衔接多肽及其使用方法技术

本文描述了胞外囊泡的组合物，以及产生胞外囊泡的方法和系统。本文还描述了使用胞外囊泡的方法。泡的方法。泡的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】衔接多肽及其使用方法
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年8月5日提交的美国临时专利申请第63/061,749号的权益。根据35U.S.C.
§
119要求优先权。上述专利申请通过引用并入，如同在本文中完全阐述一样。援引并入
[0002]在本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用以其整体并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地通过引用并入一样。

技术介绍

[0003]胞外囊泡由多种细胞类型分泌。一般来说，胞外囊泡如外泌体、微囊泡和凋亡小体是膜结合的，并且可以装载有治疗药物。例如，外泌体是一种由大多数真核细胞分泌的膜结合的胞外囊泡。外泌体生物发生可能始于内体内陷挤压进入多囊泡体，形成腔内囊泡。如果多囊泡体与细胞的质膜融合，腔内囊泡可以作为外泌体释放。微囊泡从细胞膜表面出芽。另一方面，凋亡小体是从死亡细胞中释放出来的。外泌体、微囊泡和凋亡小体可以在体内或体外释放，如在细胞培养中释放。
[0004]胞外囊泡已经被探索用作用于包封和递送治疗剂的媒介物。将胞外囊泡引导至靶标通常具有挑战性，因为大多数胞外囊泡在肝、脾和/或肾中被降解。此外，设计和制造用于包封用于靶向的递送的治疗剂的胞外囊泡是耗时且昂贵的。例如，被设计成靶向一种细胞类型的胞外囊泡可能不能有效地靶向另一种细胞类型。因此，仍然需要可以容易地被修饰以靶向多种细胞类型的胞外囊泡。仍然还需要可以包封足够数量和质量的待递送至靶细胞的治疗剂的胞外囊泡。

技术实现思路

[0005]本公开提供了被设计成靶向多种细胞类型的胞外囊泡，所述多种细胞类型包含体内的不同细胞和器官以及与疾病或病症相关联的细胞。在一些情况下，本文提供的胞外囊泡可以容易地被修饰以特异性地结合至靶标。例如，它们可以含有结合至细胞表面标志物的胞外结构域(例如，胞外囊泡的膜内的跨膜蛋白的胞外结构域)。一般而言，本文提供的胞外囊泡包括具有胞外结构域和任选的结合至细胞表面标志物的跨膜结构域的衔接多肽。
[0006]在一些方面中，本文公开了包括至少一种胞外囊泡的组合物，所述胞外囊泡包括：至少一种衔接多肽，其包括以小于或等于10
‑9M的解离常数(Kd)与抗体的Fc区结合的肽序列，其中所述衔接多肽包括胞外结构域；与所述衔接多肽复合的所述抗体，其中所述抗体结合与患病的细胞相关联的第一细胞表面标志物；和至少一种治疗剂。在一些方面中，本文描述了包括至少一种胞外囊泡的组合物，所述胞外囊泡包括：至少一种衔接多肽，其包括与特异性地识别抗体的Fc区的Fc受体至少70％相同的肽序列，其中所述衔接多肽包括胞外结构域；与所述衔接多肽复合的所述抗体，其中所述抗体结合与患病的细胞相关联的第一细胞表面标志物；和至少一种治疗剂。在一些方面中，所述Fc受体是Fc
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γ受体、Fc
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α受体或Fc
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ε受体。在一些方面中，所述Fc受体包括FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)或FcγRIII(CD16)。在
一些方面中，所述Fc受体是CD64。在一些方面中，所述衔接多肽进一步包括结合与所述患病的细胞相关联的第二细胞表面标志物的靶向结构域，其中所述靶向结构域附接至所述衔接多肽的所述胞外结构域。在一些方面中，所述靶向结构域选自肿瘤归巢肽、肿瘤靶向结构域、组织靶向结构域、细胞穿透肽、病毒膜蛋白及其任何组合或片段。在一些方面中，所述患病的细胞是癌细胞或非癌性病变细胞。在一些方面中，所述第一细胞表面标志物包括EGFR、PD
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L1或ROR1。在一些方面中，所述第一细胞表面标志物和所述第二细胞表面标志物是不同的。在一些方面中，所述第一细胞表面标志物和所述第二细胞表面标志物是相同的。在一些方面中，所述抗体是人源化单克隆抗体。在一些方面中，所述抗体选自人源化抗EGFR抗体克隆C225、人源化抗ROR1抗体克隆2A2和人源化抗PD
