纳米酶结合液液微萃取快速检测天麻硫熏标志物的方法技术

本发明专利技术公开了一种纳米酶结合液液微萃取快速检测天麻硫熏标志物的方法，该方法以乙二胺四乙酸铁钠、氯化铜及磷酸二氢钾为前驱，热解法制备Cu,Fe/P,K

【技术实现步骤摘要】
纳米酶结合液液微萃取快速检测天麻硫熏标志物的方法


[0001]本专利技术属于化学分析检测
，具体涉及一种纳米酶结合液液微萃取快速检测天麻硫熏标志物的方法。

技术介绍

[0002]在中医药领域，硫熏加工方法作为传统的中药材养护方法，具有快速干燥、漂白、防霉、防虫和延长贮藏期等作用，已广泛应用到中药材的初加工和仓储等环节。当前中药材硫熏滥用现象极为普遍，尤其是产地加工和贮藏保管等环节。一方面，二氧化硫是国内外允许使用的一种食品添加剂，多以亚硫酸盐的形式添加到食品中，发挥防腐、漂白和抗氧化的作用。另一方面，过度硫熏产生的大量二氧化硫不仅会影响药材质量，改变药材化学成分，甚至危害人体健康。研究表明，对羟基苄基亚硫酸氢盐(p
‑
HS) 作为硫熏天麻中丰度较高且专属性较好的硫熏标志物，是判断天麻硫熏成功与否的重要质控指标。目前检测p
‑
HS的方法主要为UPLC
‑
MS/MS，需要大型仪器设备及专门技术人员，难以进行硫熏天麻的现场快速质量控制。
[0003]碳点（CDs）作为巨大的电子储库，由于其低毒性、生物相容性以及独特的物理化学性质引起了人们极大的研究兴趣，作为一类纳米酶被广泛研究与应用，但其纳米酶活性低，其应用受到很大限制。为了提高（无论是电子供体还是电子受体）的电子转移能力，将多种单金属和双金属（如Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn）共价掺杂到CDs中。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种纳米酶结合液液微萃取快速检测天麻硫熏标志物的方法，本专利技术是利用Cu,Fe/P,K
‑
CDs拟过氧化酶及漆酶活性，结合微萃取建立的对羟基苄基亚硫酸氢盐（p
‑
HS）的检测方法。
[0005]本专利技术以乙二胺四乙酸铁钠、氯化铜及KH2PO4为前驱，热解法制备铜、铁、磷及钾共掺杂碳点纳米酶（Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶），Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶具有空位氧化、大量电子和优异的电子转移能力而表现出高的拟过氧化物酶及漆酶纳米酶活性，以天麻硫熏标志物对羟基苄基亚硫酸氢盐(p
‑
HS)作为漆酶底物，结合纳米酶过氧化物酶产生的羟基自由基，p
‑
HS能被Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶氧化，在4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）及H2O2存在下，产生红色氧化产物从而建立了p
‑
HS比色快速检测方法，在天麻样品测定时，结合分散液液微萃取，消除干扰，提高检测灵敏度，检出限达0.01mg/kg，本专利技术方法具有操作简单、快速的特点。
[0006]本专利技术纳米酶结合液液微萃取快速检测天麻硫熏标志物的方法如下：（1）取3.00
‑
4.00g 乙二胺四乙酸铁钠（NaFeEDTA）、1.30
‑
1.50g CuCl2·
2H2O、50
‑
60mg KH2PO4、3
‑
4mL甲醇研磨混匀，在60
‑
70℃下烘干后，粉末在氮气气氛、250
‑
350℃下煅烧2
‑
2.5h，冷却至室温后，将产物分散在50
‑
60mL甲醇中，超声30
‑
40min后，离心取上清液，过0.22μm滤膜除去大颗粒杂质，溶液真空干燥，制得Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶；离心是在8000
‑
10000rpm下处理15
‑
20min；
（2）在对羟基苄基亚硫酸氢盐标准溶液中加入Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶溶液、4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）溶液、H2O2溶液，pH 5.0乙酸
‑
乙酸钠缓冲溶液，混匀后在冰浴中反应5
‑
10min后，用去离子水定容，在505nm波长处测定吸光度，建立吸光度与对羟基苄基亚硫酸氢盐浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；所述Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶溶液的浓度为0.1mg/mL，添加量为100
‑
200μL；4
‑
氨基安替比林溶液浓度为10mmol/L，添加量为100
‑
150
µ
L，H2O2溶液浓度为50mmol/L，添加量为100
‑
150
µ
L，对羟基苄基亚硫酸氢盐在定容后溶液中浓度为0.100
‑
120.0μg/mL；（3）提取检测样品中对羟基苄基亚硫酸氢盐，获得样品测定液，在样品测定液中加入Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶溶液、4
