草果多糖及其制备工艺和在制备抗补体药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了草果多糖及其制备工艺和在制备抗补体药物中的用途，属于多糖药物技术领域，本发明专利技术从药食同源类药材草果中分离得到三个具有抗补体活性的草果多糖组分ATP

【技术实现步骤摘要】
草果多糖及其制备工艺和在制备抗补体药物中的用途


[0001]本专利技术属于多糖药物
，具体涉及三种具有抗补体活性的草果多糖及其制备工艺和在制备抗补体药物中的用途。

技术介绍

[0002]现有技术公开了补体系统是机体天然免疫防御的重要组成部分，在不同的调节蛋白参与中确保准确清除外来病原入侵的同时，为了防止对宿主组织的损伤，补体受到细胞表面调节器的严格控制，从而维持体内平衡。然而，补体系统的失调会导致过度炎症和多种疾病，如补体介导的免疫复合疾病、神经退行性疾病、癌症和代谢性疾病等，近期多个临床研究表明补体系统的过度激活在新冠感染的发病机制和疾病严重程度中也起着关键作用。目前临床上广泛使用的糖皮质激素、环磷酰胺、甲胺蝶吟等免疫抑制剂虽然对某些与补体过度激活相关的疾病有一定治疗作用，但由于该类药物并非专一的补体抑制剂，长期应用存在降低机体防御机能，导致抗感染能力下降，易继发感染和使潜在病灶扩散、产生多种并发症和副作用等缺陷，因此临床上急需高效、低毒、专一的新型补体抑制剂。
[0003]中药材中广泛存在具有抗补体作用的活性成分，我国中药资源丰富，有许多中药对免疫系统有明显的调节作用，是寻找抗补体类药物前体的宝贵资源。多糖作为中药的主要活性成分，其安全低毒、生物相容性好，在疾病预防和临床新药研发方面有着广阔的应用前景，且中药多糖类抗补体活性物质通常具有多靶点、多途径和作用长效等优势，因此从中药材多糖中寻找新型补体抑制剂具有重要意义。特别药食同源类中药材中的多糖成分安全可靠、无毒并具有独特的免疫调节机制和潜在的抗补体活性。
[0004]草果是姜科豆蔻属多年生草本植物草果(Amomum tsao
‑
ko Crevost et Lemarie)的干燥成熟果实，别名草果仁、草果子，分布在亚洲的热带和亚热带地区，主产于我国广西和云南等地。其性温，味辛，归肺和胃经，具有燥湿温中、截疟除痰的功效，可用于治疗寒湿内阻、脘腹胀痛、痞满呕吐、疟疾寒热和瘟疫发热。草果因辛辣香味，除腥气，增进食欲等特点，作为食品调味中的“五香之一”，已被国家卫健委列入“药食同源”清单。此外，据国家卫健委和国家中医药管理局公开发布的新型冠状病毒感染诊疗方案显示，草果在轻型、普通型、重型新冠感染患者的中医治疗中均起到了重要作用，其用于治疗新冠感染的依据为明代著名瘟疫派医家吴又可撰写的《瘟疫论》，该书记载的中药方剂“达原饮”中草果作为臣药发挥着宣透伏邪的效果。但迄今尚未见有对草果中具有抗补体活性的均一多糖提取、纯化和分离工艺的报道。