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L1抗体克隆SP142。在一些方面中，所述人源化单克隆抗体包括IgG。在一些方面中，所述人源化单克隆抗体包括IgG1或IgG3。在一些方面中，所述抗体与所述衔接多肽非共价复合。在一些方面中，所述抗体的所述Fc区被配置为在酸性环境中与所述衔接多肽复合。在一些方面中，所述抗体的所述Fc区被配置为在酸性环境中从与所述衔接多肽的复合物中释放出来。在一些方面中，所述至少一种治疗剂在所述胞外囊泡中。在一些方面中，所述至少一种治疗剂在所述胞外囊泡的细胞外表面上表达。在一些方面中，所述至少一种治疗剂附接至所述胞外结构域。在一些方面中，所述至少一种治疗剂包括治疗性多核苷酸、治疗性多肽、治疗性化合物、抗癌药物或其组合。在一些方面中，所述治疗性多核苷酸包括信使RNA、微小RNA、shRNA或其组合。在一些方面中，所述胞外囊泡是外泌体、微囊泡或凋亡小体。在一些方面中，所述胞外囊泡是外泌体。
[0007]在一些情况下，本文描述了治疗对象的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的药物组合物，其中所述药物组合物包括本文所述的组合物。在一些方面中，所述药物组合物包括至少一种药学上可接受的赋形剂。在一些方面中，所述对象患有癌症或非癌性病变。在一些方面中，所述对象患有神经胶质瘤。在一些方面中，对象患有肌营养不良症。在一些方面中，所述肌营养不良症选自杜兴肌营养不良症、贝克肌营养不良症、面肩肱型肌营养不良症、先天性肌营养不良症和肌强直性营养不良症。在一些方面中，所述对象患有视网膜疾病。在一些方面中，所述视网膜疾病是色素性视网膜炎或莱伯氏先天性黑蒙。在一些方面中，所述药物组合物的所述治疗有效量包括治疗有效剂量。在一些方面中，以治疗有效的频率向所述对象施用所述治疗有效量的所述药物组合物。在一些方面中，以每年至少一次的频率向所述对象施用所述治疗有效量的所述药物组合物。在一些方面中，以每六个月至少一次的频率向所述对象施用所述治疗有效量的所述药物组合物。在一些方面中，以每月至少一次的频率向所述对象施用所述治疗有效量的所述药物组合物。在一些方面中，以每周至少一次的频率向所述对象施用所述治疗有效量的所述药物组合物。在一些方面中，所述药物组合物是水性制剂。在一些方面中，所述药物组合物被配制成用于注射。在一些方面中，所述药物组合物通过鼻内、鞘内、眼内、玻璃体内、视网膜、静脉内、肌内、心室内、大脑内、小脑内、脑室内、实质内、皮下或其组合被施用于所述对象。
[0008]在一些情况下，本文描述了产生组合物的方法，所述方法包括：用编码衔接多肽的至少一种异源多核苷酸转染胞外囊泡供体细胞，其中所述衔接多肽包括与Fc受体至少70％相同的肽序列，其中所述Fc受体识别抗体的Fc区；收集从所述胞外囊泡供体细胞释放的胞外囊泡，其中从所述胞外囊泡供体细胞释放的所述胞外囊泡表达所述衔接多肽，其中所述衔接多肽包括胞外结构域，并且其中所述胞外囊泡包括至少一种治疗剂；以及将所述抗体
与所述胞外结构域复合，其中所述抗体结合与患病的细胞相关联的第一细胞表面标志物。在一些方面中，所述Fc受体是Fc
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γ受体、Fc<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包括至少一种胞外囊泡，所述胞外囊泡包括：a.至少一种衔接多肽，所述衔接多肽包括以小于或等于10
‑9M的解离常数(Kd)与抗体的Fc区结合的肽序列，其中所述衔接多肽包括胞外结构域；b.与所述衔接多肽复合的所述抗体，其中所述抗体结合与患病的细胞相关联的第一细胞表面标志物；和c.至少一种治疗剂。2.根据权利要求1所述的组合物，其中与抗体的Fc区结合的所述肽序列与Fc受体至少70％相同。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述Fc受体是Fc
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γ受体、Fc
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α受体或Fc
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ε受体。4.根据权利要求2所述的组合物，其中所述Fc受体包括FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)或FcγRIII(CD16)。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述Fc受体是CD64。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述衔接多肽进一步包括结合与所述患病的细胞相关联的第二细胞表面标志物的靶向结构域，其中所述靶向结构域附接至所述衔接多肽的所述胞外结构域。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述靶向结构域选自肿瘤归巢肽、肿瘤靶向结构域、组织靶向结构域、细胞穿透肽、病毒膜蛋白及其任何组合或片段。8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述患病的细胞是癌细胞或非癌性病变细胞。9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一细胞表面标志物包括EGFR、PD
