大肠埃希氏菌sRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种大肠埃希氏菌小RNAsRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用和方法，属于基因工程技术领域。本发明专利技术提供了一种大肠埃希氏菌小RNAsRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用，所述sRNA0004的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。在本发明专利技术中，大肠埃希氏菌非编码小RNAsRNA0004和细菌耐药能力相关。sRNA0004的过表达会升高细菌的耐药性，而通过降低sRNA0004的表达，则可以降低细菌的耐药性。本发明专利技术提供的大肠埃希氏菌小RNAsRNA0004调控制剂在改变细菌耐药能力领域具有重要意义，进而为临床耐药菌株的感染的治疗提供了一条途径。条途径。条途径。

【技术实现步骤摘要】
大肠埃希氏菌sRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及大肠埃希氏菌sRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]生物体内的RNA包括编码RNA和非编码RNA(non
‑
coding RNA，ncRNA)，其中非编码RNA广泛调控生物体内各项生命活动。与真核生物相同，在原核生物中也存在一些非编码RNA片段，被称作非编码小RNA(small non
‑
coding RNA，sRNA)，从转录后水平影响原核生物的生理代谢以及致病菌的毒力和耐药性等。
[0003]细菌sRNAs是一类长度介于40nt～500nt不编码蛋白质的RNA分子，其半衰期短，由一段多变的靶标结合序列、保守序列和不依赖于Rho因子的转录终止序列等3部分组成，其形成的二级结构多存在茎环结构，该结构可显著提高sRNAs的稳定性。根据与靶基因配对方式的不同，细菌sRNAs分为顺式编码的sRNAs(Cis
‑
encoded s RNAs)和反式编码的sRNAs(Trans
‑
encoded sRNAs)。反式编码的sRNAs是由与编码靶标mRNA的基因完全不同的基因组位置转录而来，这些sRNAs与靶标mRNAs的互补性较小且多依赖Hfq、ProQ、CsrA等RNA伴侣蛋白来维持其结构稳定性和功能的发挥。
[0004]1984年，Mizuno等首次发现大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)中存在一个174nt的sRNAmicF，可以在环境胁迫条件下通过RNA/RNA碱基配对的方式抑制外膜孔蛋白OmpF的翻译。21世纪以后，随着现代高通量技术的发展和生物信息学的进步，越来越多的参与细菌环境胁迫下调控的sRNA将浮出水面。截止目前，在sRNAmap数据库已记载了数百种sRNAs，其中以埃希氏菌和沙门氏菌中发现的最多。因此，关于sRNAs的研究更倾向于对sRNAs生物学功能的探究、靶基因的鉴定、sRNAs调控靶基因的分子作用机制以及sRNAs的应用前景等方面。而细菌中sRNA在抗生素存在下产生的遗传调控机制的研究则较少。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种大肠埃希氏菌小RNA sRNA0004调控制剂在调控抗生素产生的细菌耐药能力中的应用。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术提供了一种大肠埃希氏菌小RNA sRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用，所述sRNA0004基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]优选的，所述调控细菌耐药能力包括调控细菌耐氨基糖苷类抗生素的耐药能力和/或调控细菌耐碳青霉烯类抗菌药的耐药能力。
[0009]优选的，所述氨基糖苷类抗生素包括庆大霉素；所述碳青霉烯类抗菌药包括亚胺培南。
[0010]优选的，所述调控制剂包括正向调控制剂和负向调控制剂；
[0011]所述正向调控制剂包括sRNA0004过表达制剂；
[0012]所述负向调控制剂包括sRNA0004沉默制剂或降低sRNA0004表达的制剂。
[0013]优选的，所述sRNA0004过表达制剂包括上述技术方案所述sRNA0004基因的表达盒、载体或转基因细胞中的一种或两种以上。
[0014]优选的，所述细菌包括大肠埃希氏菌；所述大肠埃希氏菌包括产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌中的一种或两种以上。
[0015]本专利技术提供了一种抑制sRNA0004基因表达的MIM0004基因，所述MIM0004基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0016]本专利技术提供了一种降低sRNA0004表达的制剂，所述制剂包括上述技术方案所述MIM0004基因的表达盒、载体或转基因细胞中的一种或两种以上。
[0017]本专利技术还提供了一种降低大肠埃希氏菌小RNA sRNA0004表达的制剂在制备治疗大肠埃希氏菌耐药株系感染导致的疾病的药物中的应用，所述sRNA0004基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0018]优选的，所述大肠埃希氏菌包括产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌中的一种或两种以上。
[0019]本专利技术的有益效果：
[0020]本专利技术提供了一种大肠埃希氏菌小RNA sRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用，所述sRNA0004基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。在本专利技术中，大肠埃希氏菌非编码小RNA sRNA0004和细菌耐药能力相关，可以通过调控sRNA0004的表达实现调控细菌耐药性的效果，sRNA0004过表达制剂可以正向调控细菌的耐药性，降低sRNA0004表达的制剂可以负向调控细菌的耐药性，即sRNA0004的过表达可以升高细菌的耐药性，而sRNA0004沉默后，可以降低细菌的耐药性。本专利技术提供的大肠埃希氏菌小RNAsRNA0004调控制剂在改变细菌耐药能力领域具有重要意义，进而为耐药菌株感染的治疗提供一条途径。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为sRNA0004二级茎环结构图；
[0023]图2为peT28a
‑
sRNA0004表达载体的示意图；
[0024]图3为MIM0004序列的示意图；
[0025]图4为ptrC99a
‑
MIM0004干扰载体示意图；
[0026]图5为qRT
‑
PCR检测转基因大肠埃希氏菌中sRNA0004表达量的检测结果；
[0027]图6为含有重组质粒peT28a
‑
sRNA0004和ptrC99a
‑
MIM0004的大肠埃希氏菌MG1655的耐药分析结果图。
具体实施方式
[0028]本专利技术提供了一种大肠埃希氏菌小RNA sRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用，所述sRNA0004的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：5
’‑
TTGATAACTCCCCCAAAATAGTTCGAGTTGCAGAAAGGCGGCAAGCTCG AGAATTCCCGGGAGCTTACATCAGTAAGTGACCGGGATGAGCGAGCGAAG ATAACGCATCTGCGGCGCGAAATATGAAG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大肠埃希氏菌小RNAsRNA0004调控制剂在制备调控细菌耐药能力试剂盒中的应用，所述sRNA0004基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控细菌耐药能力包括调控细菌耐氨基糖苷类抗生素的耐药能力和/或调控细菌耐碳青霉烯类抗菌药的耐药能力。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述氨基糖苷类抗生素包括庆大霉素；所述碳青霉烯类抗菌药包括亚胺培南。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控制剂包括正向调控制剂和负向调控制剂；所述正向调控制剂包括sRNA0004过表达制剂；所述负向调控制剂包括sRNA0004沉默制剂或降低sRNA0004表达的制剂。5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述sRNA0004过表达制剂包括权利要求1所述sRNA0004基因的表达盒、载体或转基因细胞中的一种或两种以上。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细菌包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：白永杰，庞新跃，白娇红，孙冰洁，沈瑞乐，
申请(专利权)人：河南科技大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：