‑
氨基安替比林溶液、H2O2溶液、pH 5.0乙酸
‑
乙酸钠缓冲溶液，在冰浴中反应5
‑
10min后，用去离子水定容，进行液液微萃取，有机相于505nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（2）回归方程中，获得样品中对羟基苄基亚硫酸氢盐含量；其中液液微萃取是在冰浴反应后溶液中加入正己醇为萃取剂，聚乙二醇三甲基壬基醚（TMN
‑
6）为分散剂，涡旋处理0.5
‑
1min，静置5
‑
10min，取出下层水相，添加萃取剂及分散剂重复萃取1
‑
2次，收集合并有机相；正己醇用量为0.1
‑
0.2mL/3mL，聚乙二醇三甲基壬基醚用量为0.1
‑
0.2 mL/3mL；步骤（3）中Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶溶液的浓度为0.1mg/mL，添加量为100
‑
200μL；4
‑
氨基安替比林溶液浓度为10mmol/L，添加量为100
‑
150
µ
L，H2O2溶液浓度为50mmol/L，添加量为100
‑
150
µ
L。
[0007]本专利技术的优点和技术效果如下：1、本专利技术通过Cu、Fe掺杂到CDs中，提高CDs的电子转移能力，同时，KH2PO4作为CDs合成原料，可以提供弱酸性环境促进原子空位的形成，K原子可以插入CDs中改变形貌并形成电子桥来加速光生电子转移，合成获得的Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶表现出高的拟过氧化物酶及漆酶纳米酶活性；2、Cu,Fe/P,K
‑
CDs纳米酶显示出强的模拟过氧化物酶及漆酶氧化酶活性，氧化p
‑
HS、4
‑
AP及H2O2，产生红色的氧化反应，由于纳米酶活性高，反应速度快，致使检测体系的稳定性降低，将反应置于冰浴中进行，降低了反应速度，提高了体系稳定性，由此建立了灵敏、选择性强p
‑
HS比色检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米酶结合液液微萃取快速检测天麻硫熏标志物的方法，其特征在于，步骤如下：（1）取3.00
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4.00g 乙二胺四乙酸铁钠、1.30
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1.50g CuCl2·
2H2O、50
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60mg KH2PO4、3
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4mL甲醇研磨混匀，在60
‑
70℃下烘干后，粉末在氮气气氛、250
‑
350℃下煅烧2
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2.5h，冷却至室温后，将产物分散在50
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60mL甲醇中，超声30
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40min后，离心取上清液，过0.22μm滤膜除去大颗粒杂质，溶液真空干燥，制得Cu,Fe/P,K
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CDs纳米酶；（2）在对羟基苄基亚硫酸氢盐标准溶液中加入Cu,Fe/P,K
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CDs纳米酶溶液、4
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氨基安替比林溶液、H2O2溶液、pH 5.0乙酸
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乙酸钠缓冲溶液，混匀后在冰浴中反应5
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10min后，用去离子水定容，在505nm波长处测定吸光度，建立吸光度与对羟基苄基亚硫酸氢盐浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；（3）提取检测样品中对羟基苄基亚硫酸氢盐，获得样品测定液，在样品测定液中加入Cu,Fe/P,K
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CDs纳米酶溶液、4
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氨基安替比林溶液、H2O2溶液、pH 5.0乙酸
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨德志，杨野，李秋兰，李吉涛，杨亚玲，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：