替尔泊肽的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种替尔泊肽的纯化方法，属于多肽合成纯化技术领域，具体涉及采用了硅胶与3

【技术实现步骤摘要】
替尔泊肽的纯化方法


[0001]本专利技术属于多肽合成纯化
，具体涉及一种替尔泊肽的纯化方法。

技术介绍

[0002]替尔泊肽是一款葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)和胰高血糖素样肽
‑
1(GLP
‑
1)受体双重激动剂，可通过双重作用机制激活参与血糖控制的激素受体GIP和GLP
‑
1两种肠促胰素受体。期临床研究显示，替尔泊肽在显著改善2型糖尿病患者的血糖水平时，还能够降低患者体重。6个月数据显示，替尔泊肽能将2型糖尿病HbA1c水平平均降低2.4％，体重减重11.3kg(12.7％)。替尔泊肽在保持疗效的同时，降低了患者胃肠道不良事件发生率。替尔泊肽的总体安全性与胰高血糖素样肽
‑
1(GLP
‑
1)受体激动剂类别一致。胃肠道副作用是最常见的不良反应，通常发生在剂量递增期，然后随着时间的推移而减少。替尔泊肽除对2型糖尿病和肥胖症疗效显著外，对非酒精性脂肪性肝炎也显示出一定的治疗潜力。
[0003]现有固液混合法制备中的杂质难以去除分离，影响替尔泊肽的收率及纯度。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种分离效果好、纯度高的替尔泊肽的制备方法。
[0005]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：一种替尔泊肽的纯化方法，包括：首先对氨基酸试剂进行活化处理制成氨基酸活化液；然后将含有Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH的氨基酸活化液与Rink Amide AM树脂进行偶联，得到偶联Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
树脂；然后按替尔泊肽的肽序进行偶联、脱保护直至得到替尔泊肽
‑
树脂，采用裂解液对替尔泊肽
‑
树脂进行裂解，得到替尔泊肽粗产物，经分离柱纯化，得到替尔泊肽；分离柱中至少含有硅胶和功能化硅胶；功能化硅胶由活化硅胶与氯丙基硅烷试剂、改性剂经反应化合制成；氯丙基硅烷试剂包括3
‑
氯丙基三乙氧基硅烷，改性剂包括二聚氨基氰和/或乙酰唑胺。本专利技术通过改性处理，在硅胶上引入二聚氨基氰或乙酰唑胺的基团得到功能化硅胶，在将功能化硅胶与硅胶混合，制成分离柱，然后用于肽的纯化，硅胶上的二聚氨基氰或乙酰唑胺的基团与肽粗产物相接触，使目标产物与杂质的保留时间不同，使目标产物与杂质分离，提高肽的纯度。而在将二聚氨基氰和乙酰唑胺共同引入硅胶上后，其对止标肽的分离效果更佳。
[0006]优选地，氨基酸试剂包括如下试剂：Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Pro
‑
OH， Fmoc
‑
Ala
‑
OH，Fmoc
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(OtBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Ile
‑
OH，Fmoc
‑
Leu
‑
OH，Fmoc
‑
Trp
‑
OH，Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH，Fmoc
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Phe
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(AEEA
‑
AEEA
‑
γGlu(α
‑
OtBu)
‑
Eicosanedioic tBu ester)
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH，Fmoc
‑
Asp(OtBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Aib
‑
OH，Fmoc
‑
Tyr(OtBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Thr(OtBu)
‑
OH和 Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH。
