一种阿维链霉菌纯种分离用培养基、制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种阿维链霉菌纯种分离用培养基、制备方法及其应用，所述培养基包括葡萄糖、牛肉粉、酵母膏、蛋白胨、硫酸镁、琼脂和水，所述培养基的pH为7.0；以百分重量计，其中，葡萄糖为0.5

【技术实现步骤摘要】
一种阿维链霉菌纯种分离用培养基、制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及菌株纯种分离
，具体涉及一种阿维链霉菌纯种分离用培养基、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]阿维菌素是由阿维链霉菌代谢产生的一种效果极佳的大环内酯类杀螨、杀虫剂；对蔬菜、果树、棉花、水稻等多种作物的相关害虫有良好防效，是目前世界上最有前途的生物杀虫杀螨剂。
[0003]目前阿维链霉菌发酵产生的阿维菌素中包括有结构类似的8种组分(AVMA1a AVMA1b AVMA2a AVMA2b AVMB1a AVMB1b AVMB2a AVMB2b)。其中B组分的生物活性优于A组分，尤以B1a活性最强，因此，为了获得产生B1a的优良菌株，则需要不断的对阿维菌素进行菌种的分离筛选工作，而在此工作中，由于菌落的培养周期长，纯种的分离是一个极时耗时的过程，严重影响了菌株的分离筛选的效率，而且在纯种的分离过程中，还存在相对较高的变异率，严重影响了菌株的性能稳定性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种阿维链霉菌纯种分离用培养基及其制备方法，其能够极大的缩短阿维链霉菌纯种分离过程中菌落的培养周期，降低菌落的变异率，提高菌种分离筛选的效率。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0006]技术方案一：
[0007]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，包括：葡萄糖、牛肉粉、酵母膏、蛋白胨、硫酸镁、琼脂和水，所述培养基的pH为7.0。
[0008]进一步的，以百分重量计，其中，葡萄糖为0.5
‑
0.7％；牛肉粉为0.08
‑
0.12％；酵母膏为0.08
‑
0.12％；蛋白胨为0.13
‑
0.17％。
[0009]进一步的，其中，硫酸镁为0.00008
‑
0.00012％。
[0010]进一步的，其中，琼脂为2％。
[0011]进一步的，一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，包括以下百分重量的各原料：
[0012][0013][0014]技术方案二：
[0015]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基的制备方法，包括：
[0016]步骤1：称取各原料，首先配制质量浓度为0.1％的硫酸镁溶液，然后将葡萄糖、牛肉粉、蛋白胨与蒸馏水混合溶解后，向其中加入硫酸镁溶液；用蒸馏水定容至配料体积后，用体积浓度为10％的稀盐酸或质量浓度为20％的氢氧化钠溶液调节pH至7.0，然后加入琼脂，液化后分装入三角瓶中，灭菌，即可；分装时，每瓶三角瓶的装入体积为所述三角瓶容量的1/2。
[0017]进一步的，还包括步骤2：待灭菌后的培养基降温至50
‑
60℃时，以无菌操作方式倒入灭菌后的培养皿中，每个培养皿倒入20ml～25ml的培养基，平放于无菌工作台上，冷却凝固后备用；
[0018]进一步的，所述灭菌条件为：121℃、0.1MPa的条件下灭菌30分钟。
[0019]一种所述阿维链霉菌纯种分离用培养基在阿维菌素链霉菌纯种分离过程中的应用。
[0020]与现有技术相比，本专利技术所取得的有益效果如下：
[0021]本专利技术通过在培养基中增加阿维链霉菌利用较快的氮源酵母膏和蛋白胨，为菌种的快速生长提供了更好的营养条件，将菌落的成熟周期由传统培养基的10
‑
11天缩短为7
‑
8天，菌落的生长周期缩短了3
‑
4天；本专利技术通过添加微量元素硫酸镁，使菌落的变异率由37.23％降低为19.99
‑
23.94％，菌落变异率降低35％以上；因此，采用本专利技术的培养基对阿维链霉菌进行纯种分离，极大的缩短了菌落的生长周期和变异率。
具体实施方式
[0022]以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细的叙述。
[0023]实施例1
[0024]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，包括如下百分重量比的各原料：
