一种水蛭药材的微波辐照灭菌及蜗牛酶辅助罐组动态逆流提取方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种水蛭药材的微波辐照灭菌及蜗牛酶辅助罐组动态逆流提取方法及用途，属于医药技术领域，提取方法采用蜗牛酶

【技术实现步骤摘要】
一种水蛭药材的微波辐照灭菌及蜗牛酶辅助罐组动态逆流提取方法及用途


[0001]本专利技术涉及一种水蛭药材的微波辐照灭菌及蜗牛酶辅助罐组动态逆流提取方法及用途，属于医药


技术介绍

[0002]水蛭是中国传统的特种药用水生动物，其干制品炮制后入药，在《神农本草经》中已有记载，具有很高的药用价值。《中国药典》2020版列载，水蛭为水蛭科动物蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)、水蛭(Hirudo nipponica Whitman)或柳叶蚂蟥(Whitmania acranulata Whitman)的干燥全体，具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病和抗癌方面具有特效。
[0003]水蛭的主要有效药用成分为大分子类化合物，如水蛭素、肝素、组织胺、吻蛭素以及氨基酸等。其中，水蛭素是目前鉴定出的最强的凝血酶特异性抑制剂，是一种含有65个氨基酸残基的单链多肽。药理学研究表明：水蛭素等多肽类成分具有抗凝血、抗血栓形成、改善血液流变性、脑保护、抗脑缺血、调脂、抗炎、保护肾脏、抗组织纤维化等作用。
[0004]“龙丹通络胶囊”(国药准字B20020853)是集心脑血管保健，预防、治疗为一体的纯中药产品，是哈尔滨圣泰生物制药有限公司主打品牌，甲类OTC药品，国家中药保护品种，其中，水蛭是处方中的主要药物，具有益气活血，祛瘀通脉的功效。用于气虚血瘀型脑血栓形成恢复期或冠心病轻中度稳定型劳累性心绞痛，表现为气虚血瘀证者的康复保健，能从根本上预防心脑血管疾病的产生，并对已患心脑血管疾病有非常显著的效果。
[0005]“龙丹通络胶囊”成药中，以水蛭生粉入药，然而，由于水蛭药材在贮藏过程中易霉变，其药材细粉在固体制剂中微生物超标严重，导致“龙丹通络胶囊”的卫生学指标难以控制，极大地限制了药理药效及临床治疗。
[0006]目前，中药制剂常用的灭菌方法包括：水洗灭菌法、化学灭菌法、干热灭菌法、射线灭菌法等，但这些方法在应用中也存在一定的缺点：水洗灭菌法只适用于中药材初步处理，去除附着于药材表面的灰尘及细菌；化学灭菌法利用化学试剂处理药材，经处理后的药材会有化学试剂残留；干热灭菌法对药材进行加热处理，温度较高，会使动物药中所含的蛋白质变性，不利于动物药材的活性成分提取；射线灭菌法中常用的包括微波灭菌法、
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γ射线灭菌法、紫外灭菌法。但紫外线穿透能力弱，只适用于药材表面的灭菌。
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γ射线灭菌法需要特殊的核辐照装置，对
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γ射线的人身安全防护亦有特殊要求，限制了大量制药生产企业和高校院所等研发机构的应用。
[0007]现阶段水蛭溶栓有效组分的常用提取方法有：浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流法等，但这些方法存在着损失多、周期长、工序多、提取效率不高的特点。
[0008]因此，采用科学可靠的灭菌技术，优化提取工艺，以控制水蛭药材的微生物菌落含量，有效提高水蛭中溶栓活性多肽组分的提取率，保证“龙丹通络胶囊”的临床用药安全、有效尤为重要。

