一种马齿苋多糖提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种马齿苋多糖提取物及其制备方法和应用，涉及植物提取物技术领域。本发明专利技术将预处理的马齿苋粉末溶解后，使用Viscozyme酶酶解，过滤获得上清液；对上清液进行脱蛋白处理后浓缩获得马齿苋多糖粗提液；通过梯度乙醇沉淀法处理马齿苋多糖粗提液，获得马齿苋多糖提取物。通过研究发现，本发明专利技术获得的马齿苋多糖提取物能显著减少HaCaT细胞和斑马鱼中ROS的产生，可减少UVB诱导的斑马鱼的活性氧释放、细胞死亡和脂质过氧化现象以及具有明显的抑制B16

【技术实现步骤摘要】
一种马齿苋多糖提取物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于植物提取物的
，具体涉及一种马齿苋多糖提取物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]马齿苋，又称长寿菜、五行草，广泛分布于世界各地的热带和亚热带地区，其位列于世界卫生组织的常用药用植物名单，并被赋予“全球灵丹妙药”的称号。该植物含有生物碱、黄酮类、萜类、香豆素、有机酸、多糖、挥发油和其他成分，其中马齿苋多糖是马齿苋主要的成分之一，最高含量可达11％。分离纯化粗多糖的传统方法是用超滤膜过滤沉淀，或者用分子排阻柱或阴离子交换柱进行层析，这些方法涉及设备成本高和操作延迟长等问题，不适合工业规模的制备。而梯度乙醇沉淀法是一种经济、便捷的方法，可以根据多糖的溶解度和分子量对所需成分进行纯化。此外，与传统的提取工艺相比，基于提取马齿苋多糖所创的酶辅助提取法可以有效降低提取温度，也做到了节能以及效率高。
[0003]紫外线照射是引起皮肤光老化的一个极其重要的环境因素，过量的紫外线照射皮肤会产生大量的活性氧(ROS)——它会破坏核酸、蛋白质等生物大分子的正常结构和功能，诱发脂质过氧化；此外，ROS介导的信号接连被激活，会导致细胞大量凋亡。因此近年来，人们也逐步研究和开发了一些具有紫外线吸收和抗氧化功能的天然植物，以抵御皮肤的光老化损伤。马齿苋多糖具有大量的药理作用，包括抗氧化、镇痛、抗菌和抗病毒等活性。然而，关于马齿苋多糖的美白和抗光损伤的深入研究是有限的，马齿苋多糖在UVB诱导的光老化和α
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MSH刺激的色素沉着中的作用机制仍不清楚。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种马齿苋多糖提取物的制备方法，本专利技术利用酶辅助提取法和梯度乙醇沉淀法分离提纯获得的马齿苋多糖提取物，具有显著抗黑色素生成和抗光老化活性。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种马齿苋多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：将预处理的马齿苋粉末溶解后，使用Viscozyme酶酶解，过滤获得上清液；对上清液进行脱蛋白处理后浓缩获得马齿苋多糖粗提液；向马齿苋多糖粗提液中加入0.5～1倍乙醇醇沉，离心获得上清液a；向上述上清液a中加入0.8～2倍乙醇醇沉，离心获得上清液b；向上述上清液b中加入0.8～2倍乙醇醇沉，离心获得沉淀即为马齿苋多糖提取物。
[0007]优选地，所述酶解的温度为40～60℃，所述酶解的pH为4～6。
[0008]优选地，所述酶解的时间为12～36小时。
[0009]优选地，所述脱蛋白处理的温度为23～26℃。
[0010]优选地，所述乙醇浓度为90～95％。
[0011]优选地，所述预处理包括对马齿苋粉末进行脱脂处理和/或脱色处理。
[0012]优选地，所述脱脂处理是将马齿苋粉末浸泡于石油醚中获得脱脂粉末；所述脱色处理是将马齿苋粉末浸泡于95％乙醇溶液中进行脱色处理。
[0013]本专利技术还提供了一种所述制备方法获得的马齿苋多糖提取物。
[0014]本专利技术还提供了一种所述马齿苋多糖提取物在制备缓解UVB诱导的光老化产品中的应用。
[0015]本专利技术还提供了一种所述马齿苋多糖提取物在制备抗黑色素产品中的应用。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有如下技术效果：
[0017](1)本专利技术同时运用酶辅助提取法和梯度乙醇沉淀法两种提取方法分离纯化马齿苋多糖，梯度乙醇沉淀法的分离率以及纯化程度比超滤膜沉淀法所得更高，并有效降低了提取温度过高导致的多糖分解及散失程度，减少能源消耗并提高了分离纯化的效率。
[0018](2)经试验表明，UVB照射可明显诱导细胞凋亡体的形成，而经本专利技术获得的马齿苋多糖提取物处理的HaCaT细胞后，凋亡体的数量明显减少，表明马齿苋多糖提取物可以抑制UVB引起的细胞凋亡。
[0019](3)经试验表明，与对照组相比，UVB刺激明显增加了斑马鱼胚胎的活性氧产生、细胞死亡数量和脂质过氧化的水平，斑马鱼内绿色和蓝色荧光强度明显增加。而斑马鱼经马齿苋多糖提取物处理后，斑马鱼内绿色和蓝色荧光强度明显降低。结果表明，本专利技术马齿苋多糖提取物处理可减少UVB诱导的斑马鱼的活性氧释放、细胞死亡和脂质过氧化现象。在α
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MSH的刺激下，B16
