pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法及应用技术

本发明专利技术公开了pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法及应用，将牧马豆种子粉碎至40

【技术实现步骤摘要】
pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法及应用


[0001]本专利技术涉及pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法及应用。

技术介绍

[0002]牧马豆是一种名贵药用植物，生长于中亚欧洲部分、西伯利亚、俄罗斯和中国的山谷和草原。其全株富含喹啉啶生物碱，在种子中约占 3%。药理学研究表明牧马豆中的生物碱具有抑菌和抗炎活性。最近，烟草使用已成为全球公共卫生关注的问题。作为烟草中典型的喹啉啶生物碱，对尼古丁的依赖是吸烟行为的主要原因，吸烟对包括心血管疾病、肺癌和慢性阻塞性肺病在内的公众健康疾病有重大影响。因此，人们对开发戒烟和刺激神经元烟碱受体的药物疗法产生了极大的兴趣。酒石酸伐尼克兰是著名的α4β2烟碱受体部分激动剂，2006年5月39日被美国FDA批准为戒烟治疗药物。与伐尼克兰相似，胞嘧啶富含的种子，占总生物碱50%以上，是一种潜在的 α4β2 部分烟碱受体，具有喹啉西啶生物碱的结构。它被医疗专家和消费者认为是安全且价格低廉的。此外，金雀花碱具有益智和抗抑郁作用，可用于治疗肝炎和肝癌。除金雀花碱外，T. 牧马豆的种子还富含喹啉西啶类生物碱和许多类似的生物碱成分。因此，迫切需要从牧马豆种子中分离喹啉啶生物碱的有效方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法及应用，解决技术问题是有效将牧马豆中生物碱类化合物进行分离。
[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法，按照以下步骤进行:将牧马豆种子粉碎至40
‑
60目，用乙醇进行回流提取三次，每次 2 小时，将提取液合并，过滤提取液，减压浓缩，蒸至无醇味，加入水，并用HCl水溶液调 pH至 2.0，加入石油醚，加入氨溶液调pH至9.5，加入氯仿萃取5次，得氯仿萃取液，将氯仿萃取液减压蒸干得生物碱粗品；采用PZRCCC的首尾洗脱模式，对生物碱粗品进行分离，经减压浓缩后，得生物碱类化合物；所述牧马豆种子、乙醇、水、石油醚和氯仿的质量比是1:10～15:0.25～1:10～15:0.75～1.5:1～3；所述生物碱化合物的分子结构为：
。所述乙醇是质量分数为95%的水溶液；所述HCl水溶液中HCl的质量分数是1%；所述氨溶液是体积比1:1的水溶液。
[0005]PZRCCC的首尾洗脱模式是采用溶剂对生物碱粗品进行分离步骤为：将上相和下相加入到生物碱粗品中，制得样品溶液；以上相作固定相，下相作流动相，超声脱气，打开冷肼，在温度为25℃，流速为30 mL/min的条件下，将固定相泵入到色谱柱中，完全充满后，正转调节转速至800 rpm，达到流体力学平衡；将样品溶液通过进样阀注入到色谱柱中，设置紫外检测器吸光度280nm处连续监测，并打开记录仪记录色谱数据图；通过自动收集器连续收集洗脱液，根据色谱图将每个峰馏分分别收集到试剂瓶中；洗脱出所需的峰后停止转速和洗脱，用真空泵将色谱柱中组分收集在量筒内，减压浓缩收集的馏分，获得生物碱类化合物；生物碱粗品、上相和下相的质量体积比为1:10:10（g/mL/mL）；所述溶剂是氯仿、甲醇和水按照体积比4:3:3的组合物，其制备方法为：将氯仿、甲醇和水置于分液漏斗中，充分振荡，静置30 min，即得溶剂；溶剂的上层则为上相，溶剂的下层则为下相。
[0006]还包括对所述生物碱类化合物进行高效液相色谱分析，其分析条件如下：色谱柱：Waters symmetry（250
×
4.6 mm, 5 μm）；流动相：乙腈 (A) 和 0.05% TEA 水溶液 (B)；梯度洗脱条件为：0
‑
7min，90
‑
70% A，10
‑
30%B；7
‑
12 min，70
‑
65% A,30
‑
35%B;12
‑
13 min，65
‑
90% A,35
‑
10%B和 13
‑