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L1或ROR1。10.根据权利要求6所述的组合物，其中所述第一细胞表面标志物和所述第二细胞表面标志物是不同的。11.根据权利要求6所述的组合物，其中所述第一细胞表面标志物和所述第二细胞表面标志物是相同的。12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体是人源化单克隆抗体。13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体选自人源化抗EGFR抗体克隆C225、人源化抗ROR1抗体克隆2A2和人源化抗PD
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L1抗体克隆SP142。14.根据权利要求12所述的组合物，其中所述人源化单克隆抗体包括IgG。15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述人源化单克隆抗体包括IgG1或IgG3。16.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体与所述衔接多肽非共价复合。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述抗体的所述Fc区被配置为在酸性环境中与所述衔接多肽复合。18.根据权利要求16所述的组合物，其中所述抗体的所述Fc区被配置为在酸性环境中从与所述衔接多肽复合中释放。19.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种治疗剂在所述胞外囊泡内。20.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种治疗剂在所述胞外囊泡的细胞外表面上表达。21.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种治疗剂附接至所述胞外结构域。22.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种治疗剂包括治疗性多核苷酸、治
疗性多肽、治疗性化合物、抗癌药物或其组合。23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述治疗性多核苷酸包括信使RNA、微小RNA、shRNA或其组合。24.根据权利要求1所述的组合物，其中所述胞外囊泡是外泌体、微囊泡或凋亡小体。25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述胞外囊泡是外泌体。26.一种治疗对象的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的药物组合物，其中所述药物组合物包括根据权利要求1至25中任一项所述的组合物。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述药物组合物包括至少一种药学上可接受的赋形剂。28.根据权利要求26所述的方法，其中所述对象患有癌症或非癌性病变。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述对象患有神经胶质瘤。30.根据权利要求26所述的方法，其中所述对象患有肌营养不良症。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述肌营养不良症选自杜兴氏肌营养不良症、贝克肌营养不良症、面肩肱型肌营养不良症、先天性肌营养不良症和肌强直性营养不良症。32.根据权利要求26所述的方法，其中所述对象患有视网膜疾病。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述视网膜疾病是色素性视网膜炎或勒伯氏先天性黑蒙。34.根据权利要求26所述的方法，其中所述对象以至少每天一次、每周一次、每月一次或每年一次的频率被施用所述治疗有效量的所述药物组合物。35.