一种枸杞子药材的质量控制方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种枸杞子药材的质量控制方法，该质量控制方法通过以下步骤实现：(1)采集枸杞子原药材：采集不同批次枸杞子样本，经粉碎之后，得到粒度均匀的枸杞子药材粉末；(2)测定质控指标：测定枸杞子药材中粗多糖的得率、糖组成、总糖含量、蛋白含量和糖醛酸含量；以及(3)建立枸杞子药材各质控指标的定量分析模型和定量放行标准：采用熵权TOPSIS方法建立定量评价模型，通过所建定量模型，建立以下定量放行标准：相对接近度C

【技术实现步骤摘要】
一种枸杞子药材的质量控制方法及其应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种枸杞子药材的质量控制方法及其应用。

技术介绍

[0002]枸杞子，为茄科植物枸杞的成熟果实，其是目前中药制剂生产中常用的原料药材，但是其来源广泛，品种繁多，同一品种药材因其生长条件、采收季节、加工方式及贮藏条件的不同而在质量上存在差异，从而使中药制剂成品存在一定的质量差异。故有必要在药材进入中药制剂生产前对其重要质控指标进行快速检测和评价。
[0003]现有技术中未见将熵权TOPSIS方法用于枸杞子药材中多个质控指标测定的相关报道。本方法在枸杞子药材质量快速分析领域具有重要前景和意义。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术提供了一种枸杞子药材的质量控制方法，该质量控制方法通过以下步骤实现：(1)采集枸杞子原药材：采集不同批次枸杞子样本，经粉碎之后，得到粒度均匀的枸杞子药材粉末；(2)测定质控指标：测定枸杞子药材中粗多糖的得率、糖组成、总糖含量、蛋白含量和糖醛酸含量；以及(3)建立枸杞子药材各质控指标的定量分析模型和定量放行标准：采用熵权TOPSIS方法建立定量评价模型，通过所建定量模型，建立以下定量放行标准：相对接近度C
i
＞0.5，完全满足定量放行标准的枸杞子药材判断符合定量要求，可放行进入原药材质量判别的下个环节。
[0005]进一步地，该粗多糖通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子药材粉末，加入8～12倍量90～100％乙醇浸泡0.2～2h，回流提取1～3h，滤过，药渣晾干备用；(2)取晾干后的药渣加入8～12倍量水，加热回流提取1～3h，滤过，药渣再次加水回流提取，共计提取2～3次；(3)合并滤液，在55～65℃的温度下减压浓缩至相对密度为1.0～1.1，再加入90～100％乙醇，边加边搅拌，将乙醇浓度调至80～90％，2～6℃下放置12h以上，过滤，得到沉淀；以及(4)将该沉淀用适量的蒸馏水复溶，透析纸透析，截留分子量约10k，过夜，袋内截留液浓缩至适量，冷冻干燥，得到枸杞子粗多糖。
[0006]在本专利技术中，体积/质量之比、浓度、转速、时间、温度、压力、比例、当量、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“8～12”时，所描述的范围应被解释为包括范围“8～12”、“9～12”、“10～12”、“11～12”、“8～11”、“9～11”、“10～11”、“8～10”、“9～10”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
[0007]进一步地，该粗多糖通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子药材粉末，加入8～12倍量约95％乙醇浸泡约1h，回流提取约2h，滤过，药渣晾干备用；(2)取晾干后的药渣加入8～12倍量水，加热回流提取约2h，滤过，药渣再次加水回流提取，共计提取
2～3次；(3)合并滤液，在约60℃的温度下减压浓缩至相对密度为1.0～1.1，再加入约95％乙醇，边加边搅拌，将乙醇浓度调至约85％，约4℃下放置12h以上，过滤，得到沉淀；以及(4)将该沉淀用适量的蒸馏水复溶，透析纸透析，截留分子量约10k，过夜，袋内截留液浓缩至适量，冷冻干燥，得到枸杞子粗多糖。
[0008]进一步地，该得率＝该枸杞子粗多糖的质量/该枸杞子药材粉末的质量
×
100％。