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F10细胞的黑色素产生过多，TYR活性明显增加，而用不同浓度的本专利技术马齿苋多糖提取物处理后，B16
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F10细胞的黑色素含量和TYR活性都明显降低，且抑制能力优于阳性对照。
[0020](4)本专利技术制备方法获得的马齿苋多糖提取物具有显著抗黑色素生成和抗光老化活性。本专利技术探索马齿苋多糖在缓解UVB诱导的光老化和黑色素异常沉积的分子信号机制，为开发天然化妆品原料的主要研究趋势提供初步的理论基础。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物的HaCaT细胞毒性；
[0022]图2为不同辐射量UVB对HaCaT细胞存活率的影响；
[0023]图3为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对UVB诱导后细胞存活率的影响；
[0024]图4为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对UVB诱导后细胞内ROS的产生的影响；
[0025]图5为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对UVB诱导的细胞凋亡小体形成和细胞凋亡的影响；
[0026]图6为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对UVB诱导斑马鱼幼鱼产生ROS的保护作用；
[0027]图7为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对斑马鱼体内细胞凋亡的抑制作用；
[0028]图8为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对斑马鱼体内脂质过氧化的抑制作用；
[0029]图9为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物调控α
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MSH诱导的B16
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F10细胞黑色素合成通路中MITF、TYR、TRP
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1和TRP
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2蛋白的表达情况；
[0030]图10为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对α
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MSH诱导的斑马鱼的体内黑色素含量的影响；
[0031]图11为本专利技术实施例1马齿苋多糖提取物对α
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MSH诱导的B16
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F10细胞中黑色素生成抑制活性的影响。
具体实施方式
[0032]本专利技术提供了一种马齿苋多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：将预处理的马齿苋粉末溶解后，使用Viscozyme酶酶解，过滤获得上清液；对上清液进行脱蛋白处理后浓缩获得马齿苋多糖粗提液；向马齿苋多糖粗提液中优选地加入0.5～1倍乙醇醇沉，离心获得上清液a；向上述上清液a中优选地加入0.8～2倍乙醇醇沉，离心获得上清液b；向上述上清液b中优选地加入0.8～2倍乙醇醇沉，离心获得沉淀即为马齿苋多糖提取物；在本专利技术中，向马齿苋多糖粗提液中更优选地加入0.6倍乙醇醇沉，离心获得上清液a；向上述上清液a中优本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马齿苋多糖提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将预处理的马齿苋粉末溶解后，使用Viscozyme酶酶解，过滤获得上清液；对上清液进行脱蛋白处理后浓缩获得马齿苋多糖粗提液；向马齿苋多糖粗提液中加入0.5～1倍乙醇醇沉，离心获得上清液a；向上述上清液a中加入0.8～2倍乙醇醇沉，离心获得上清液b；向上述上清液b中加入0.8～2倍乙醇醇沉，离心获得沉淀即为马齿苋多糖提取物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的温度为40～60℃，所述酶解的pH为4～6。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的时间为12～36小时。4.根据权利要求1所述的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴雨霖，皮子凤，陶星宇，郑飞，徐弘康，徐天艺，
申请(专利权)人：长春中医药大学，
类型：发明
国别省市：