包括DNA编辑酶的硫代磷酸酯核酸偶联物制造技术

本文尤其提供了能用于体外和体内编辑(例如，修复、修饰)细胞中的DNA的复合物。本文所提供的所述复合物包括通过化学接头结合到硫代磷酸酯核酸的DNA编辑剂。所述化学接头(例如，二硫化物接头)可以是一旦复合物进入细胞内部就解离的接头，从而释放所述DNA编辑剂并允许所述DNA编辑剂接近并编辑细胞靶序列。本文所提供的所述复合物表现出高转染效率和编辑效力，因此提供了有用的治疗工具和诊断工具。因此提供了有用的治疗工具和诊断工具。因此提供了有用的治疗工具和诊断工具。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包括DNA编辑酶的硫代磷酸酯核酸偶联物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年5月22日提交的美国临时申请号63/029,225的权益，该申请以全文引用的方式并入本文并用于所有目的。
[0003]对“序列表”、表格或作为ASCII文件提交的计算机程序列表附录的引用
[0004]写入文件048440
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764001WO_ST25.TXT中的序列表以引用的方式并入本文，该文件创建于2021年5月21日，大小为89,323字节，机器格式为IBM
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PC且系统为MS
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Windows操作系统。
[0005]关于在联邦资助的研究和开发下所作专利技术的权利的声明
[0006]本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的NIH CA247368的政府支持下进行的。政府对本专利技术具有某些权利。

技术介绍

[0007]编辑细胞如T细胞、造血干细胞、癌细胞和其它类型的细胞中的基因可对治疗各种疾病都有很大的影响。作为一个实例，离体CAR
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T细胞中C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的序列。22.一种用于将基因编辑剂递送至细胞的复合物，所述复合物包含：(i)双链硫代磷酸酯寡核苷酸；(ii)第一基因编辑剂，所述第一基因编辑剂通过第一化学接头共价结合到第一硫代磷酸酯核酸；和(ii)第二基因编辑剂，所述第二基因编辑剂通过第二化学接头共价结合到第二硫代磷酸酯核酸；其中所述第一硫代磷酸酯核酸的至少一部分和所述第二硫代磷酸酯核酸的一部分彼此互补，并且其中所述第一硫代磷酸酯核酸的至少一部分与所述第二硫代磷酸酯核酸的至少一部分杂交，从而形成所述双链硫代磷酸酯寡核苷酸。23.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一基因编辑剂和所述第二基因编辑剂独立地是RNA向导的DNA核酸内切酶、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)、锌指核酸酶或Argonaut核酸内切酶。24.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一基因编辑剂和所述第二基因编辑剂独立地是Cas9、Cpf1或II类CRISPR核酸内切酶。25.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一基因编辑剂是第一Cas9并且所述第二基因编辑剂是第二Cas9。26.根据权利要求25所述的复合物，其中所述第一基因编辑剂和所述第二基因编辑剂独立地是核酸酶缺乏型的。27.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一基因编辑剂包含第一半胱氨酸，并且所述第一硫代磷酸酯核酸包含第一硫醇部分，所述第一硫醇部分通过所述第一半胱氨酸和所述第一硫醇部分之间的二硫键共价结合到所述第一基因编辑剂。28.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第二基因编辑剂包含第二半胱氨酸，并且所述第二硫代磷酸酯核酸包含第二硫醇部分，所述第二硫醇部分通过所述第二半胱氨酸和所述第二硫醇部分之间的二硫键共价结合到所述第二基因编辑剂。29.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一硫代磷酸酯核酸结合到所述第一基因编辑剂的C末端。30.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第二硫代磷酸酯核酸结合到所述第二基因编辑剂的C末端。31.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一化学接头和所述第二化学接头独立地是pH敏感性接头。32.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一化学接头和所述第二化学接头独立地是硫酯接头。33.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一硫代磷酸酯核酸和所述第二硫代磷酸酯核酸独立地是硫代磷酸酯脱氧核糖核酸或硫代磷酸酯核糖核酸。34.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一硫代磷酸酯核酸和所述第二硫代磷酸酯核酸在长度上独立地为约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多个核酸残基。35.根据权利要求22所述的复合物，其中所述第一硫代磷酸酯核酸和所述第二硫代磷
酸酯核酸在长度上独立地为约10至约30个核酸残基。36.根据权利要求22所述的复合物，所述复合物进一步包含一种或多种向导RNA，所述一种或多种向导RNA结合到所述第一基因编辑剂或所述第二基因编辑剂。37.根据权利要求22所述的复合物，其中所述复合物形成细胞的一部分。38.根据权利要求37所述的复合物，其中所述细胞是癌细胞或健康细胞。39.根据权利要求37所述的复合物，其中所述细胞是T细胞、嵌合抗原受体(CAR)T细胞、自然杀伤(Nk)细胞、巨噬细胞、神经元细胞或造血干细胞。40.根据权利要求37所述的复合物，其中所述细胞是胰腺癌细胞或卵巢癌细胞。41.根据权利要求22所述的复合物，其中所述一种或多种向导RNA与所述细胞中的一个或多个靶序列互补。42.根据权利要求41所述的复合物，其中所述一个或多个靶序列是STAT
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3靶序列、程序性细胞死亡蛋白1(PDCD1)靶序列、程序性细胞死亡蛋白1(PDCD2)靶序列、Tet甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)靶序列、PARG聚(ADP核糖)糖水解酶靶序列、T细胞受体α(TCR
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a)靶序列、T细胞受体β(TCR
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b)靶序列、血管内皮生长因子Aα(VEGFA
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a)靶序列或血管内皮生长因子Aβ(VEGFA
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b)靶序列。43.根据权利要求36所述的复合物，其中所述一种或多种向导RNA包含SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的序列。44.一种用于将基因编辑剂递送至细胞的复合物，所述复合物包含：(i)双链硫代磷酸酯寡核苷酸；(ii)基因编辑剂，所述基因编辑剂通过第一化学接头共价结合到第一硫代磷酸酯核酸；...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：希望之城，
类型：发明
国别省市：