[0025][0026][0027]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0028]步骤1：称取各原料，首先配制质量浓度为0.1％的硫酸镁溶液，然后将葡萄糖、牛肉粉、酵母膏、蛋白胨与蒸馏水混合溶解后，向其中加入硫酸镁溶液；用蒸馏水定容至配料体积后，用体积浓度为10％的稀盐酸或质量浓度为20％的氢氧化钠溶液调节pH至7.0，然后加入琼脂，液化后分装入三角瓶中，121℃、0.1MPa的条件下灭菌30分钟，即可；分装时，每瓶三角瓶的装入体积为所述三角瓶容量的1/2；
[0029]一种上述培养基在阿维链霉菌纯种分离中的应用，具体包括：
[0030]步骤A：待灭菌后的上述培养基降温至50
‑
60℃时，以无菌操作方式倒入灭菌后的培养皿中，每个培养皿倒入20ml～25ml的培养基，平放于无菌工作台上，冷却凝固后备用；
[0031]步骤B：取一个甘油管抽取0.5ml甘油阿维链霉菌孢子液，放入玻璃珠试管中，振荡10min，将孢子打成单个孢子后，然后系列稀释10
‑1、10
‑2、
……
、10
‑4，然后将10
‑4梯度的菌悬液吸取50μl滴在已准备好的平皿培养基上，用玻璃涂棒涂匀后，培养箱培养，即可。
[0032]实施例2
[0033]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，包括如下百分重量比的各原料：
[0034][0035]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基的制备方法，同实施例1。
[0036]一种上述培养基在阿维链霉菌纯种分离中的应用，同实施例1。
[0037]实施例3
[0038]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，包括如下百分重量比的各原料：
[0039][0040]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基的制备方法，同实施例1。
[0041]一种上述培养基在阿维链霉菌纯种分离中的应用，同实施例1。
[0042]对比例1：
[0043]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，包括如下百分重量比的各原料：
[0044][0045]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0046]称取各原料，首先配制质量浓度为0.1％的硫酸镁溶液，然后将葡萄糖、牛肉粉、酵母粉、玉米浆与蒸馏水混合溶解后，向其中加入硫酸镁溶液；用蒸馏水定容至配料体积后，用体积浓度为10％的稀盐酸或质量浓度为20％的氢氧化钠溶液调节pH至7.0，然后加入琼脂，液化后分装入三角瓶中，121℃、0.1MPa的条件下灭菌30分钟，即可；分装时，每瓶三角瓶的装入体积为所述三角瓶容量的1/2。
[0047]一种上述培养基在阿维链霉菌纯种分离中的应用，同实施例1。
[0048]对比例2
[0049]一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，包括如下百分重量比的各原料：
[0050][0051]一种阿维本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，其特征在于，包括：碳源、氮源、硫酸镁和水。2.根据权利要求1所述的一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，其特征在于，所述碳源采用葡萄糖，所述氮源包括牛肉粉、酵母膏和蛋白胨。3.根据权利要求2所述的一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，其特征在于，以百分重量计，其中，葡萄糖为0.5
‑
0.7％；牛肉粉为0.08
‑
0.12％；酵母膏为0.08
‑
0.12％；蛋白胨为0.13
‑
0.17％。4.根据权利要求1所述的一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，其特征在于，以百分重量计，其中，硫酸镁为0.00008
‑
0.00012％。5.根据权利要求1所述的一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，其特征在于，还包括琼脂，以百分重量计，其中，琼脂为2％；所述培养基的pH为7.0。6.根据权利要求1所述的一种阿维链霉菌纯种分离用培养基，其特征在于，包括以下百分重量的各原料：7.一种如权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：范令涛，高利华，池凤歧，王学伟，段少鹏，刘丽虹，
申请(专利权)人：河北兴柏农业科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：