本发明专利技术公开了一种景天三七内生天蓝黄链霉菌及其应用，属于微生物技术领域。发明专利技术涉及的景天三七内生天蓝黄链霉菌(Streptomycescoelicoflavus)，于2022年09月23日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株保藏名称为：MEP0301，保藏编号为：CGMCCNo.25778。其可显著促进景天三七中总黄酮及总三萜含量的提高，且能够人工培养，遗传稳定，易于规模化生产。该菌株可用于景天三七的人工种植，能够有效提高药材的质量，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种景天三七内生天蓝黄链霉菌及其应用
[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种景天三七内生天蓝黄链霉菌及其应用及其应用。
技术介绍
[0002]景天三七(Sdeum aizoon L.)为景天科景天属植物，又名“养心草”、“土三七”，是中国传统的药食两用植物，全年可采集，全草或根均可入药或食用。景天三七性平，味甘微酸，归心、肝经，具有散瘀止痛、凉血止血、消炎及安神等功效。其含有黄酮类、三萜类、多糖类等多种有效活性成分，其中黄酮类物质是景天三七中一类含量丰富且种类多样的重要天然活性成分，常作为药材质量控制指标。黄酮类物质具有明确广泛的药理作用，如抗氧化、抗胃溃疡、神经保护、抗心肌缺血、降血压、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性。近年来，由于其易于栽培种植，适应环境能力强，景天三七已被大量种植，广泛分布于我国东北、西北、华北及长江流域各地区。景天三七因其较高的营养价值，已被开发成为一种新兴的保健蔬菜。随着人们生活水平的提高，养生保健意识越来越强，景天三七在制药、保健食品等领域的需求在不断扩增，人工种植是满足其需求量增加的有效途径。但目前人工种植景天三七存在滥用化肥、农药等现象，导致人工种植的景天三七生长年限缩短，品质变差。如何合理减少化肥的使用，找到绿色、生态的促进景天三七生长，提高其有效活性成分方式，对保证景天三七药材的质量具有重要意义。
[0003]植物内生菌是指其生活史中某一阶段或整个阶段生活在健康植物组织或器官内，并对宿主植物没有引起明显病害症状的一类微生物群。植物内生菌作为一类重要的微生物资源，在对植物的生长发育、活性成分的积累、抗逆性的提高等方面具有重要的促进作用。景天三七植物内部寄居着大量与其生长发育密切相关的微生物类群，影响着其营养吸收、免疫调节、抗病害等各方面的能力。因此通过施加具有提质作用的有益内生菌，改善景天三七根际微生态环境，提高其药材的质量，这将在保障其药材的有效性、安全性方面具有巨大的应用潜力。
[0004]目前人工种植景天三七主要是依赖传统化肥来促进其生长，一方面持续使用化肥对土壤状态会产生持续的影响，同时对周围环境生态也会产生影响，目前并无人工种植景天三七使用菌种提高产量，缩短生长周期的记载。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的:针对现有技术的不足之处，提供一种景天三七内生天蓝黄链霉菌及其应用及其应用，能够有效提高产量，缩短生长周期，少用或者不用化肥，提高景天三七生长品质，能够有效促进景天三七总黄酮和总三萜积累中的应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的一种景天三七内生天蓝黄链霉菌，所述景天三七内生天蓝黄链霉菌的分类明命名为天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号
院3号中国科学院微生物研究所，菌株保藏名称为：MEP0301，保藏编号为：CGMCCNo.25778，保藏日期为2022年9月23日。
[0007]进一步，其应用促进景天三七中总黄酮及总三萜含量的提高。
[0008]一种制备景天三七内生天蓝黄链霉菌菌剂的方法，将所述天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)进行如下处理：
[0009]将菌株接种于新鲜的高氏一号液体培养基中，于28℃摇床，200rpm/min培养5d，活化菌株；
[0010]按1％的比例将已活化好菌液转接于高氏一号液体培养基中，28℃，200rpm/min摇床培养5d，
[0011]离心收集菌体，用无菌水洗涤收集菌体2次，再次离心收集菌体，并用无菌水将菌体重悬，调整菌液浓度为OD
600
＝0.5。
[0012]进一步，用菌液对景天三七植株进行灌根处理，每株苗灌根1mL，从而促进景天三七总黄酮及总三萜含量的提高。
[0013]进一步，所述菌剂为微生物肥料。
