一种治疗缺血性脑卒中的组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属药物制剂技术领域，具体涉及一种治疗缺血性脑卒中的组合物及其制备方法和应用。本发明专利技术的组合物由聚氟材料(PEG

【技术实现步骤摘要】
一种治疗缺血性脑卒中的组合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于药物制剂
，具体涉及一种治疗缺血性脑卒中的组合物的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]据统计，脑卒中是全球第二大致死病因，其中缺血性脑卒中占所有脑卒中的60～80％。研究显示，脑血管堵塞造成的病灶血运受损是造成缺血性脑卒中脑损伤的主要原因。目前静脉溶栓被认为是临床治疗缺血性脑卒中最快捷、最有效的方法。然而，研究证实大脑是对氧糖剥夺最敏感的器官，缺氧引起的脑损伤进展十分迅速，在较短时间内会引起不可逆的脑损伤并破坏血脑屏障 (Blood
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brain barrier，BBB)，这使得溶栓治疗具有严格的“时间窗”限制，超过“时间窗”的溶栓治疗会进一步破坏BBB并增加颅内出血的风险，增加缺血性脑卒中的死亡率。基质金属蛋白酶
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9(Matrix metalloproteinase
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9,MMP
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9)是 MMP家族的一员，其在缺血性脑卒中后浸润性白细胞中高表达；以及MMP
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9 可直接破坏BBB的紧密连接，导致脑水肿；有研究显示在缺血早期，提高缺血病灶的氧浓度，抑制MMP
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9分泌，将有利于缓解脑缺氧微环境，保护BBB完整性，从而缓解原发性脑损伤并为溶栓治疗提供更多的机会。
[0003]本专利技术的研究团队前期合成了一种两亲性聚氟材料(PEG
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SMA
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)， PEG<br/>‑
SMA
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具有较强的体内载氧能力，在运输过程中不易泄露而在缺氧组织可快速释放氧气的优点。利用PEG
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SMA
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体内高效携氧的生物功能，将有利于提高对缺血脑组织的供氧能力。此外，还研究发现，由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯醚(PPO)组成的两亲性三嵌段共聚物普朗尼克P123(Pluronic P123， P123)能够显著下调4T1乳腺癌细胞中MMP
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9的表达而抑制肿瘤的转移；利用P123抑制MMP
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9表达的生物功能，将有助于保护BBB的完整性。因此，基于PEG
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SMA
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和P123的纳米粒是缓解脑组织缺氧微环境和保护BBB的理想载体；然而，如何将纳米粒高效运送到缺血病灶仍然是一个亟待解决的问题。
[0004]临床研究显示，小胶质细胞是中枢神经系统内常驻的免疫细胞。M2型小胶质细胞通过分泌抗炎因子、吞噬凋亡或坏死的细胞，在神经保护中发挥着不可或缺的作用。脑缺血时，M2型小胶质细胞可被招募至脑损伤炎症区域。M2 型小胶质细胞膜上高表达淋巴细胞功能相关抗原
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1(Lymphocyte functionassociated antigen
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1,LFA
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1)配体，而其相应的受体细胞间粘附分子
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1 (Intercellular cell adhesion molecule
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1,ICAM
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1)则在脑炎症微血管内皮细胞上过表达。因此，本申请利用M2型小胶质细胞膜制备仿生纳米制剂，将提高纳米粒的脑损伤炎症区域的靶向能力。基于现有技术的现状与基础，本申请的专利技术人拟提供一种治疗缺血性脑卒中的组合物的制备方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，基于现有技术的现状与基础，提供一种治疗缺血性脑卒中的组合物的制备方法。
[0006]本专利技术以两亲性聚氟材料PEG
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和P123制备内核纳米粒(FP)，为增加纳米粒在缺血脑组织的蓄积，以M2型小胶质细胞膜包裹FP形成脑炎症部位趋向性仿生纳米制剂(MFP)。本专利技术利用M2型小胶质细胞的炎症趋向性，制备的组合物，能提高生物功能性载体材料PEG