技术实现思路

[0009]本专利技术所要解决的技术问题是，水蛭药材卫生学指标难以控制的问题，提供了一种水蛭药材的微波辐照灭菌及蜗牛酶辅助罐组动态逆流提取方法，可有效控制微生物含量，该法采用蜗牛酶
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NaCl酶降解溶剂系统、罐组动态逆流提取、高速离心、Al2O3陶瓷膜分离、喷雾干燥技术提取水蛭溶栓有效组分，工艺流程简单，操作方便。
[0010]同时，本专利技术提供一种具有抗凝活性的水蛭溶栓有效组分。
[0011]同时，本专利技术提供一种具有抗凝活性的水蛭溶栓有效组分在制备抗凝血、抗血栓、改善血液流变性、脑保护、抗脑缺血、调脂、抗炎、保护肾脏、或抗组织纤维化药物中的应用。
[0012]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0013]一种水蛭药材的微波辐照灭菌及蜗牛酶辅助罐组动态逆流提取方法，包括以下步骤：
[0014]S01，取水蛭药材，粉碎，过筛，微波辐照灭菌，微波辐照功率为400～1000W，辐照时间为2～8min，获得灭菌水蛭药材；
[0015]S02，运用三套罐组动态逆流提取技术对灭菌水蛭药材中的溶栓有效组分进行富集，采用灭菌水蛭药材重量10～15倍的0.3％～0.9％的氯化钠水溶液，加入蜗牛酶的比例为600～1200KU/kg灭菌水蛭药材作为提取溶媒，pH6.0～8.0，提取温度35～45℃，梯度形成阶段，A罐酶解提取时间为60～90min；B罐提取时间为15～40min；C罐提取时间为0～25min；提取阶段，各罐提取时间2.0～3.0小时，提取期间逆流循环3～5次，每次逆流循环15～25分钟，获得提取液；
[0016]S03，对上述提取液进行高速离心，转速为5000～8000rpm，离心至少20分钟，得离心分离液；
[0017]S04，对离心分离液进行微滤，得微滤透过液，浓缩，喷雾干燥得具有抗凝活性的水蛭溶栓有效组分。
[0018]S03中，采用碟片式离心机进行离心操作。
[0019]S04中，微滤的方法为膜分离微滤分离，膜分离微滤分离采用膜孔径为0.05μm，Al2O3陶瓷膜机组对上述离心分离液进行微滤分离处理，其机组的组合方式为四并两串式，每根膜管里装0.05μm膜芯61根，共488根；运行条件：温度：35～50℃、出膜压力：1.0～2.0bar；微滤分离结束后，用截留液体积3倍量的纯净水对截留液顶洗3次，顶洗温度：35～50℃、顶洗压力：7.0～10.0bar，得微滤透过液。
[0020]S01中，微波辐照功率为800W，辐照时间为3min。
[0021]S01中，过筛为过40目筛。
[0022]蜗牛酶的提取方法包括以下步骤：采用木瓜酶0.05％～0.15％W/V
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甘露醇0.1％～0.3％W/V
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司盘20 0.05％～0.1％W/V溶剂系统，溶解于pH6.0～8.2的0.01～0.03mol/L磷酸二氢钾
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磷酸氢二钾缓冲液500mL、20％～40％W/V浓度的(NH4)2SO4溶液500～1000mL，溶液总量共计1000～1500mL；
[0023]取去壳蜗牛，冰浴条件下至少12000rpm高速匀浆10～15min，对蜗牛酶进行萃取，萃取完成后进行活性炭脱色1～2h，活性炭的添加重量为去壳蜗牛重量的0.1％，再用0.9％NaCl溶液过滤洗涤除去活性炭，0.9％NaCl溶液的用量相当于去壳蜗牛重量的1～2倍量，获得蜗牛粗蛋白溶液，蜗牛粗蛋白溶液中，至少62％的蜗牛粗蛋白得率；
[0024]采用聚乙二醇PEG2000～4000结合葡聚糖凝胶SephadexG
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25～100柱层析分离蜗牛酶，蜗牛粗蛋白溶液溶解于相当于蜗牛粗蛋白溶液重量1～4倍量的Tri
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水蛭药材的微波辐照灭菌及蜗牛酶辅助罐组动态逆流提取方法，其特征在于：包括以下步骤：S01，取水蛭药材，粉碎，过筛，微波辐照灭菌，微波辐照功率为400~1000W，辐照时间为2~8min，获得灭菌水蛭药材；S02，运用三套罐组动态逆流提取技术对灭菌水蛭药材中的溶栓有效组分进行富集，采用灭菌水蛭药材重量10~15倍的0.3%~0.9%的氯化钠水溶液，加入蜗牛酶的比例为600~1200 KU/kg灭菌水蛭药材作为提取溶媒，pH6.0~8.0，提取温度35~45℃，梯度形成阶段，A罐酶解提取时间为60~90min；B罐提取时间为15~40min；C罐提取时间为0~25min；提取阶段，各罐提取时间2.0~3.0小时，提取期间逆流循环3~5次，每次逆流循环15~25分钟，获得提取液；S03，对上述提取液进行高速离心，转速为5000~8000rpm，离心至少20分钟，得离心分离液；S04，对离心分离液进行微滤，得微滤透过液，浓缩，喷雾干燥得具有抗凝活性的水蛭溶栓有效组分。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：S03中，采用碟片式离心机进行离心操作。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：S04中，微滤的方法为膜分离微滤分离，膜分离微滤分离采用膜孔径为0.05
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m，Al2O3陶瓷膜机组对上述离心分离液进行微滤分离处理，其机组的组合方式为四并两串式，每根膜管里装0.05
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m膜芯61根，共488根；运行条件：温度：35～50℃、出膜压力：1.0～2.0bar；微滤分离结束后，用截留液体积3倍量的纯净水对截留液顶洗3次，顶洗温度：35～50℃、顶洗压力：7.0～10.0bar，得微滤透过液。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：S01中，微波辐照功率为800W，辐照时间为3min。5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：S01中，过筛为过40目筛。6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：蜗牛酶的提取方法包括以下步骤：采用木瓜酶0.05%~0.15%W/V
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甘露醇0.1%~0.3%W/V
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司盘20 0.05%~0.1%W/V溶剂系统，溶解于pH6.0~8.2的0.01~0.03mol/L磷酸二氢钾
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磷酸氢二钾缓冲液500mL、20...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘欣，李禹震，张宇，李松达，齐洋，丁芬，闫向伟，
申请(专利权)人：海南艾斯卓普科技有限公司，
类型：发明
国别省市：