技术实现思路

[0005]鉴于此，本专利技术的目的在于提供三种具有抗补体活性的草果多糖及其制备工艺和在制备抗补体药物中的应用。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术提供一种草果多糖的制备工艺，主要包括以下步骤：
[0008](1)取干燥草果，粉碎，以液料比20:1～40:1mL/g加水提取，提取温度为80～90℃，提取时间为80～120min，提取1
‑
3次，过滤取滤液，浓缩，加95％乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀，蒸干，研磨成粉，得草果粗多糖；
[0009](2)取步骤(1)所得草果粗多糖，加蒸馏水溶解，上样至S
‑
8型号的大孔吸附树脂层析柱中，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，浓缩，透析，干燥，研磨成粉，得纯化后草果多糖；
[0010](3)取步骤(2)得到的纯化后草果多糖，加去离子水溶解，上样至DEAE
‑
52纤维素层析柱中，依次使用0、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的NaCl溶液梯度洗脱，根据苯酚
‑
硫酸法显色反应合并相同多糖组分，分别收集0、0.3mol/L和0.4mol/LNaCl溶液下洗脱得到的次级多糖组分，浓缩、透析、冷冻干燥，分别得到草果多糖ATP
‑
1、草果多糖ATP
‑
4和草果多糖ATP
‑
5；
[0011](4)使用去离子水分别复溶步骤(3)得到草果多糖ATP
‑
1、草果多糖ATP
‑
4和草果多糖ATP
‑
5，分别上样至Sephadex G
‑
100层析柱，以蒸馏水为洗脱溶剂，以0.5mL/min流速洗脱500～600min，根据苯酚
‑
硫酸法显色反应合并相同多糖组分，浓缩、透析、冷冻干燥得草果多糖ATP
‑1‑
1、ATP
‑4‑
1和ATP
‑5‑
1。
[0012]基于上述技术方案，进一步地，步骤(1)中浓缩至原体积的1/10～1/3，沉淀多糖具体过程为加95％乙醇至提取液乙醇终浓度为75～85％，静置24～48h。
[0013]基于上述技术方案，进一步地，步骤(1)中草果粗多糖的提取率为11.02
±
0.49％，多糖含量为26.73
±
1.52％。
[0014]基于上述技术方案，进一步地，步骤(2)中上样浓度为1～3mg/mL，上样体积为0.3～0.5BV；洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为1～3BV。
[0015]基于上述技术方案，进一步地，步骤(2)中脱蛋白率、脱色率和多糖回收率分别为69.4
±
0.92％，78.21
±
1.12％和81.6
±
1.71％，纯化效果综合评分为73.45
±
0.32％，纯化后草果多糖的产率为26.31
±
0.41％。
[0016]基于上述技术方案，进一步地，步骤(3)中上样浓度为50～100mg/mL，上样体积为0.2～0.4BV，洗脱流速为1mL/min，每个梯度洗脱125～150min。
[0017]本专利技术另一方面提供上述制备工艺制得的草果多糖，所述的草果多糖包括草果多糖ATP
‑1‑
1、ATP
‑4‑
1和ATP
‑5‑
1。
[0018]基于上述技术方案，进一步地，草果多糖ATP
‑1‑
1是中性多糖，分子量约为9.15
×
102kDa；总糖含量为91.44
±
1.13％；不含糖醛酸，单糖组成显示其由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为1.0:0.7:5.6:3.4:0.9。
[0019]基于上述技术方案，进一步地，草果多糖ATP
‑4‑
1是酸性多糖，分子量约为2.46
×
104kDa；总糖含量为94.54
±
1.87％，糖醛酸含量为39.59
±
0.22％，单糖组成显示其由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为1.0:4.8:2.4:20.7:本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种草果多糖的制备工艺，其特征在于，主要包括以下步骤：(1)取干燥草果，粉碎，以液料比20:1～40:1mL/g加水提取，提取温度为80～90℃，提取时间为80～120min，过滤取滤液，浓缩，加95％乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀，得草果粗多糖；(2)取步骤(1)所得草果粗多糖，加蒸馏水溶解，上样至S
‑
8型号的大孔吸附树脂层析柱中，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，干燥，得纯化后草果多糖；(3)取步骤(2)得到的纯化后草果多糖，加去离子水溶解，上样至DEAE
‑
52纤维素层析柱中，依次使用0、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的NaCl溶液梯度洗脱，根据苯酚
‑
硫酸法显色反应合并相同多糖组分，分别收集0、0.3mol/L和0.4mol/LNaCl溶液下洗脱得到的次级多糖组分，冷冻干燥，分别得到草果多糖ATP
‑
1、草果多糖ATP
‑
4和草果多糖ATP
‑
5；(4)使用去离子水分别复溶步骤(3)得到草果多糖ATP
‑
1、草果多糖ATP
‑
4和草果多糖ATP
‑
5，分别上样至Sephadex G
‑
100层析柱，以蒸馏水为洗脱溶剂进行恒定洗脱，根据苯酚
‑
硫酸法显色反应合并相同多糖组分，冷冻干燥得草果多糖ATP
‑1‑
1、草果多糖ATP
‑4‑
1和草果多糖ATP
‑5‑
1。2.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，步骤(1)中浓缩至原体积的1/10～1/3，沉淀多糖具体过程为加95％乙醇至提取液乙醇终浓度为75～85％，静置24～48h。3.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，步骤(2)中上样浓度为1～3mg/mL，上样体积为0.3～0.5BV；洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为1～3BV。4.根据权利要求1所述的制备工...

【专利技术属性】
技术研发人员：李镐，周微，胡政宇，孙金凤，金龙，段元祺，
申请(专利权)人：延边大学，
类型：发明
国别省市：