20 min，90% A,10%B；流速：1 mL/min；柱温：25℃；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。
[0007]还包括对萜类化合物进行结构鉴定，其方法为：通过ESI
‑
MS、1H和
13
C NMR 波谱鉴定分离的化合物。ESI
‑
MS（正离子和负离子模式）质谱分析在Xevo TQ
‑
XS上进行，核磁波谱在Bruker AV
‑
400波谱仪上记录，DMSO
‑
d6作为溶剂，四甲基硅烷（TMS）作内标物，化学位移（δ）值用ppm表示，耦合常数（J）以Hz为单位。
[0008]pH区带逆流色谱分离出牧马豆中生物碱类化合物的应用，应用于治疗炎症和减少
中枢神经损伤。
[0009]化合物结构鉴定解析：化合物1：N
‑
formylcytisine:ESI
‑
MSm/z219.2619[M+H]+
,分子式为C
12
H
14
N2O2.1H
‑
NMR(400MHz,DMSO
‑
d6):δ
H
7.88/7.59(1H,s,CHO),7.37/7.33(1H,dd,J=7.2,8.8Hz,H
‑
4),6.22(2H,dd,J=1.2,8.8Hz,H
‑
3),6.15(2H,dd,J=1.2,7.2Hz,H
‑
5),4.31/4.11(1H,d,J=13.6Hz,H
‑
10β),3.93/3.81(1H,d,J=13.6Hz,H
‑
10α),3.13(2H,d,J=1.6Hz,H
‑
7),2.51(2H,br.s,H
‑
9).
13
C
‑
NMR(100MHz,DMSO
‑
d6):δ
C
162.6/162.5(C
‑
14),161.6/161.5(C
‑
2),150.2/149.9(C
‑
6),139.4(C
‑
4),116.5/116.3(C
‑
3),105.2/105.1(C
‑
5),53.2/51.6(C
‑
13),49.2/48.7(C
‑
10),46.9/45.9(C
‑
11),34.4/33.7(C
‑
7),27.0/26.8(C
‑
9),25.9/25.8(C
‑
8).化合物2：N
‑
acetycytisine:ESI
‑
MSm/z233.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法，其特征在于，按照以下步骤进行:将牧马豆种子粉碎至40
‑
60目，用乙醇进行回流提取三次，每次 2 小时，将提取液合并，过滤提取液，减压浓缩，蒸至无醇味，加入水，并用HCl水溶液调 pH至 2.0，加入石油醚，加入氨溶液调pH至9.5，加入氯仿萃取5次，得氯仿萃取液，将氯仿萃取液减压蒸干得生物碱粗品；采用PZRCCC的首尾洗脱模式，对生物碱粗品进行分离，经减压浓缩后，得生物碱类化合物；所述牧马豆种子、乙醇、水、石油醚和氯仿的质量比是1:10～15:0.25～1:10～15:0.75～1.5:1～3；所述生物碱化合物的分子结构为：。2.如权利要求1所述pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法，其特征在于，所述乙醇是质量分数为95%的水溶液；所述HCl水溶液中HCl的质量分数是1%；所述氨溶液是体积比1:1的水溶液。3.如权利要求1所述pH区带牧马豆中生物碱类化合物的逆流色谱分离方法，其特征在于，PZRCCC的首尾洗脱模式是采用溶剂对生物碱粗品进行分离步骤为：将上相和下相加入到生物碱粗品中，制得样品溶液；以上相作固定相，下相作流动相，超声脱气，打开冷肼，在温度为25℃，流速为30 mL/min的条件下，将固定相泵入到色谱柱中，完全充满后，正转调节转速至800 rpm，达到流体力学平衡；将样品溶液通过进样阀注入到色谱柱中，设置紫外检测器吸光度280nm处连续监测，并打开记录仪记录色谱数据图；通过自动收集器连续收集洗脱液，根据色谱图将每个峰馏分分别收集到试剂瓶中；洗脱出所需的峰后停止转速和洗脱，用真空泵将色谱柱中组分收集在量筒内，减压浓缩收集的馏分，获得生物碱类化合物；生物碱粗品、上相和下相的质量体积比为1:10:10（g/mL/mL）；
所述溶剂是氯仿、甲醇和水按照体积比4:3:3的组合物，其制备方法为：将氯仿、甲醇和水置于分液漏斗中，充分振荡，静置30 m...

【专利技术属性】
技术研发人员：张喆，潘少斌，李震，施会山，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：