一种用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、应用和相应分析方法技术

本发明专利技术提供一种用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，所述血清蛋白标志物为肿瘤相关抗原HEXB、TXLNA和SLAMF6的自身抗体中的一种或两种以上的组合。提供检测血清蛋白标志物的试剂的应用、试剂盒和分析方法。本发明专利技术筛选胰腺导管腺癌相关抗原的自身抗体，通过测定这些指标在胰腺导管腺癌和健康对照及胰腺良性疾病对照血清中的表达水平，筛选出的抗

【技术实现步骤摘要】
一种用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、应用和相应分析方法


[0001]本专利技术属于生物医学检测
，具体涉及一种用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、应用和相应分析方法。

技术介绍

[0002]胰腺导管腺癌作为全球范围内第七大癌症死亡的相关原因，是致死率与发病率几乎一致的恶性肿瘤，恶性度极高。据统计，2020年胰腺导管腺癌在全球范围内新增的发病人数为495773人，占癌症发病总人数的2.6％；死亡人数为466003人，占癌症死亡总人数的4.7％。据中国癌症登记报告数据显示，预计2022年中国会有134374例新发的胰腺导管腺癌病例和131203例的胰腺导管腺癌死亡病例，胰腺导管腺癌发病率在全国位列第八，死亡率位列第六。胰腺导管腺癌早期确诊率通常较低，大部分患者确诊时已经是中晚期。由于胰腺导管腺癌容易侵袭、转移和复发，临床上根治难度很大，且化疗的效果不佳，通常胰腺导管腺癌的5年总生存率仅约9％
‑
11％。因此，探索胰腺导管腺癌早期诊断的分子标记物，具有重要的潜在临床价值。
[0003]在肿瘤进展过程中，患者体内会产生一些特异性蛋白产物，被称为肿瘤相关抗原(tumor
‑
associated antigen,TAA)，它们能激活人体内免疫应答反应，从而生成相应的肿瘤相关抗原自身抗体(tumor
‑
associated antigen autoantibody,TAAb)，可能作为肿瘤发生过程中识别异常或失调细胞机制的早期信使员。由于免疫系统具有级联放大作用，使得肿瘤相关抗原自身抗体在机体内可达到较高水平，并在临床症状出现之前被检测到，且具有较高的稳定性以及检测过程对患者创伤性小。因此，肿瘤相关抗原自身抗体具有肿瘤早期诊断标志物的极大潜力。
[0004]常用来识别肿瘤相关抗原及其自身抗体的方法包括血清重组cDNA文库分析、噬菌体展示技术、MAPPing技术、SERPA技术和蛋白质芯片技术等。与其他技术相比，蛋白质芯片技术具有通量高、自动化、分析快速、多种蛋白能够同时检测以及灵敏度高等优点，因此，被广泛应用于多种类型肿瘤的标志物筛选，为癌症的诊疗研究提供了良好的技术支持。蛋白芯片的筛选原理是利用免疫反应中的抗原抗体特异性结合，将确定的抗原蛋白质固载于预先制备好的固体表面，通过一系列的免疫反应，测定血液中不同类型的特异性抗体的表达量。已经有一些癌症通过使用该技术，发现了具有较高诊断价值的肿瘤相关抗原自身抗体，例如食管癌、胃癌和肝癌等。HuProt
TM
人类蛋白质组芯片，包含了超过2万个新测序的重组人源蛋白质，涵盖了16152个基因，覆盖率超过80％，是目前拥有最高通量的蛋白质芯片，它可以用来研究蛋白与蛋白之间，蛋白与核酸之间或蛋白与其他小分子之间的关系，还能用来系统性发现肿瘤相关抗原自身抗体，从而初步发现诊断生物标志物。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于提供一种用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，
assay，ELISA)进行血清抗
‑
TAA自身抗体的检测，能够较准确地鉴别胰腺导管腺癌患者、健康对照及胰腺良性疾病患者，检出的准确性显著高于其他标志物，操作方便、快捷、有效，可用于临床上胰腺导管腺癌的免疫学诊断。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]图1为15种胰腺导管腺癌相关抗原自身抗体在胰腺导管腺癌，胰腺良性疾病和健康血清中的表达水平；