[0009]进一步地，该粗多糖的糖组成的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子粗多糖，加入1～2倍量的2mol/L的TFA溶液，充分混悬溶解，封口，在110～130℃下水解1.5～2.5h，取出，放冷至室温；(2)取适量水解后的样品于试管中，加入等体积的2mol/L的NaOH溶液中和，再加入0.8～1.2mL 0.5mol/L NaBH4的DMSO溶液，混匀，于35～45℃的水浴中进行还原反应80～100min；(3)还原反应结束之后逐滴加入80～120μL冰醋酸，混匀，然后加入150～250μL 1
‑
甲基咪唑和0.8～1.2mL乙酸酐，混匀，于35～45℃的水浴中进行乙酰化反应8～12min；以及(4)乙酰化反应结束之后加入1.5～2.5mL水溶液，摇匀，室温放置25～35min，加氯仿萃取乙酰化产物，氯仿层用水洗三次，用无水硫酸钠干燥，得到检测样品溶液。进一步地，该粗多糖的糖组成的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子粗多糖，加入约1.5倍量的2mol/L的TFA溶液，充分混悬溶解，封口，在约120℃下水解约2h，取出，放冷至室温；(2)取适量水解后的样品于试管中，加入等体积的2mol/L的NaOH溶液中和，再加入约1mL 0.5mol/L NaBH4的DMSO溶液，混匀，于约40℃的水浴中进行还原反应约90min；(3)还原反应结束之后逐滴加入约100μL冰醋酸，混匀，然后加入约200μL 1
‑
甲基咪唑和约1mL乙酸酐，混匀，于约40℃的水浴中进行乙酰化反应约10min；以及(4)乙酰化反应结束之后加入约2mL水溶液，摇匀，室温放置约30min，加氯仿萃取乙酰化产物，氯仿层用水洗三次，用无水硫酸钠干燥，得到检测样品溶液。
[0010]进一步地，该粗多糖的糖组成通过包括以下步骤的方法进行检测：取适量的该检测样品溶液，使用GC
‑
MS进行检测，同时取标准单糖衍生化产物在相同条件下进行检测，对比样品与标准品的保留时间和质谱图，确定样品糖组成，并用面积归一化法确定各组分相对含量。进一步地，该GC
‑
MS进行检测的气相色谱条件如下所示：柱子：HP
‑
5ms，60m
×
0.25mm
×
0.25μm，Agilent；程序升温：起始温度120℃，3℃/min升温至190℃，2℃/min升温至250℃，保温5min；进样体积：1μL；进样口温度：250℃；载气：He；载气流速：1.0mL/min；传输线温度：250℃。
[0011]进一步地，该各组分为阿拉伯糖和半乳糖。
[0012]进一步地，该粗多糖的总糖含量的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：称取适量的枸杞子粗多糖，加入约0.1倍量(体积/质量之比)的2M TFA溶液进行溶解，涡旋使其混合均匀，得到检测样品溶液。
[0013]进一步地，该粗多糖的总糖含量通过包括以下步骤的方法进行检测：(1)将配制的该检测样品溶液，放入45～55℃水浴加热溶解0.8～1.2h之后取出；(2)加入适量的蒸馏水稀释，混合均匀；(3)取适量的混合均匀后的上清液于试管中，加入9倍体积的蒸馏水稀释10倍，涡旋混匀；(4)取适量的上述溶液，依次加入0.4～0.6倍体积的6％苯酚溶液、2.3～2.7倍体积本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枸杞子药材的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法通过以下步骤实现：(1)采集枸杞子原药材：采集不同批次枸杞子样本，经粉碎之后，得到粒度均匀的枸杞子药材粉末；(2)测定质控指标：测定枸杞子药材中粗多糖的得率、糖组成、总糖含量、蛋白含量和糖醛酸含量；以及(3)建立枸杞子药材各质控指标的定量分析模型和定量放行标准：采用熵权TOPSIS方法建立定量评价模型，通过所建定量模型，建立以下定量放行标准：相对接近度C
i