[0014]一种组合物，包含景天三七内生天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)。
[0015]本专利技术的菌株MEP0301是从采自徐州沛县的野生景天三七根部采用内生细菌分离纯化技术分离获得的，经分子鉴定表明其为天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)，将其编号为MEP0301。具体分离纯化方法如下：
[0016]1)取采自徐州沛县的野生景天三七根部作为分菌材料，称取根部1g材料，用流水冲洗20min，将灰尘和砂砾洗净，然后将冲洗过后的样品放置于超声波清洗机中超声清洗30min，进一步清洗根部表面残存灰尘及泥沙。之后在超净工作台内将冲洗后的样本先用75％乙醇浸泡90s，无菌水冲洗1次，然后用2％次氯酸钠浸泡8min，无菌水洗3遍。将表面消毒后的样本放入研钵，加9mL无菌水研磨均匀，并将研磨液用无菌水进行梯度稀释(10
‑1、10
‑2)，然后将研磨原液及稀释液(10
‑1、10
‑2)分别涂布于高氏一号固体培养基，并于28℃培养5
‑
7d，直至长出单菌落；
[0017]2)挑取单菌落于相同的高氏一号平板划线纯化，于28℃培养5
‑
7d；
[0018]3)重复步骤2)并挑选单菌，直至获得纯培养物。
[0019]本专利技术所用的培养基包括：
[0020]高氏一号液体培养基：KNO31g；K2HPO40.5g；MgSO4·
7H2O 0.5g；NaCl 0.5g；FeSO4·
7H2O 0.01g；可溶性淀粉20g；蒸馏水1000mL，PH＝7.4
‑
7.6。
[0021]高氏一号固体培养基：KNO31g；K2HPO40.5g；MgSO4·
7H2O 0.5g；NaCl 0.5g；FeSO4·
7H2O 0.01g；可溶性淀粉20g；琼脂20g；蒸馏水1000mL，PH＝7.4
‑
7.6。
[0022]上述培养基均为常规培养基，使用前需进行常规的灭菌。
[0023]有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点是：
[0024](1)本专利技术分离获得的天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)MEP0301能明显提高景天三七中总黄酮及总三萜的含量。该菌株可作为微生物菌肥，用于景天三七的人工种植，提升其药材的质量，保证药材使用的安全性和有效性，同时在一定程度上还可以减轻化肥滥用带来的环境污染问题。
[0025](2)本专利技术的天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)MEP0301培养操作过
程简单、遗传稳定、易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
[0026]本专利技术从植物内生菌的角度出发，利用景天三七内生菌MEP0301有效提高了景天三七次级代谢产物的含量，本专利技术提供的菌株可作为微生物菌肥，取代或降低传统化肥等肥料的使用，用于人工种本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种景天三七内生天蓝黄链霉菌，其特征在于：所述景天三七内生天蓝黄链霉菌的分类明命名为天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌株保藏名称为：MEP0301，保藏编号为：CGMCC No.25778，保藏日期为2022年9月23日。2.根据权利要求1所述景天三七内生天蓝黄链霉菌的应用，其特征在于：促进景天三七中总黄酮及总三萜含量的提高。3.一种制备景天三七内生天蓝黄链霉菌菌剂的方法，其特征在于，将权利要求1所述天蓝黄链霉菌(Streptomyces coelicoflavus)进行如下处理：将菌株接种于新鲜的高氏一号液体培养基中，于28℃摇床，200rpm/min培养5d，活化菌株；按1％的比例将已活化好菌液转接于高氏一号液体培养基中，28℃，200rpm/min摇床培养5d，离心收集菌体，用无菌水洗涤收集菌体2次，再次离心收集菌体，并用无菌水将菌体重悬，调整菌液浓度为OD
600
＝0.5。4.根据权利要求3所述景天三七内生天蓝黄链...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋继宏，李露丹，曹小迎，吴宣，徐靓，徐丹，盛译萱，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：
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