一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体为一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用，该生防菌分类命名为：贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis，于2022年10月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.25882，用贝莱斯芽孢杆菌对地黄进行灌根处理后，发现该菌株对地黄的生长无抑制作用，且能够提高地黄的防御酶活，进而来增强地黄对镰刀菌的抗性。黄对镰刀菌的抗性。黄对镰刀菌的抗性。

【技术实现步骤摘要】
一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用。

技术介绍

[0002]镰刀菌常常引起植物出现根腐、茎腐、茎基腐、花腐等多种病害症状，镰刀菌经常侵染寄主植物的维管束系统，破坏植物的输导组织，并在植物生长发育代谢过程中产生毒素来危害作物，造成植物萎蔫死亡，影响产量和品质，地黄连作障碍问题异常突出，每茬地黄收获后须隔8
‑
10年方可再种年方可在同一地块上再种，且常会伴随爆发大规模真菌病害，如腐皮镰刀菌引起的茎枯病、尖孢镰刀菌引起的枯萎病等。目前，大多通过增施肥料、加大农药用量等措施减缓连作障碍、维持产量的效果不佳，但该方式对环境造成了严重的危害，使中药资源的栽培生产陷入了恶性循环。因此，微生物防治凭借其无污染、无公害、无残留，同时不易产生抗药性等优点成为当前研究的热点。目前的研究所涉及的微生物种类有很多，但未有贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)防治地黄镰刀菌枯萎病的报道，因此，需要以根际促生菌为代表的一类绿色、高效、环境和谐的微生物防控措施来防控地黄镰刀菌枯萎病。

技术实现思路

[0003]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用。
[0004]一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用，所述生防菌分类命名为：贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis，于2022年10月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.25882。
[0005]优选的，将所述生防菌制备成生防菌剂，用于防控地黄镰刀菌。
[0006]优选的，所述生防菌剂用于防控地黄镰刀菌引起的枯萎病。
[0007]优选的，所述生防菌剂为液体，液体中的所述生防菌的细胞数1.00
‑
9.99*106个/毫升。
[0008]优选的，所述生防菌剂的制备方法为：用LB培养基和MgCl2培养得到菌液，所述菌液的OD
600
为0.8。
[0009]优选的，将所述生防菌剂用于灌根。
[0010]优选的，灌根时将地黄侧根剪断，在距伤口1
‑
2cm处灌根。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0012]利用贝莱斯芽孢杆菌对刚地黄进行灌根处理后，发现该菌株对地黄的生长有促进作用，且能够提高地黄的防御酶活，进而来增强地黄对镰刀菌的抗性。
[0013]一种防控地黄镰刀菌的生防菌，分类命名为：贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，于2022年10月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.25882。
附图说明
[0014]图1为贝莱斯芽孢杆菌灌根处理地黄后，地黄生长指标变化的柱形图；其中，(A)为株高的柱形图，(B)为鲜重的柱形图；
[0015]图2为贝莱斯芽孢杆菌处理对地黄根部及叶部POD、PPO、SOD活性影响的柱状图；其中，A为根部POD，B为根部PPO，C为根部SOD，D为叶部POD，E为叶部POD，F为叶部POD，
[0016]图3为地黄接种贝莱斯芽孢杆菌对地黄镰刀菌抗性影响的柱状图；
具体实施方式
[0017]下面对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0018]实施例中涉及到的培养基组分：
[0019]LB培养基：胰蛋白胨(Tryptone)10g/L；酵母提取物(Yeastextract)5g/L；氯化钠(NaCl)10g/L；
[0020]PDA培养基上：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL；
[0021]PDB培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL。
[0022]实施例1
[0023]土壤中贝莱斯芽孢杆菌的筛选与鉴定
[0024]称取地黄根际土鲜土样10g和无菌水90mL，摇床28℃，180rpm，30min，静置30s，吸取上层菌液10mL加入到90mL无菌水中，作为初始菌液，逐步稀释至10
‑5，每个浓度梯度吸取50μL涂于LB培养基，于37℃黑暗条件下倒置培养。待平板长处的单菌落占培养基2/3时，挑出菌落较大的菌株划线纯化。将纯化的菌株挑单菌落接种于装有600μL液体LB培养基的1.5mL离心管中，37℃过夜培养产生大量菌液，以菌液为模板进行16SPCR。PCR反应扩增体系(25μL)为16SrDNA
‑
F(5'
‑
ACTCCTACGGGAGGCAGCAG
‑
3'和16SrDNA
‑
R(5'
‑
GGACTACGGGGGTATCTAAT
‑
3')引物各1μL，菌液1μL，2
×
TaqMaster Mix12.5μL，ddH2O8.5μL。94℃3min；94℃30s，50℃50s，72℃100s，35个循环；72℃7min。后用琼脂糖凝胶电泳检测目的扩增条带，纯化回收后送到博尚测序公司进行测序。测序结果进行BLAST比对，对比结果见表1，所检测的序列与Bacillusvelezensis序列之间相同的碱基或氨基酸占整个序列的99.1440798％，因此，确定为贝莱斯芽孢杆菌，其序列如下所示：TGCCAAATGGGGCAGCTAATAATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用，其特征在于，所述生防菌分类命名为：贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis，于2022年10月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.25882。2.根据权利要求1所述的一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用，其特征在于，将所述生防菌制备成生防菌剂，用于防控地黄镰刀菌。3.根据权利要求2所述的一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用，其特征在于，所述生防菌剂用于防控地黄镰刀菌引起的枯萎病。4.根据权利要求3所述的一种生防菌在防控地黄镰刀菌中的应用，其特征在于，所述生防...

【专利技术属性】
技术研发人员：李振方，孙莹莹，王舒婷，牛颜冰，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：