＞0.5，完全满足定量放行标准的枸杞子药材判断符合定量要求，可放行进入原药材质量判别的下个环节。2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述粗多糖通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子药材粉末，加入8～12倍量90～100％乙醇浸泡0.2～2h，回流提取1～3h，滤过，药渣晾干备用；(2)取晾干后的药渣加入8～12倍量水，加热回流提取1～3h，滤过，药渣再次加水回流提取，共计提取2～3次；(3)合并滤液，在55～65℃的温度下减压浓缩至相对密度为1.0～1.1，再加入90～100％乙醇，边加边搅拌，将乙醇浓度调至80～90％，2～6℃下放置12h以上，过滤，得到沉淀；以及(4)将所述沉淀用适量的蒸馏水复溶，透析纸透析，截留分子量约10k，过夜，袋内截留液浓缩至适量，冷冻干燥，得到枸杞子粗多糖；优选地，所述粗多糖通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子药材粉末，加入8～12倍量约95％乙醇浸泡约1h，回流提取约2h，滤过，药渣晾干备用；(2)取晾干后的药渣加入8～12倍量水，加热回流提取约2h，滤过，药渣再次加水回流提取，共计提取2～3次；(3)合并滤液，在约60℃的温度下减压浓缩至相对密度为1.0～1.1，再加入约95％乙醇，边加边搅拌，将乙醇浓度调至约85％，约4℃下放置12h以上，过滤，得到沉淀；以及(4)将所述沉淀用适量的蒸馏水复溶，透析纸透析，截留分子量约10k，过夜，袋内截留液浓缩至适量，冷冻干燥，得到枸杞子粗多糖；更优选地，所述得率＝所述枸杞子粗多糖的质量/所述枸杞子药材粉末的质量
×
100％。3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述粗多糖的糖组成的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子粗多糖，加入1～2倍量的2mol/L的TFA溶液，充分混悬溶解，封口，在110～130℃下水解1.5～2.5h，取出，放冷至室温；(2)取适量水解后的样品于试管中，加入等体积的2mol/L的NaOH溶液中和，再加入0.8～1.2mL 0.5mol/L NaBH4的DMSO溶液，混匀，于35～45℃的水浴中进行还原反应80～100min；
(3)还原反应结束之后逐滴加入80～120μL冰醋酸，混匀，然后加入150～250μL 1
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甲基咪唑和0.8～1.2mL乙酸酐，混匀，于35～45℃的水浴中进行乙酰化反应8～12min；以及(4)乙酰化反应结束之后加入1.5～2.5mL水溶液，摇匀，室温放置25～35min，加氯仿萃取乙酰化产物，氯仿层用水洗三次，用无水硫酸钠干燥，得到检测样品溶液；优选地，所述粗多糖的糖组成的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：(1)称取适量的枸杞子粗多糖，加入约1.5倍量的2mol/L的TFA溶液，充分混悬溶解，封口，在约120℃下水解约2h，取出，放冷至室温；(2)取适量水解后的样品于试管中，加入等体积的2mol/L的NaOH溶液中和，再加入约1mL 0.5mol/L NaBH4的DMSO溶液，混匀，于约40℃的水浴中进行还原反应约90min；(3)还原反应结束之后逐滴加入约100μL冰醋酸，混匀，然后加入约200μL 1
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甲基咪唑和约1mL乙酸酐，混匀，于约40℃的水浴中进行乙酰化反应约10min；以及(4)乙酰化反应结束之后加入约2mL水溶液，摇匀，室温放置约30min，加氯仿萃取乙酰化产物，氯仿层用水洗三次，用无水硫酸钠干燥，得到检测样品溶液；更优选地，所述粗多糖的糖组成通过包括以下步骤的方法进行检测：取适量的所述检测样品溶液，使用GC
‑
MS进行检测，同时取标准单糖衍生化产物在相同条件下进行检测，对比样品与标准品的保留时间和质谱图，确定样品糖组成，并用面积归一化法确定各组分相对含量；又优选地，所述GC
‑
MS进行检测的气相色谱条件如下所示：柱子：HP
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5ms，60m
×
0.25mm
×
