一种突变基因及其白内障筛查的用途与白内障筛查试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种突变基因及其白内障筛查的用途与白内障筛查试剂盒，属于基因突变领域。本发明专利技术提供了一种突变基因，它是在人类TSFM基因的基础上出现c.664C>T突变。本发明专利技术还提供了检测人类TSFM基因突变位点c.664C>T的相关试剂在制备先天性白内障的筛查试剂中的用途。本发明专利技术将TSFM基因c.664C>T位点的变异，应用于先天性白内障辅助诊断试剂盒的制备中，能达到筛查的目的。能达到筛查的目的。能达到筛查的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种突变基因及其白内障筛查的用途与白内障筛查试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因突变领域，特别涉及一种先天性白内障突变基因及其白内障筛查的用途与白内障筛查试剂盒。

技术介绍

[0002]先天性白内障（Congenital cataract CC）为一种先天性儿童眼部疾病，新生儿指出生后一年内发生的晶体浑浊，是为最常见的可导致儿童时期视力障碍或全盲的疾病之一。该疾病可呈现家族性发病或散发，可单侧或者双侧晶体发病，可伴随其他眼部症状、体征，如先天性小眼畸形等。先天性白内障的临床分型包括全白内障、后极性白内障、核型白内障、绕型白内障、膜白内障、中央粉尘状白内障等类型。在所有类型的先天性白内障病例中，25%是具有家族遗传性的，遗传方式包括AD（常染色体显性遗传），AR（常染色体隐性遗传）和X连锁隐性遗传等，其中以AD最为多见。
[0003]先天性白内障的治疗需根据患儿年龄、晶体混浊位置以及程度决定，目的是为了解决白内障对视轴的遮挡，提升患者视力，减少弱视或盲的发生。治疗方式包括白内障摘除、人工晶状体植入、屈光矫正和弱视训练等等。因此及时诊断先天性白内障尤为重要。
[0004]TSFM(线粒体Ts转录因子) UniProt ID:(Human) P43897，该基因编码线粒体翻译延伸因子。编码的蛋白质是一种酶，在线粒体蛋白质翻译的延伸步骤中催化鸟嘌呤核苷酸在翻译延伸因子Tu上的交换。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于一种一种先天性白内障突变基因及其筛查试剂盒以及制备晶状体上皮细胞病变模型方法。
[0006]本专利技术提供了一种突变基因，它是在人类TSFM基因的基础上出现c.664C>T突变，所述c.664C>T是指编码区第664位碱基C突变成T。
[0007]本专利技术还提供了一种检测人类TSFM基因c.664位点突变情况的试剂在制备白内障的筛查试剂中的用途。
[0008]所述的试剂包括检测人类TSFM基因突变位点c.664C>T的相关试剂。
[0009]所述的试剂包括任选的用于扩增包含人类TSFM基因c.664位点（即编码区第664位碱基）的核酸片段的相关试剂。
[0010]所述检测人类TSFM基因突变位点c.664C>T的相关试剂为测序试剂、荧光定量PCR试剂、限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
[0011]所述白内障的筛查试剂为先天性白内障的筛查试剂。
[0012]本专利技术还提供了一种白内障的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测人类TSFM基因c.664位点突变情况的试剂。
[0013]所述的试剂包括检测人类TSFM基因突变位点c.664C>T的相关试剂。
[0014]所述的试剂包括任选的用于扩增包含人类TSFM基因c.664位点的核酸片段的相关
试剂；或，所述检测人类TSFM基因突变位点c.664C>T的相关试剂为测序试剂、荧光定量PCR试剂、限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
[0015]本专利技术还提供了一种晶状体上皮细胞病变模型的制备方法，步骤如下：1）取人晶状体上皮细胞；2）将TSFM基因c.664位点由C突变为T，得到含有突变位点TSFM基因突变位点c.664C>T的细胞，即可；优选地，突变采用的试剂包括含有 SEQ ID NO.2所示基因片段的载体。