[0007]优选地，活化硅胶由硅胶于酸性溶液中活化处理得到。
[0008]优选地，功能化硅胶制备中，首先由3
‑
氯丙基三乙氧基硅烷与硅胶反应制成氯丙基硅胶，然后由改性剂与氯丙基硅胶反应制成；和/或，3
‑
氯丙基三乙氧基硅烷的使用量为
活化硅胶的50
‑
150wt%；和/或，改性剂的使用量为氯丙基硅胶的20
‑
150wt%。
[0009]优选地，功能化硅胶制备中使用的溶剂为甲苯。
[0010]优选地，分离柱中还含有改性硅藻土。
[0011]更优选地，改性硅藻土由乙酰丙酸对硅藻土改性制成；和/或，改性硅藻土的使用量为功能化硅胶的50
‑
200wt%。
[0012]更优选地，乙酰丙酸的使用量为硅藻土的1
‑
5wt%。
[0013]本专利技术公开了一种功能化硅胶在分离纯化多肽中的用途，功能化硅胶由活化硅胶与氯丙基硅烷试剂、改性剂经反应化合制成；氯丙基硅烷试剂包括3
‑
氯丙基三乙氧基硅烷，改性剂包括二聚氨基氰和/或乙酰唑胺。
[0014]本专利技术公开了一种功能化硅胶与改性硅藻土在分离纯化多肽中的用途，功能化硅胶由活化硅胶与氯丙基硅烷试剂、改性剂经反应化合制成；氯丙基硅烷试剂包括3
‑
氯丙基三乙氧基硅烷，改性剂包括二聚氨基氰和/或乙酰唑胺；改性硅藻土由乙酰丙酸对硅藻土改性制成。
[0015]优选地，Fmoc
‑
AEEA
‑
OH的活化液的制备中，将Fmoc
‑
AEEA
‑
OH和HOBt加入DMF中，然后在冰浴下加入DIC，活化5min，得到Fmoc
‑
AEEA
‑
OH的活化液。
[0016]更优选地，Fmoc
‑
AEEA
‑
OH的使用量与DMF的使用量的关系为0.2mol/L。
[0017]更优选地，HOBt的使用量与DMF的使用量的关系为20g/L。
[0018]更优选地，DIC的使用量与DMF的使用量的关系为20 g/L。
[0019]优选地，按上述步骤，制备Fmoc
‑
γGlu(α
‑
OtBu)
‑
OH和二十烷二酸单叔丁基酯的活化液，即将Fmoc
‑
AEEA
‑
OH替换为Fmoc
‑
γGlu(α
‑
OtBu)
‑
OH或二十烷二酸单叔丁基酯。
[0020]优选地，Fmoc
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种替尔泊肽的纯化方法，包括：将替尔泊肽粗产物经分离柱纯化，得到替尔泊肽；所述分离柱中至少含有硅胶和功能化硅胶；功能化硅胶由活化硅胶与氯丙基硅烷试剂、改性剂经反应化合制成；所述氯丙基硅烷试剂包括3
‑
氯丙基三乙氧基硅烷，所述改性剂包括二聚氨基氰和/或乙酰唑胺。2.根据权利要求1所述的一种替尔泊肽的纯化方法，其特征是：所述替尔泊肽粗产物制备中，首先对氨基酸试剂进行活化处理制成氨基酸活化液；然后将含有Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH的氨基酸活化液与Rink Amide AM树脂进行偶联，得到偶联Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
树脂；然后按替尔泊肽的肽序进行偶联、脱保护直至得到替尔泊肽
‑
树脂，采用裂解液对替尔泊肽
‑
树脂进行裂解。3.根据权利要求2所述的一种替尔泊肽的纯化方法，其特征是：所述氨基酸试剂包括如下试剂：Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Pro
‑
OH， Fmoc
‑
Ala
‑
OH，Fmoc
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(OtBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Ile
‑
OH，Fmoc
‑
Leu
‑
OH，Fmoc
‑
Trp
‑
OH，Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH，Fmoc
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Phe
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(AEEA
‑
AEEA
‑
γGlu(α
‑
OtBu)
‑
Eicosanedioic ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辉平，王佳炜，傅小明，邢海英，
申请(专利权)人：杭州湃肽生化科技有限公司，
类型：发明
国别省市：