一种环状多肽及其在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种环状多肽及其在制备抗肿瘤药物中的应用。该环状多肽的氨基酸序列如下所示：CKGKFKRPPLKRVRMSADAMLC。本发明专利技术还提供了该环状多肽的制备方法：将编码所述环状多肽的DNA序列无痕克隆进原核表达载体中，然后转化大肠杆菌DH5α，经IPTG诱导表达，再经SUMO蛋白酶处理除去标签，得到环状多肽。本发明专利技术中的制备的环状多肽的酶解稳定性提高，半衰期更长，即其在体内保留的时间更长。本发明专利技术还通过实验发现，该环状多肽能够抑制多种肿瘤细胞的生长和增殖，因此，可将其用抗肿瘤方面。可将其用抗肿瘤方面。可将其用抗肿瘤方面。

【技术实现步骤摘要】
一种环状多肽及其在制备抗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及一种环状多肽及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]肝癌是世界上最常见的六种癌症之一，其中肝细胞癌(HCC)是导致肝癌死亡的最普遍的亚型。尽管在诊断和治疗方面取得了进展，但大多数HCC患者晚期的生存期少于1年。而目前临床上并没有针对HCC的特效药，因此，新型治疗药物的开发一直是热点。
[0003]多肽药物是指通过化学合成、基因重组或从动植物中提取的具有特定治疗作用的肽，是多肽在医药领域的具体应用。多肽药物在制药行业具独特的优势，相较于小分子化药，多肽药物的优势在于生物活性及靶向性高、特异性强，更高效、安全，而且由于多肽本身是氨基酸组成的化合物，其代谢产物为氨基酸，对人体副作用较小。且相较于蛋白质药物，多肽药物还具有稳定性更佳、纯度高、生产成本低、免疫原性低或无等诸多优势。因此，基于其独特的优势，多肽药物被广泛应用于糖尿病，肿瘤，肝炎等治疗领域，例如在肿瘤治疗方面，水溶性九肽亮丙瑞林可以刺激垂体分泌促性腺激素，用来治疗或缓解多种性激素依赖性疾病如前列腺癌等。此外，在肿瘤治疗应用广泛的西仑吉肽，通过阻断整合素与细胞外基质的结合，抑制整合素介导的信号传导过程，进而阻断细胞增殖、生存和迁移，发挥抗肿瘤作用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种环状多肽。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供所述环状多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0006]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0007]一种环状多肽，其氨基酸序列如下所示：CKGKFKRPPLKRVRMSADAMLC(SEQ ID NO.1)。
[0008]所述的环状多肽的DNA序列，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]一种重组表达载体，含有上述环状多肽的DNA序列。
[0010]一种重组菌，通过上述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞制备得到。
[0011]所述的环状多肽的制备方法，包括如下步骤：
[0012](1)将上述环状多肽的DNA序列无痕克隆进原核表达载体pET
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N
‑
His
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PreScission
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SUMO中，得到原核表达质粒；
[0013](2)将步骤(1)中得到的原核表达质粒转化大肠杆菌，经异丙基
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β
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D
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硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，再经SUMO蛋白酶处理除去标签，得到环状多肽。
[0014]步骤(2)中所述的大肠杆菌为大肠杆菌DH5α。
[0015]步骤(2)中所述的异丙基
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β
‑
D
‑
硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度为1mmol/L。
[0016]步骤(2)中所述的诱导的条件优选为：37℃诱导4h。
[0017]所述的环状多肽的制备方法，还包括将步骤(2)中得到的环状多肽进一步纯化的步骤；所述的纯化通过如下步骤实现：将异丙基
‑
β
‑
D
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硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后，经超声破菌后，取上清，依次利用金属螯合亲和层析以及离子交换层析进行纯化，然后经SUMO酶处理除去SUMO
