用于治疗HBV的手段和方法技术

本发明专利技术涉及用于针对乙型肝炎病毒(HBV)治疗或疫苗接种的改进的重组疫苗接种载体以及包含所述重组疫苗接种载体的药物组合物或疫苗。本发明专利技术还涉及用于在针对HBV疫苗接种方法中使用的重组疫苗接种载体，以及包含含有所述重组疫苗接种载体的疫苗的试剂盒。重组疫苗接种载体的疫苗的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
用于治疗HBV的手段和方法


[0001]本专利技术涉及用于针对乙型肝炎病毒(HBV)治疗或疫苗接种的改进的重组疫苗接种载体以及包含所述重组疫苗接种载体的药物组合物或疫苗。本专利技术还涉及用于在针对HBV疫苗接种的方法中使用的重组疫苗接种载体，以及用于针对HBV疫苗接种的试剂盒。

技术介绍

[0002]超过2.4亿人患有慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染。已经批准的治疗选择是核苷(酸)类似物和干扰素α。核苷(酸)类似物控制但不治愈乙型肝炎，并需要昂贵的长期治疗，这可能与耐药病毒的出现有关。干扰素α治疗受到副作用的限制，且仅对15
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20％的患者有治愈作用。
[0003]该病毒分为四种主要血清型(adr、adw、ayr、ayw)，它们根据其包膜蛋白上存在的抗原表位诱导差异性抗体应答，并且根据基因组的总体核苷酸序列变化分为(至少)8种基因型(A
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I)。所述基因型具有独特的地理分布并用于追踪病毒的进化和传播。基因型之间的差异影响疾病的严重程度，病程和并发症的可能性，以及对治疗和可能的疫苗接种的应答。此外，存在亚基因型，例如A1
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5。在中欧和美国，主要的基因型是A2。然而，只有1％的感染人群携带A2亚基因型，而大多数患者携带B、C或D基因型的HBV。已经表明，与其它(亚)基因型相比，常规HBV疫苗对与包含在疫苗中的HBV抗原相同的(亚)基因型的HBV提供更好的保护。
[0004]已充分确定的是，宿主适应性免疫系统对于有效的HBV控制至关重要。针对HBV小表面抗原(HBsAg)的中和性抗体阻止病毒扩散至未感染的肝细胞，并且从HBsAg至抗
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HBs的血清转化代表了HBV感染的临床终点(Rehermann和Nascimben，Nat Rev Immunol 2005；5:215
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29)。清除病毒的患者产生强的多克隆和多特异性CD8+和CD4+T细胞应答，而慢性感染与抗病毒T细胞的消耗和进行性功能障碍相关(Rehermann等，J Exp Med 1995；181:1047
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58)。临床观察发现，从HBV免疫供体获得骨髓的骨髓移植受者体内的慢性HBV感染消退，这为T细胞控制感染提供了强有力的支持(Ilan等，Gastroenterology 1993；104:1818
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21)。基于这些观察，设计治疗性疫苗接种来活化内源性HBV特异性T细胞应答。然而，在慢性感染患者中，许多临床尝试仅对抗
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HBV免疫应答具有短暂作用并且不能控制HBV(Kutscher等，Microb Biotechnol 2012；5:270
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82)。持续接触高水平的循环病毒抗原似乎是免疫疗法的主要障碍，因为它们诱导耐受性和效应细胞功能障碍。
[0005]此外，治疗性疫苗接种与抗病毒治疗(控制病毒血症但对循环抗原水平没有影响)的结合并未改善疫苗功效和临床疗效(Michel等，J Hepatol2011；54:1286
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96)。
[0006]为了促进新的免疫治疗策略的发展，已经开发了HBV转基因小鼠(HBVtg)，其是垂直传播的慢性HBV感染模型(Guidotti等，J Virol 1995；69:6158
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69)。HBVtg小鼠在肝细胞中复制HBV，产生HBcAg、HBsAg和乙型肝炎e抗原(HBeAg)并将感染性病毒释放到血液中(Guidotti等，JVirol 1995；69:6158
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69)。HBV抗原的表达在出生时开始，小鼠对HBV编码的蛋白质具有免疫耐受性(Shimizu等，J Immunol 1998；161:4520
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9)，但是这种耐受性可以被破坏(Buchmann等，Vaccine 2013；31:1197
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203)。
[0007]修饰的安卡拉牛痘病毒(MVA)与痘病毒科正痘病毒属成员牛痘病毒有关。通过在安卡拉牛痘病毒株(CVA)的鸡胚成纤维细胞上进行516次连续传代，产生了MVA(综述参见Mayr,A等，Infection 3,6
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14(1975))。作为这些长期传代的结果，所得到的MVA病毒的基因组有约31000个碱基的基因组序列缺失，因此其被描述为高度限制复制成禽类细胞的宿主细胞(Meyer,H.等，J.Gen.Virol.72,1031
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1038(1991))。在多种动物模型中显示，得到的MVA显著无毒(Mayr,A.&Danner,K.,Dev.Biol.Stand.41:225
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34(1978))，但仍然产生针对痘病毒的保护性免疫应答。因此，这种MVA菌株已经在临床试验中作为疫苗进行了测试，以预防人类天花疾病(Mayr等,Zbl.Bakt.Hyg.I,Abt.Org.B 167,375
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390(1987)；Stickl等，Dtsch.med.Wschr.99,2386
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2392(1974))。这些研究涉及超过120,000人，包括高风险患者，并且证明，与牛痘基疫苗相比，MVA毒力降低且耐受性良好，但仍能诱导良好的特异性免疫应答。
[0008]在随后的几十年中，MVA被设计用作用于重组基因表达的病毒载体或作为重组疫苗(Sutter,G.等,Vaccine 12:1032
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40(1994))。已经描述了用于开发疫苗或药物的MVA株。参见美国专利No.6,761,893和No.6,193,752。这些株能够在不同的非人类细胞和细胞系，特别是鸡胚成纤维细胞(CEF)中繁殖复制，但不能在已知允许复制其他已知牛痘病毒株的人细胞系中显著繁殖复制。
[0009]基于以上所述，本领域需要可用于针对HBV的治疗性疫苗接种的改进的手段和方法。这些手段和方法应平行诱导针对多种HBV亚型的中和性抗体应答和多特异性T细胞应答。