根据权利要求26所述的方法，其中所述药物组合物是水性制剂。36.根据权利要求26所述的方法，其中所述药物组合物被配制成用于注射。37.根据权利要求26所述的方法，其中所述药物组合物通过鞘内、眼内、玻璃体内、视网膜、静脉内、肌内、心室内、大脑内、小脑内、脑室内、实质内、皮下、鼻内或其组合被施用于所述对象。38.一种产生组合物的方法，所述方法包括：a.用编码衔接多肽的至少一种异源多核苷酸转染胞外囊泡供体细胞，其中所述衔接多肽包括与Fc受体至少70％相同的肽序列，其中所述Fc受体识别抗体的Fc区；b.收集从所述胞外囊泡供体细胞释放的胞外囊泡，其中从所述胞外囊泡供体细胞释放的所述胞外囊泡表达所述衔接多肽，其中所述衔接多肽包括胞外结构域，并且其中所述胞外囊泡包括至少一种治疗剂；和c.将所述抗体与所述胞外结构域复合，其中所述抗体结合与患病的细胞相关联的第一细胞表面标志物。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述Fc受体是Fc
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γ受体、Fc
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α受体或Fc
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ε受体。40.根据权利要求39所述的方法，其中所述Fc受体是FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)或FcγRIII(CD16)。41.根据权利要求40所述的方法，其中所述Fc受体是CD64。42.根据权利要求38所述的方法，其中所述衔接多肽进一步包括结合与所述患病的细胞相关联的第二细胞表面标志物的靶向结构域，其中所述靶向结构域附接至所述胞外结构域。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述第一细胞表面标志物或所述第二细胞表面标志物与癌细胞或非癌性病变细胞相关联。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述第一细胞表面标志物包括EGFR、PD
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L1或ROR1。45.根据权利要求43所述的方法，其中所述第一细胞表面标志物和所述第二细胞表面标志物是不同的。46.根据权利要求43所述的方法，其中所述第一细胞表面标志物和所述第二细胞表面标志物是相同的。47.根据权利要求42所述的方法，其中所述靶向结构域选自肿瘤归巢肽、肿瘤靶向结构域、组织靶向结构域、细胞穿透肽、病毒膜蛋白及其任何组合或片段。48.根据权利要求38所述的方法，其中所述至少一种治疗剂在所述胞外囊泡内。49.根据权利要求38所述的方法，其中所述至少一种治疗剂在所述胞外囊泡的细胞外表面上表达。50.根据权利要求38所述的方法，其中所述至少一种治疗剂附接至所述胞外结构域。51.根据权利要求38所述的方法，其中所述至少一种治疗剂包括治疗性多核苷酸、治疗性多肽、治疗性化合物、抗癌药物或其组合。52.根据权利要求51所述的方法，其中所述治疗性多核苷酸包括信使RNA、微小RNA、shRNA或其组合。53.根据权利要求38所述的方法，其中从所述胞外囊泡供体细胞释放的所述胞外囊泡是外泌体、微囊泡或凋亡小体。54.根据权利要求53所述的方法，其中从所述胞外囊泡供体细胞释放的所述胞外囊泡是外泌体。55.根据权利要求38所述的方法，其中转染所述胞外囊泡供体细胞包括电穿孔、微流体电穿孔、微通道电穿孔或纳米通道电穿孔。56.根据权利要求55所述的方法，其中所述微通道电穿孔或所述纳米通道电穿孔包括使用微孔图案化的硅晶片、纳米孔图案化的硅晶片、径迹蚀刻膜、陶瓷微孔膜、陶瓷纳米孔膜、其他多孔材料或其组合。57.根据权利要求56所述的方法，其中转染所述胞外囊泡供体细胞包括纳米通道电穿孔，并且其中所述至少一种异源多核苷酸经由位于生物芯片上的纳米通道被纳米电穿孔到所述胞外囊泡供体细胞中。58.根据权利要求38所述的方法，其中转染所述胞外囊泡供体细胞包括使用基因枪、微针阵列、纳米针阵列、超声处理或化学渗透。59.根据权利要求38所述的方法，其中所述至少一种异源多核苷酸是质粒。60.一种组合物，其包括至少一种胞外囊泡，所述胞外囊泡包括：a.至少一种衔接多肽，所述衔接多肽包括与结合至抗体的Fc区的Fc受体至少70％相同的肽序列，其中所述衔接多肽包括胞外结构域；b.与所述衔接多肽复合的所述抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：李利，江季霖，马一帆，
申请(专利权)人：鉴识生物系统有限公司，
类型：发明
国别省市：