MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备治疗结直肠癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备治疗结直肠癌的药物中的应用，本发明专利技术还提供了杂交瘤细胞株3G7、抗MS4A4A单克隆抗体。本发明专利技术通过基础实验在细胞水平证实抗MS4A4A单抗处理可抑制巨噬细胞向M2型极化。通过体内动物实验发现，抗MS4A4A单抗治疗可显著延缓结直肠癌进展，并可促使肿瘤内CD8+T淋巴细胞活化，抑制M2型巨噬细胞浸润。抑制M2型巨噬细胞浸润。

【技术实现步骤摘要】
MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备治疗结直肠癌的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)是一种常见的消化系统恶性肿瘤，其发病率在全球恶性肿瘤中居第三位，死亡率高居第二位。在我国，结直肠癌的发病率和死亡率有逐年上升及年轻化的趋势。
[0003]肿瘤细胞的生长依赖于周围复杂多样的微环境，彼此之间的相互作用进一步影响了肿瘤本身的行为，而微环境中各类免疫细胞间的相互制衡对于肿瘤控制至关重要。其中，肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophage，TAM)是TME中数量最多且功能可塑性最强的一类炎症细胞群，占所有炎症细胞总数的30％
‑
50％。TAM可极化为经典激活(M1)表型和替代激活(M2)表型。大量证据表明，微环境中的TAM往往受到肿瘤细胞驯化并向M2型极化。当TAM向M2型极化时，其可分泌多种免疫抑制性细胞因子，同时可促使肿瘤对免疫检查点抑制剂治疗产生抵抗。因此，抑制TAM向M2型极化可能是逆转结直肠癌免疫抑制微环境及增强抗肿瘤免疫应答的关键环节之一。
[0004]据文献报道，M2型TAM发挥免疫抑制作用最重要的途径是引发效应T细胞耗竭。这些耗竭的T细胞主要表现为：
①
T细胞共抑制性受体(Inhibitory receptors，IRs，包括：PD
‑
1、TIGIT、CTLA4、LAG3、TIM3和CD160)高表达；
②
丧失对肿瘤细胞进行有效免疫识别及杀伤的效应功能(如IFN
‑
γ、IL
‑
2和GZMB等抗肿瘤细胞因子的生成功能障碍)；
③
增殖能力受限等。而如何抑制或逆转肿瘤微环境内T细胞耗竭则是目前肿瘤免疫治疗研究的热点与难点。
[0005]MS4A4A属于MS4A蛋白家族的一员，在肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophage，TAM)中特异性表达，与巨噬细胞脂筏中Dectin
‑
1受体的功能相关，并且为Syk依赖性信号通路完全激活所必需。MS4A4A在巨噬细胞质膜和细胞内均可表达，其表达可调控巨噬细胞分泌某些可溶性蛋白。最近的研究表明，MS4A4A可能是M2型巨噬细胞的新型标志物，并且与胃癌、肾癌预后不良相关。然而，在结直肠癌中，MS4A4A在TAM中发挥的功能、参与调控免疫微环境的分子机制及与肿瘤发生发展的关系依旧不明。由于缺乏相关研究，目前尚无针对跨膜蛋白MS4A4A的体内动物实验用单抗的实验研究成果报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的之一提供MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备治疗结直肠癌的药物中的应用，本专利技术还提供了杂交瘤细胞株3G7、抗MS4A4A单克隆抗体。
[0007]为实现上述目的，所采取的技术方案：本专利技术提供了MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。
[0008]本专利技术提供了MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备抑制CD8+T淋巴细胞
耗竭的药物中的应用。
[0009]本专利技术提供了MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备抑制巨噬细胞向M2型极化的药物中的应用。
[0010]本专利技术提供了MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备抑制肿瘤内M2型巨噬细胞浸润的药物中的应用。
[0011]优选地，所述抗MS4A4A单克隆抗体由杂交瘤细胞株3G7分泌产生，所述杂交瘤细胞株3G7的保藏编号为GDMCC No：62924。
[0012]优选地，所述肿瘤为结直肠癌。
[0013]本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株3G7，所述杂交瘤细胞株3G7的保藏编号为GDMCC No：62924。
[0014]本专利技术提供了一种抗MS4A4A单克隆抗体，所述抗MS4A4A单克隆抗体由上述所述的杂交瘤细胞株3G7分泌产生。
[0015]本专利技术提供了一种治疗结直肠癌的药物，其特征在于，包括上述所述的抗MS4A4A单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。
[0016]有益效果：
[0017]本专利技术通过基础实验在细胞水平证实抗MS4A4A单抗处理可抑制巨噬细胞向M2型极化。通过体内动物实验发现，抗MS4A4A单抗治疗可显著延缓结直肠癌进展，并可促使肿瘤内CD8+T淋巴细胞活化，抑制M2型巨噬细胞浸润。
附图说明
[0018]图1：本专利技术实施例1中MS4A4A在多种肿瘤内的TAM中显著高表达。
[0019]图2：本专利技术实施例2中MS4A4A高表达与多种肿瘤不良预后的相关性。
[0020]图3：本专利技术实施例3中抗MS4A4A单抗的制备及特异性检测。
[0021]图4：抗MS4A4A单抗(clone 3G7)处理可明显回复MC38 CM所诱导的M2型标志物上调(Mrc1、Mgl1和Tgfb1)，并可不同程度地促进部分M1型巨噬细胞标志物的表达(Nos2、Tnfa)。
[0022]图5：抗MS4A4A单抗(clone 3G7)明显回复MC38 CM对巨噬细胞M2极化的诱导作用并促进巨噬细胞向M1极化。
[0023]图6：本专利技术实施例5中抗MS4A4A单抗治疗可延缓结直肠癌进展的图片。
[0024]图7：本专利技术实施例6中抗MS4A4A单抗(clone 3G7)治疗减少瘤内耗竭型CD8
+
T淋巴细胞的比例。
具体实施方式
[0025]为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0026]本专利技术首先通过生物信息学分析分析发现,MS4A4A在肿瘤相关巨噬细胞中特异性高表达，且其高表达与多种肿瘤患者的不良预后相关。随后，通过基础实验在细胞水平发现抗MS4A4A单抗可抑制巨噬细胞向M2型极化。最后，通过体内动物实验证实，抗MS4A4A单抗可以显著延缓结直肠癌生长，并抑制肿瘤内M2型巨噬细胞浸润和CD8
+
T淋巴细胞耗竭，表明
MS4A4A可能是一种很有前景的结直肠癌治疗靶点。
[0027]实施例中涉及的杂交瘤细胞3G7已于2022年10月26日递交广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏地址为中国广东省科学院微生物研究所，保藏编号为GDMCC No.62924。
[0028]实施例1：MS4A4A在多种肿瘤内的M2型TAM中显著高表达
[0029]实验方法和结果如下(结果如图1所示)：
[0030]运用GEPIA 2021(Gene Expression Profiling Interactive Analysis 2021)在线数据库分析MS4A4A在结直肠癌、肝癌、胃癌、膀胱尿路上皮癌、食管癌等不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。2.MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备抑制CD8+T淋巴细胞耗竭的药物中的应用。3.MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备抑制巨噬细胞向M2型极化的药物中的应用。4.MS4A4A作为靶点或抗MS4A4A单克隆抗体在制备抑制肿瘤内M2型巨噬细胞浸润的药物中的应用。5.如权利要求1
‑
4任一所述的应用，其特征在于，所述抗MS4A4A单克隆抗体由杂交瘤细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：方媛，李永盛，邓海军，沈智勇，詹益芝，柴振，刘征宇，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：