[0031]图2为Logistic回归模型区分胰腺导管腺癌和健康的能力；
[0032]图3为Logistic回归模型区分胰腺导管腺癌和胰腺良性疾病的能力。
具体实施方式
[0033]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本专利技术的技术方案进行详细描述，但下述实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。
[0034]实施例1人类蛋白质组芯片筛选可检测胰腺导管腺癌的候选抗TAAs自身抗体1.1蛋白质芯片检测
[0035]使用HuProt
TM
人类蛋白质组芯片检测10例混合病例标本(其中，3例为2份胰腺导管腺癌标本混合为1份混合标本，余下7例为3份胰腺导管腺癌标本混合为1份混合标本)和10例健康对照标本(其中，6例为混合标本，3份健康对照标本混合为1份混合标本)的表达水平。
[0036]1.1.1人类蛋白质组芯片实验需要的试剂：
[0037](1)封闭液：3ml 10％ BSA，加入7ml 1
×
PBST溶液，混匀后放于冰上；
[0038](2)孵育液：1ml 10％ BSA，加入9ml 1
×
PBST溶液，混匀后放于冰上；
[0039](3)清洗液：1
×
PBST，提前配制并置于4℃冰箱中。
[0040]1.1.2实验步骤：
[0041](1)封闭：使用芯片孵育盒，加入10mL封闭液，将芯片从
‑
80℃取出，正面朝上置于孵育盒中；侧摆摇床50
‑
60rpm，室温，1hr；。
[0042](2)血清样本孵育：封闭完成后，倒尽封闭液，然后迅速加入预先准备好的血清孵育液，侧摆摇床20rpm，4℃过夜孵育(样本先放在4℃层析柜冻融，以1:200比例稀释)；
[0043](3)清洗：孵育完成后，将芯片取出置于加有清洗液的芯片清洗盒，水平摇床，室温80rpm，清洗3次，每次10min；
[0044](4)二抗孵育：将芯片转移到加入了3mL二抗孵育液(按1:1000比例稀释)的孵育盒中，侧摆摇床40rpm，避光，室温1hr；
[0045](5)清洗：将芯片取出(注意不能触及或划破芯片的上表面)，置于加入有清洗液的芯片清洗盒，至于水平摇床上，80rpm，清洗3次，每次10min。完成后用ddH2O清洗2次，每次
10min；
[0046](6)干燥；
[0047](7)扫描：按照扫描仪的操作规范和使用说明操作；
[0048](8)数据提取：将对应GAL文件打开，将芯片图像和GAL文件每个阵列整体对齐，按下自动对齐按钮，提取数据并保存GPR。
[0049]1.2数据处理
[0050]1.2.1数据的预处理
[0051]在进行分析之前，为去除样品和不同芯片间的系统误差，我们对蛋白质芯片的数据进行归一化处理。
[0052](1)蛋白芯片内部的归一化处理
[0053]由于背景值不一致，同一张芯片内部的不同蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，其特征在于，所述血清蛋白标志物为肿瘤相关抗原HEXB、TXLNA和SLAMF6的自身抗体中的一种或两种以上的组合。2.如权利要求1所述的用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，其特征在于：所述血清蛋白标志物为肿瘤相关抗原HEXB、TXLNA和SLAMF6的自身抗体的组合。3.用于检测权利要求1或2所述血清蛋白标志物的试剂在制备用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的产品中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，用于胰腺导管腺癌早期筛查和诊断的产品为试剂盒。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测权利要求1或2所述血清蛋白标志物的试剂。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂为检测所述血清蛋白标志...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶华，蒋东临，刘玲，卢银，刘雨奇，杨鸿伟，云桓，黎天东，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：