一种植物超长基因组DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种植物超长基因组DNA的提取方法，属于植物分子生物学技术领域。本发明专利技术的植物超长基因组DNA的提取方法，将植物幼嫩的组织研磨成粉末后加入到细胞核提取液中，通过过滤和离心得到细胞核沉淀；用细胞核重悬缓冲液重悬细胞核，然后加入SDS裂解液；后用酚/氯仿/异戊醇、氯仿/异戊醇和氯仿抽提，取上清加入异丙醇获取DNA沉淀，用乙醇清洗后晾干。本发明专利技术获得的DNA长度有明显优势，无需进一步纯化去除小片段，就可获得长度大于485Kb的片段。就可获得长度大于485Kb的片段。就可获得长度大于485Kb的片段。

【技术实现步骤摘要】
Tris
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HCl，pH8.0、25mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0、350mM山梨糖醇、0.1％十六烷基三甲基溴化铵组成。
[0011]进一步地，所述的酚/氯仿/异戊醇的体积比为25：24：1。
[0012]进一步地，所述的氯仿/异戊醇的体积比为24：1。
[0013]进一步地，所述的乙醇为70％的乙醇。
[0014]植物超长基因组DNA的提取方法，具体步骤包括：
[0015]1)使用1
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2g小麦的幼嫩叶片或者小麦胚芽鞘材料，在研钵中用液氮研磨至粉末状，转移粉末到含有20
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40mL预冷的细胞核提取液中，并加入0.1％
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0.2％的β
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巯基乙醇，轻柔上下颠倒混匀，置于冰上；在冰上静置10min以上，待植物组织粉末完全溶解混匀后，分别采用Miracloth滤布、40μm滤膜、30μm滤膜过滤一次；过滤后的提取液于4℃下，50
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60rcf离心3
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5min两次去除杂质，取上清，后1000
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2500r本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，将植物幼嫩的组织研磨成粉末后加入到细胞核提取液中，通过过滤和离心得到细胞核沉淀；用细胞核重悬缓冲液重悬细胞核，然后加入SDS裂解液；后用酚/氯仿/异戊醇、氯仿/异戊醇和氯仿抽提，取上清加入异丙醇获取DNA沉淀，用乙醇清洗后晾干。2.根据权利要求1所述的植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的细胞核提取液由0.5M蔗糖、10mM Tris
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HCl，pH8.0、10mM乙二胺四乙酸二钠，pH 8.0、80mM氯化钾、1％聚乙烯吡咯烷酮、350mM山梨糖醇、0.5％Triton X
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100、1mM精胺、1mM亚精胺、0.1％
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0.2％巯基乙醇组成。3.根据权利要求1所述的植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的细胞核重悬缓冲液由150mM氯化钠、100mM Tris
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HCl，pH8.0、25mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0、350mM山梨糖醇组成。4.根据权利要求1所述的植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的SDS裂解液由20g/L十二烷基磺酸钠、150mM氯化钠、100mM Tris
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HCl，pH8.0、25mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0、350mM山梨糖醇、0.1％十六烷基三甲基溴化铵组成。5.根据权利要求1所述的植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的酚/氯仿/异戊醇的体积比为25∶24∶1。6.根据权利要求1所述的植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的氯仿/异戊醇的体积比为24∶1。7.根据权利要求1所述的植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的乙醇为70％的乙醇。8.根据权利要求1
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7任一所述的植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，具体步骤包括：1)使用1
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【专利技术属性】
技术研发人员：鹿东东，李博生，李珊珊，刘彩娟，刘艳霞，
申请(专利权)人：北京大学现代农业研究院，
类型：发明
国别省市：