技术实现思路

[0010]本专利技术涉及用于针对乙型肝炎病毒(HBV)治疗或疫苗接种的新型重组疫苗接种载体以及包含所述MVA的药物组合物或疫苗。本专利技术还涉及一种使用重组MVA针对HBV的疫苗接种方法。设想本专利技术的手段和方法在受体中针对HBV诱导抗体应答以及T细胞应答，并且进一步设想所诱导的免疫应答对多种HBV基因型和血清型有效。
[0011]本文所用的“重组疫苗接种载体”是指减毒病毒或细菌。在本文中，“载体”是指用作载体(carrier)的病毒或细菌。通常，这种减毒病毒或细菌用于将编码抗原的核酸引入受试者的细胞。
[0012]本专利技术的重组疫苗接种载体可以是减毒沙门氏菌(Salmonella)菌株。然而，可选地，可以使用其它原核微生物，比如大肠杆菌(Escherichia coli)、志贺氏菌(Shigella)、耶尔森氏菌(Yersinia)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、分枝杆菌(Myco本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组疫苗接种载体，其表达(a)来自乙型肝炎病毒adw血清型的包膜蛋白(HBs
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抗原)，其中所述包膜蛋白优选为来自乙型肝炎病毒A基因型adw血清型的小或大包膜蛋白，其中所述小或大包膜蛋白优选为小包膜蛋白；和(b)来自乙型肝炎病毒ayw血清型的核心蛋白(HBc
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抗原)，其中所述核心蛋白优选来自乙型肝炎病毒D基因型ayw血清型；和以下中的至少一个：(c)来自乙型肝炎病毒的免疫原性包膜蛋白(HBs
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抗原)，其与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；和/或(d)来自乙型肝炎病毒的免疫原性核心蛋白(HBc
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抗原)，其与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；和/或(e)来自乙型肝炎病毒的聚合酶的免疫原性RT结构域，其与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。2.一种MVA病毒，其表达(a)来自乙型肝炎病毒adw血清型的包膜蛋白(HBs
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抗原)，其中所述包膜蛋白优选为来自乙型肝炎病毒A基因型adw血清型的小或大包膜蛋白，其中所述小或大包膜蛋白优选为小包膜蛋白；和一种MVA病毒，其表达(b)来自乙型肝炎病毒ayw血清型的核心蛋白(HBc
‑
抗原)，其中所述核心蛋白优选来自乙型肝炎病毒D基因型ayw血清型；用于在针对乙型肝炎的疫苗接种方法中使用，其中所述方法包括：(i)向受试者施用(a
’
)来自乙型肝炎病毒adw血清型的包膜蛋白，其中所述包膜蛋白优选为来自乙型肝炎病毒A基因型adw血清型的小或大包膜蛋白，其中所述小或大包膜蛋白优选为小包膜蛋白；和/或(b
’
)来自乙型肝炎病毒ayw血清型的核心蛋白(HB...

【专利技术属性】
技术研发人员：U，
申请(专利权)人：德国亥姆霍兹慕尼黑中心健康与环境研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：