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SMA
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和P123在脑损伤炎症部位聚集和跨血脑屏障的作用，能实现更好的缺血性脑卒中的治疗效果。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]本专利技术目的之一，公开一种治疗缺血性脑卒中的组合物。
[0009]进一步，提供一种治疗缺血性脑卒中的组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0010](1)FP纳米粒的制备：将P123和PEG
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SMA
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共同溶解于乙醇中，在水浴下减压旋蒸形成薄膜，然后加入纯水后水化形成FP。
[0011](2)MFP纳米粒的制备：将M2型小胶质细胞膜与FP超声混合，反复挤压制得MFP。
[0012]本专利技术目的之二，提供所述组合物在治疗缺血性脑卒中方面的应用。
[0013]本专利技术取得了以下有益效果：
[0014](1)本专利技术首次制备了一种治疗缺血性脑卒中的组合物，解决了现有仿生化纳米制剂炎症趋向性或跨血脑屏障能力有限的问题。
[0015](2)本专利技术制备得到的一种治疗缺血性脑卒中的组合物，可用于缺血性脑卒中缺血早期的治疗，并且该组合物制备方法简单快速，易于批量生产。
附图说明
[0016]图1，治疗缺血性脑卒中的组合物的表征，其中，
[0017](a)FP的TEM图，
[0018](b)MFP的TEM图，
[0019](c)FP和MFP的粒径分布，
[0020](d)FP和MFP的Zeta电位，
[0021](e)M2型BV2细胞、M2型BV2细胞膜、FP和MFP的表面蛋白完整性检测，
[0022](f)M2型BV2细胞、M2型BV2细胞膜、FP和MFP的表面特征蛋白检测，
[0023](g)FP和MFP体外溶氧能力检测。
[0024]图2，FP和MFP抑制缺氧损伤细胞HIF
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1α蛋白表达的结果，其中，
[0025](a)FP和MFP分别与连二亚硫酸钠处理的bEnd.3细胞共同孵育后的细胞内 HIF
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1α蛋白表达的western blot图，
[0026](b)FP和MFP分别与连二亚硫酸钠处理的bEnd.3细胞共同孵育后的细胞内 HIF
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1α蛋白表达的定量测定结果。
[0027]图3，FP和MFP抑制细胞内MMP
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9蛋白表达的结果，其中，
[0028](a)FP和MFP分别与J774A.1细胞共同孵育后的细胞内MMP
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9蛋白表达的 western blot图，
[0029](b)FP和MFP分别与J774A.1细胞共同孵育后的细胞内MMP
‑
9蛋白表达的定量测定结果。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗缺血性脑卒中的组合物，其特征在于，包括两种生物功能性材料和仿生化细胞膜，所述两种生物功能性载体材料分别为具有携氧功能的材料和抑制MMP
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9分泌的材料，通过薄膜水化法形成内核纳米粒；所述仿生化细胞膜为M2型小胶质细胞膜，所述M2型小胶质细胞膜通过挤出的方式包载内核纳米粒，形成治疗缺血性脑卒中的仿生纳米制剂。2.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑卒中的组合物，其特征在于，所述的具有携氧功能的载体材料选自血红蛋白、两亲性聚氟化物聚乙二醇
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聚苯乙烯
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全氟十一烷(PEG
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SMA
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)、全氟化碳。3.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑卒中的组合物，其特征在于，所述抑制MMP
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9分泌的载体材料选自普朗尼克P85、普朗尼克P105或普朗尼克P123。4.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑卒中的组合物，其特征在于，所述的仿生化细胞膜为脑炎症部位趋向性的细胞膜，选自巨噬细胞膜、中性粒细胞膜、血小板膜或M2型小胶质细胞膜(M2型BV2细胞)。5.权利要求1的治疗缺血性脑卒中的组合物的制备方法，其特征在于，其包括步骤：(1)FP纳米粒的制备：将P123和PEG
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SMA
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【专利技术属性】
技术研发人员：沙先谊，何文秀，赵静，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：