0.25μm，Agilent；程序升温：起始温度120℃，3℃/min升温至190℃，2℃/min升温至250℃，保温5min；进样体积：1μL；进样口温度：250℃；载气：He；载气流速：1.0mL/min；传输线温度：250℃；特别优选地，所述各组分为阿拉伯糖和半乳糖。4.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述粗多糖的总糖含量的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：称取适量的枸杞子粗多糖，加入约0.1倍量(体积/质量之比)的2M TFA溶液进行溶解，涡旋使其混合均匀，得到检测样品溶液；优选地，所述粗多糖的总糖含量通过包括以下步骤的方法进行检测：(1)将配制的所述检测样品溶液，放入45～55℃水浴加热溶解0.8～1.2h之后取出；(2)加入适量的蒸馏水稀释，混合均匀；(3)取适量的混合均匀后的上清液于试管中，加入9倍体积的蒸馏水稀释10倍，涡旋混匀；(4)取适量的上述溶液，依次加入0.4～0.6倍体积的6％苯酚溶液、2.3～2.7倍体积浓硫酸，混匀，避光放置25～35min后测定490nm吸光度；以及(5)根据标准曲线回归方程计算样品中的总糖含量；更优选地，所述粗多糖的总糖含量通过包括以下步骤的方法进行检测：(1)将配制的所述检测样品溶液放入约50℃水浴加热溶解约1h之后取出；(2)加入适量的蒸馏水稀释，混合均匀；(3)取适量的混合均匀后的上清液于试管中，加入9倍体积的蒸馏水稀释10倍，涡旋混匀；(4)取适量的上述溶液，各管依次加入约0.5倍体积的6％苯酚溶液、约2.5倍体积浓硫
酸，混匀，避光放置约30min后测定490nm吸光度；以及(5)根据标准曲线回归方程计算样品中的总糖含量；又优选地，所述粗多糖的蛋白含量的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：称取适量的枸杞子粗多糖，加入约2倍量(体积/质量之比)的蒸馏水进行溶解，涡旋使其混合均匀，得到检测样品溶液；特别优选地，所述粗多糖的蛋白含量通过包括以下步骤的方法进行检测：(1)将蛋白标准液按0、1、2、4、8、12、16、20μL加入96孔板中，加蒸馏水补足至20μL；(2)加入所述检测样品溶液20μL于96孔板中；(3)各孔加入200μL工作液，振荡30s，盖住孔板，37℃下孵育30min，酶标仪562nm波长下比色测定，以蛋白含量μg为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线；以及(4)根据标准曲线回归方程计算样品中的蛋白含量；尤其优选地，所述粗多糖的糖醛酸含量的检测样品通过包括以下步骤的方法进行制备：称取适量的枸杞子粗多糖，加入约2倍量(体积/质量之比)的蒸馏水进行溶解，涡旋使其混合均匀，得到检测样品溶液；又尤其优选地，所述粗多糖的糖醛酸含量通过包括以下步骤的方法进行检测：(1)取适量的检测样品溶液，置1.5
×
15cm试管中，平行四份；(2)冰浴冷却下分别加入适量的四硼酸钠硫酸溶液，充分混匀；(3)沸水浴加热3～10min，取出，冰水浴冷却至室温；(4)其中三份加适量的0.15％间羟基联苯溶液，另一份加等体积的0.5％氢氧化钠溶液，混匀，静置10～20分钟至室温后测定520nm处吸光度；以及(5)根据标准曲线回归方程计算样品中的糖醛酸含量；更尤其优选地，所述粗多糖的糖醛酸含量通过包括以下步骤的方法进行检测：(1)取适量的检测样品溶液，置1.5
×
15cm试管中，平行四份；(2)冰浴冷却下分别加入适量的四硼酸钠硫酸溶液，充分混匀；(3)沸水浴加热约5min，取出，冰水浴冷却至室温；(4)其中三份加适量的0.15％间羟基联苯溶液，另一份加等体积的0.5％氢氧化钠溶液，混匀，静置约15分钟至室温后测定520nm处吸光度；以及(5)根据标准曲线回归方程计算样品中的糖醛酸含量。5.根据权利要求1至4中任一项所述的质量控制方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶冠，房庆伟，王辉俊，
申请(专利权)人：上海医药集团中药研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：