[0016]本专利技术的有益效果为本专利技术的试剂盒，通过检测TSFM基因的突变位点c.664C>T来辅助先天性白内障的筛查。本专利技术的试剂盒在正常人中不会检测到该突变，而在先天性白内障家系的确诊患病成员中，则都检测出该突变，检测结果可重复，说明本专利技术检测试剂盒具有可靠的特异性。本专利技术还通过在细胞中转让该突变基因的方式验证该基因的确会导致晶状体上皮细胞线粒体膜电位和超氧化物，验证其会引起晶状体上皮细胞病变，验证了其与白内障有明确相关性。
[0017]本专利技术的关键在于发现TSFM基因的突变位点c.664C>T与白内障（特别是先天性白内障）具有极强的相关性，可以通过检测TSFM基因的突变位点c.664C>T来筛查患白内障的风险。任何检测TSFM基因的突变位点c.664C>T的试剂均可以用于筛查患白内障的风险，比如，测序用试剂、荧光定量PCR试剂、限制性片段长度多态性方法用试剂、单链构象多态性分析用试剂或者测序试剂等多种检测试剂，转化生产的前景十分广阔。
[0018]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0019]以下通过实施例、实验例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0020]图1：TSFM家系的家系图谱；斜杠表已故，实心圆或实心方形表先天性白内障及高度近视，斜线圆或斜线方形表示先天性白内障及近视，空心圆，空心方代表正常；箭头指示先证者。
[0021]图2：转染TSFM质粒后，晶状体上皮细胞线粒体膜电位变化示意图。
[0022]A图为未处理晶状体上皮细胞线粒体膜电位示意图；B图为阳性对照，用10 μM CCCP处理晶状体上皮细胞后线粒体膜电位示意图；C图为用TSFM WT质粒转染晶状体上皮细胞后，线粒体膜电位示意图；D图为用TSFM MUT质粒转染晶状体上皮细胞后，线粒体膜电位示意图；red为红色荧光，表示线粒体膜电位正常，green为绿色荧光，表示线粒体膜电位下降，为细胞凋亡的标志，merge为整合图。
[0023]图3：转染TSFM质粒后，晶状体上皮细胞线粒体膜电位变化统计图。
[0024]图4：转染TSFM质粒后，晶状体上皮细胞线粒体超氧化物变化示意图。
[0025]A图为未处理晶状体上皮细胞超氧化物含量示意图；B图为阳性对照，用5 μM SOX处理晶状体上皮细胞后超氧化物含量示意图；C图为用TSFM WT质粒转染晶状体上皮细胞后，超氧化物含量示意图；D图为用TSFM MUT质粒转染晶状体上皮细胞后，超氧化物含量示
意图；red为红色荧光，表示超氧化物含量，DAPI表示细胞核，merge为整合图。
[0026]图5：转染TSFM质粒后，晶状体上皮细胞线粒体超氧化物含量变化统计图。
具体实施方式
[0027]实施例一 本专利技术的试剂盒及使用方法本专利技术试剂盒中的全部组分、含量和使用方法如下：1. PCR扩增试剂（50人份）：PCR扩增试剂用于扩增SNP位点所在的一段DNA序列，其组成见表1。
[0028]表1中PCR试剂混合液包括Taq酶、dNTP、镁离子等常规PCR所需成分；其中引物对信息如表2所示。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种突变基因，其特征在于：它是在人类TSFM基因的基础上出现c.664C>T突变，所述c.664C>T是指编码区第664位碱基C突变成T。2.检测人类TSFM基因c.664位点突变情况的试剂在制备白内障的筛查试剂中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的试剂包括检测人类TSFM基因突变位点c.664C>T的相关试剂。4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述的试剂包括任选的用于扩增包含人类TSFM基因c.664位点的核酸片段的相关试剂。5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述检测人类TSFM基因突变位点c.664C>T的相关试剂为测序试剂、荧光定量PCR试剂、限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性...

【专利技术属性】
技术研发人员：石毅，蒋灵晰，黎琦，戴超，
申请(专利权)人：四川省医学科学院，
类型：发明
国别省市：