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His标签，再利用金属螯合亲和层析进行纯化，得到纯化后的环状多肽。
[0018]所述的环状多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0019]所述的肿瘤包括肝癌。
[0020]所述的环状多肽在制备抑制肝癌细胞生长/或增殖的药物中的应用。
[0021]所述的环状多肽的有效浓度为12.5～100μmol/L；优选为50μmol/L。
[0022]所述的肝癌细胞包括人肝癌细胞SMMC
‑
7721、HepG2、Huh7、MHCC97H和MHCC97L中的至少一种；优选为人肝癌细胞MHCC97L。
[0023]所述的药物可以含有一种或者至少两种药学上可以接受的载体。
[0024]所述的载体优选为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂和润滑剂等。
[0025]所述的药物的剂型为汤剂、片剂、丸剂、胶囊剂、针剂(如粉针剂)、颗粒剂(冲剂)、口服液或糖浆剂。
[0026]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0027]1、本专利技术中的环状多肽(命名为ctSAIF)的酶解稳定性提高，半衰期更长，能够在体内保留时间更长。
[0028]2、本专利技术中的环状多肽ctSAIF对多种肿瘤细胞，包括人肝癌细胞系(7721、HepG2、Huh7、MHCC97H、MHCC97L)都有显著的抑制效果。
[0029]3、本专利技术中的环状多肽ctSAIF抑制小鼠肝癌移植瘤的发展。
[0030]4、本专利技术中的环状多肽ctSAIF可以通过生物工程合成，不会破坏生态环境，易实现产业化，是非常有前景的抗肿瘤药物资源。
[0031]5、本专利技术中的环状多肽ctSAIF在细胞水平和动物水平均有抗肿瘤的效果，因此，可将其用于制备抗肿瘤药物，用于治疗肝癌。
附图说明
[0032]图1是本专利技术中的ctSAIF多肽的设计思路图；其中，A为SAIF体外血清降解实验HPLC图谱；B为SAIF体外血清降解曲线；C为SAIF体外血清降解实验中的总离子流图谱；D为氨基酸序列汇总表。
[0033]图2是本专利技术中的ctSAIF多肽应用生物工程生产合成的过程图；其中，A为诱导前后前后SDS
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PAGE结果图(泳道1：Marker；泳道2：诱导前全菌；泳道3：诱导后全菌；泳道4：诱导后菌裂解液上清；泳道5：诱导后菌裂解液沉淀)；B为纯化前后SDS
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PAGE结果(泳道1：菌体破碎液；泳道2：Ni柱流穿液；泳道3、4：Ni柱两个洗脱峰；泳道5：30Q流穿液；泳道6、7：30Q的两个洗脱峰；泳道8：蛋白分子量标准品)；C为纯化前后SDS
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PAGE结果(泳道1：Marker；泳道2：B2C
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SUMO；泳道3：酶切后Mix；泳道4：Ni柱流穿液；泳道5：Ni柱洗脱峰)；D为ctSAIF的质谱图结果；E为环肽ctSAIF与SAIF体外血清降解曲线。
[0034]图3是本专利技术中的ctSAIF多肽在体外抑制肝癌细胞株生长的结果图；其中，A为两个多肽对人肝细胞7701以及人肝癌细胞系(7721、MHCC97H、HepG2、Huh7、MHCC97L)活力的影
响；B为两个多肽对人肝细胞7701及人肝癌细胞(7721、MHCC97H、HepG2、Huh7、MHCC97L)的克隆形成的抑制作用；C为细胞克隆团的统计直方图。
[0035]图4是本专利技术中的ctSAIF多肽在小鼠体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种环状多肽，其特征在于，氨基酸序列如下所示：CKGKFKRPPLKRVRMSADAMLC。2.权利要求1所述的环状多肽的DNA序列，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种重组表达载体，其特征在于：含有权利要求2所述的环状多肽的DNA序列。4.一种重组菌，其特征在于：通过权利要求3所述的重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞制备得到。5.权利要求1所述的环状多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将权利要求2所述的环状多肽的DNA序列无痕克隆进原核表达载体pET
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N
‑
His
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PreScission
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【专利技术属性】
技术研发人员：洪岸，陈小佳，李福，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：