；
[0009](3)使用伊红溶液标记类器官，采用预热的琼脂糖
‑
明胶溶液包裹固定后的类器官，离心，凝固处理得类器官胶块；
[0010](4)将类器官胶块经脱水、透明、浸蜡包埋处理即可。
[0011]琼脂糖是从海洋红藻中提取的生物惰性多糖，其中氢键和静电相互作用使琼脂糖分子间产生螺旋结构，然后形成水凝胶。明胶是胶原蛋白不可逆水解得到的产物。其在37℃下，溶解为溶胶，但当温度降低(<29℃)时，它可以形成凝胶。本专利技术使用的琼脂糖
‑
明胶溶液进行类器官预包埋，其中琼脂糖作为被广泛使用的预包埋材料，其凝胶后具有一定的力学性能，如硬度、粘弹性等；而明胶作为一种凝胶剂，具有更低的液化点和凝固点。经过反复实验，两者单独使用效果不佳，配合使用效果较好。这是因为，一方面两者配合使用增加凝固后的硬度，方便后续操作。另一方面两者配合降低了各自的使用浓度，达到降低融点、提
高融化速度的目的，并且低浓度的琼脂糖
‑
明胶不会对染色背景产生影响。因此，使用的琼脂糖
‑
明胶溶液进行类器官预包埋，既可以减少类器官在操作过程中的损失，又可以维持类器官原有的形态，避免其结构被破坏，且不会对染色背景产生影响。
[0012]上述一种高效的类器官包埋方法，作为一种优选的实施方案，步骤(1)中，超纯水、琼脂糖粉和明胶的重量比为：100
‑
200：4
‑
8：1
‑
2。
[0013]琼脂糖
‑
明胶溶液的制备方法为：称取琼脂糖粉、明胶加入锥形瓶中，再向锥形瓶中加入超纯水，采用微波炉高火2
‑
3min加热以溶解琼脂糖粉和明胶，得到琼脂糖
‑
明胶溶液。制备完成后，置于4℃进行长期保存。使用时，将其置于沸水中加热融化即可，反复重融使用三次，均不会对结果产生影响。
[0014]上述一种高效的类器官包埋方法，作为一种优选的实施方案，步骤(2)中，将预包埋类器官置于0.6mL离心管中，加入4％的多聚甲醛固定2h，所得每毫升固定液中预包埋类器官的数量为2000
‑
4000个。
[0015]上述一种高效的类器官包埋方法，作为一种优选的实施方案，步骤(3)中，琼脂糖
‑
明胶溶液使用前用沸水溶解，置于60℃水浴锅中进行预热保温，避免在操作过程中琼脂糖
‑
明胶溶液凝固。
[0016]上述一种高效的类器官包埋方法，作为一种优选的实施方案，琼脂糖
‑
明胶溶液包裹固定后的类器官的方法为：离心去除离心管中固定液，添加1μL伊红溶液进行染色，标记类器官位置，使用预热后的移液吸头吸取20μL琼脂糖
‑
明胶溶液转移至装有类器官沉淀的0.6mL离心管中，轻轻吹打，使类器官被琼脂糖
‑
明胶溶液完全包裹。(上述操作均在水浴锅中进行，移液吸头使用前需要预热，使温度保持在60℃避免琼脂糖
‑
明胶溶液在转移或混匀过程时，由于低温凝固在移液吸头中，造成类器官的损失)。类器官被琼脂糖
‑
明胶溶液包裹后，在液面上方沿离心管壁缓慢加入100μL琼脂糖
‑
明胶溶液。
[0017]上述一种高效的类器官包埋方法，作为一种优选的实施方案，所述离心的离心的转速为1000rpm/min，在此条件下的离心时间为30s。
[0018]上述一种高效的类器官包埋方法，作为一种优选的实施方案，所述凝固处理为：将类器官
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琼脂糖
‑
明胶混合块置于4℃冰箱中15
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20min。
[0019]优选地，所述类器官为肠类器官、肺类器官及乳腺类器官。
[0020]本专利技术的有益效果为：
[0021]1.本专利技术所述高效的类器官包埋方法，使用琼脂糖
‑
明胶溶液进行预包埋，降低了琼脂糖粉和明胶的使用浓度，避免高浓度琼脂糖粉或明胶在脱水透明过程中，因皱缩对染色背景产生影响，减少了类器官在操作过程中的损失，又可以维持类器官原有的形态，避免其结构被破坏。
[0022]2.本专利技术所述高效的类器官包埋方法减少了类器官因直接脱水、透明出现样本丢失、结构损伤的情况，且整个操作可在同一离心管中进行，避免在转移过程中类器官的损失。
[0023]本专利技术所述高效的类器官包埋方法在包埋前使用伊红试剂标记类器官，并同时通过短时间的低速离心使得类器官分布更密集，制成石蜡切片后，同一切面上的样本数量更多，便于后续染色观察等病理检测。
附图说明
[0024]图1为高效的类器官包埋方法操作流程图；
[0025]图2为实施例1所述高效的类器官包埋方法所述肺癌类器官结构形态放大100倍的结构图；
[0026]图3为实施例1所述高效的类器官包埋方法所述肺癌类器官结构形态放大400倍的结构图；
[0027]图4为对比例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效的类器官包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用超纯水、琼脂糖粉和明胶制备琼脂糖
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明胶溶液；(2)向预包埋类器官中加入4％多聚甲醛混合，进行固定；(3)使用伊红溶液标记类器官，采用预热的琼脂糖
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明胶溶液包裹固定后的类器官，离心，凝固处理得类器官胶块；(4)将类器官胶块经脱水、透明、浸蜡包埋处理即可。2.根据权利要求1所述一种高效的类器官包埋方法，其特征在于，步骤(1)中，超纯水、琼脂糖粉和明胶的重量比为：100
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200：4
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8：1
‑
2。3.根据权利要求1所述一种高效的类器官包埋方法，其特征在于，步骤(2)中，每毫升固定液中，预包埋类器官的数量为2000
‑
4000个。4.根据权利要求1所述一种高效的类器官包埋方法，其特征在于，步骤(3)中，琼脂糖
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明胶溶液预热的温度为6...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊辉，张妹，聂盼，黄璘，
申请(专利权)人：北京嘉士腾医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：