威尼斯镰刀菌糖异生途径阻断菌株及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种威尼斯镰刀菌糖异生途径阻断菌株，其通过同步过表达丙酮酸羧化酶基因FvPYC和敲除磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶基因FvPCK后获得。丙酮酸羧化酶基因FvPYC为如下(a)、(b)或(c)的碱基序列：(a)如SEQ ID NO:1所示；(b)编码如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的核苷酸序列；(c)在严谨杂交条件下与(a)限定的核苷酸序列杂交且编码的核苷酸序列。本发明专利技术通过同步过表达丙酮酸羧化酶基因FvPYC和敲除磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶基因FvPCK来合理阻断糖异生途径，可以强化TCA循环重要中间产物草酰乙酸的回补，达到提高菌丝体蛋白合成的目的。达到提高菌丝体蛋白合成的目的。达到提高菌丝体蛋白合成的目的。

【技术实现步骤摘要】
威尼斯镰刀菌糖异生途径阻断菌株及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
更具体地说，本专利技术涉及一种威尼斯镰刀菌糖异生途径阻断菌株及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]保障日常蛋白供给关乎国计民生。然而，在人口基数大、耕地流失严重和消费水平升级的大背景下，外加近年来动物疫情的影响，我国传统农牧业来源的蛋白供给处于供不足需的局面，并导致巨大贸易缺口的存在。因此，急需一种新的供给模式以保证蛋白大规模供应的同时保障其营养价值、安全性和可持续性。由威尼斯镰刀菌发酵生产的菌丝体蛋白具有安全性好、营养丰富、可持续大规模生产等优势，是一种有望打破依靠“传统农作物和畜禽资源”获取热量和蛋白格局的新蛋白。然而，天然菌株生产菌丝蛋白时的低碳源转化率和低合成速率在很大程度上制约了其发展。
[0003]丙酮酸是糖酵解的最终产物，也是TCA循环分支点上的中心代谢物，同时还是微生物体内化学品、氨基酸等的重要前体或中间体物质，在细胞整个代谢过程中起着关键的枢纽性作用。研究报道，在真菌中通过定向重塑丙酮酸代谢可以显著提高目标化学品的产量。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.丙酮酸羧化酶基因FvPYC，其特征在于，所述丙酮酸羧化酶基因FvPYC为如下(a)、(b)或(c)的碱基序列：(a)如SEQ ID NO:1所示；(b)编码如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的核苷酸序列；(c)在严谨杂交条件下与(a)限定的核苷酸序列杂交且编码具有催化二氧化碳和丙酮酸形成TCA循环所需的草酰乙酸功能的核苷酸序列。2.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求1所述的丙酮酸羧化酶基因FvPYC和与所述丙酮酸羧化酶基因FvPYC可操作地连接的用于表达的序列。3.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求1所述的丙酮酸羧化酶基因FvPYC或权利要求2所述的重组载体。4.菌株威尼斯镰刀菌TB605005，其特征在于，所述丙酮酸羧化酶基因FvPYC为如下(a)、(b)或(c)的碱基序列：(a)如SEQ ID NO:1所示；(b)编码如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的核苷酸序列；(c)在严谨杂交条件下与(a)限定的核苷酸序列杂交且编码具有催化二氧化碳和丙酮酸形成TCA循环所需的草酰乙酸功能的核苷酸序列。5.磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶基因FvPCK，其特征在于，所述磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶基因FvPCK的缺失在权利要求4所述的菌株中提供促进菌丝蛋白产量提高的功能，所述磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶基因FvPCK为如下(d)、(e)或(f)的碱基序列：(d)如SEQ ID NO:3所示；(e)编码如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的核苷酸序列；(f)在严谨杂交条件下与(d)限定的核苷酸序列杂交且编码具有催化草酰乙酸形成二氧化碳和磷酸烯醇丙酮酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：童胜，李德茂，陈吴西，马延和，王钦宏，孙媛霞，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：