包含经修饰的核苷酸的脂质纳米颗粒制造技术

本公开涉及脂质纳米颗粒，其包含(i)一种或多种类型的脂质；(ii)包含编码白细胞介素(IL)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含经修饰的核苷酸的脂质纳米颗粒
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于2020年7月24日申请的美国临时申请No.63/056,382的优先权利益，其全部公开内容都通过引用合并于此。参考通过EFS
‑
WEB以电子方式提交的序列表
[0002]电子提交的序列表(名称：4597_004PC01_Seqlisting__ST25.txt；大小：28,633字节；创建日期：2021年7月21日)的内容通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0003]由于其激活NK细胞和细胞毒性T细胞的能力，IL12蛋白自1994年以来一直被研究作为一种有前途的抗癌治疗剂。参见Nastala,C.L.et al.,J Immunol 153:1697
‑
1706(1994)。但尽管寄予厚望，然而早期的临床研究并没有取得令人满意的结果。Lasek W.et al.,Cancer Immunol Immunother 63:419
‑
435,424(2014)。在大多数患者中，重复施用IL12会导致适应性反应和血液中IL12诱导的干扰素γ(IFN
‑
γ)水平逐渐下降。同前。此外，虽然人们认识到IL12诱导的抗癌活性主要由IFNγ的二次分泌介导，但由IL12伴随诱导IFN
‑
γ与其他细胞因子(例如TNF
‑
α)或趋化因子(IP
‑
10或MIG)引起严重毒性。同前。
[0004]除了负反馈和毒性之外，IL12疗法在临床环境中的边际功效可能是由人体中强烈的免疫抑制环境引起的。同前。为了最大限度地减少IFN
‑
γ的毒性并提高IL12的疗效，科学家们尝试了不同的方法，例如IL12治疗的不同剂量和时间方案。参见Sacco,S.et al.,Blood 90:4473
‑
4479(1997)；Leonard,J.P.et al.,Blood 90:2541
‑
2548(1997)；Coughlin,C.M.et al.,Cancer Res.57:2460
‑
2467(1997)；Asselin
‑
Paturel,C.et al.,Cancer 91:113
‑
122(2001)；和Saudemont,A.et al.,Leukemia 16:1637
‑
1644(2002)。尽管如此，这些方法并未显著影响患者的生存。Kang,W.K.,et al.,Human Gene Therapy 12:671
‑
684(2001)。因此，本
需要使用IL12的改进治疗方法以治疗肿瘤。

技术实现思路

[0005]本公开提供了一种脂质纳米颗粒，其包含：(i)一种或多种类型的脂质；和(ii)经修饰的mRNA，其包含编码白细胞介素(IL)
‑
12分子的序列；其中所述脂质纳米颗粒能够触发免疫原性细胞死亡。在一些方面，所述一种或多种类型的脂质包括阳离子脂质。在一些方面，所述阳离子脂质是式I化合物：
及其盐；其中每个R1独立地是未经取代的烷基；每个R2独立地是未经取代的烷基；每个R3独立地是氢或经取代或未经取代的烷基；并且每个m独立地为3、4、5、6、7或8。在一些方面，至少一个R1是C
11
H
23
。在一些方面，至少一个R3是氢。在一些方面，至少一个m为3。
[0006]在一些方面，所述阳离子脂质是具有以下结构的N1,N3,N5
‑
三(3
‑
(双十二烷基氨基)丙基)苯
‑
1,3,5
‑
三甲酰胺(TT3)：及其盐，其中m为3。在一些方面，所述脂质纳米颗粒包含TT3、1,2
‑
二油酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸乙醇胺(DOPE)、胆固醇和C14
‑
PEG2000。
[0007]在一些方面，所述经修饰的RNA包含经修饰的5'
‑
帽。在一些方面，所述经修饰的5'
‑
帽选自m
27,2
′‑
O
GppspGRNA、m7GpppG、m7Gppppm7G、m
2(7,3
′‑
O)
GpppG、m
2(7,2
′‑
O)
GppspG(D1)、m
2(7,2
′‑
O)
GppspG(D2)、m
27,3
’‑
O
Gppp(m
12
’‑
O
)ApG、(m7G
‑3′
mppp
‑
G；其可等效地表示3
′
O
‑
Me
‑
m7G(5
′
)ppp(5
′
)G)、N7,2
′‑
O
‑
二甲基鸟苷
‑
5'
‑
三磷酸
‑
5'
‑
鸟苷、m7Gm
‑
ppp
‑
G、N7
‑
(4
‑
氯苯氧乙基)
‑
G(5
′
)ppp(5
′
)G、N7
‑
(4
‑
氯苯氧乙基)
‑
m3′‑
O
G(5
′
)ppp(5
′
)G、7mG(5
′
)ppp(5
′
)N、pN2p、7mG(5
′
)ppp(5
′
)NlmpNp、7mG(5
′
)
‑
ppp(5
′
)NlmpN2 mp、m(7)Gpppm(3)(6,6,2
′
)Apm(2
′
)Apm(2
′
)Cpm(2)(3,2
′
)Up、肌苷、N1
‑
甲基鸟苷、2
′
氟鸟苷、7
‑
脱氮杂
‑
鸟苷、8
‑
氧代
‑
鸟苷、2
‑
氨基
‑
鸟苷、LNA
‑
鸟苷、2
‑
叠氮基
‑
鸟苷、N1
‑
甲基假尿苷、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG及其组合。
[0008]在一些方面，所述经修饰的RNA是环状RNA。
[0009]在一些方面，所述经修饰的RNA还包含半衰期延长部分。在一些方面，所述半衰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种脂质纳米颗粒，其包含：(i)一种或多种类型的脂质；和(ii)经修饰的mRNA，其包含编码白细胞介素(IL)
‑
12分子的序列；其中所述脂质纳米颗粒能够触发免疫原性细胞死亡。2.根据权利要求1所述的脂质纳米颗粒，其中所述一种或多种类型的脂质包括阳离子脂质。3.根据权利要求1或2所述的脂质纳米颗粒，其中所述阳离子脂质是式I化合物：及其盐；其中每个R1独立地是未经取代的烷基；每个R2独立地是未经取代的烷基；每个R3独立地是氢或经取代或未经取代的烷基；每个m独立地为3、4、5、6、7或8。4.根据权利要求3所述的脂质纳米颗粒，其中至少一个R1是C
11
H
23
。5.根据权利要求3或4所述的脂质纳米颗粒，其中至少一个R3是氢。6.根据权利要求3至5中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中至少一个m为3。7.根据权利要求3至6中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中每个R1独立地是未经取代的烷基；每个R2独立地是未经取代的烷基，每个R3是氢；每个m是3。8.根据权利要求2至7中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述阳离子脂质是具有以下结构的N1,N3,N5
‑
三(3
‑
(双十二烷基氨基)丙基)苯
‑
1,3,5
‑
三甲酰胺(TT3)：及其盐，其中m为3。
9.根据权利要求2至8中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒包含TT3、1,2
‑
二油酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸乙醇胺(DOPE)、胆固醇和C14
‑
PEG2000。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述经修饰的RNA包含经修饰的5'
‑
帽。11.根据权利要求10所述的脂质纳米颗粒，其中所述经修饰的5'
‑
帽选自m
27,2
′‑
O
Gpp
s
pGRNA、m7GpppG、m7Gppppm7G、m
2(7,3
′‑
O)
GpppG、m
2(7,2
′‑
O)
GppspG(D1)、m
2(7,2
′‑
O)
GppspG(D2)、m
27,3
’‑
O
Gppp(m
12
’‑
O
)ApG、(m7G
‑3′
mppp
‑
G；其能等效地表示3
′
O
‑
Me
‑
m7G(5
′
)ppp(5
′
)G)、N7,2
′‑
O
‑
二甲基鸟苷
‑
5'
‑
三磷酸
‑
5'
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鸟苷、m7Gm
‑
ppp
‑
G、N7
‑
(4
‑
氯苯氧乙基)
‑
G(5
′
)ppp(5
′
)G、N7
‑
(4
‑
氯苯氧乙基)
‑
m3′‑
O
G(5
′
)ppp(5
′
)G、7mG(5
′
)ppp(5
′
)N、pN2p、7mG(5
′
)ppp(5
′
)NlmpNp、7mG(5
′
)
‑
ppp(5
′
)NlmpN2 mp、m(7)Gpppm(3)(6,6,2
′
)Apm(2
′
)Apm(2
′
)Cpm(2)(3,2
′
)Up、肌苷、N1
‑
甲基鸟苷、2
′
氟鸟苷、7
‑
脱氮杂
‑
鸟苷、8
‑
氧代
‑
鸟苷、2
‑
氨基
‑
鸟苷、LNA
‑
鸟苷、2
‑
叠氮基
‑
鸟苷、N1
‑
甲基假尿苷、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG及其组合。12.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述经修饰的RNA是环状RNA。13.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述经修饰的RNA还包含半衰期延长部分。14.根据权利要求1
‑
13中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述半衰期延长部分包括Fc、白蛋白或其片段、白蛋白结合部分、PAS序列、HAP序列、转铁蛋白或其片段、XTEN或其任何组合。15.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述IL
‑
12分子选自由IL
‑
12、IL
‑
12亚基或保留免疫调节功能的突变IL
‑
12分子组成的群组。16.根据权利要求15所述的脂质纳米颗粒，其中所述IL
‑
12包含与SEQ ID NO:1有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一性的氨基酸序列。17.根据权利要求16所述的脂质纳米颗粒，其中所述IL
‑
12分子包含IL
‑
12α和/或IL
‑
12β亚基。18.根据权利要求17所述的脂质纳米颗粒，其中所述IL
‑
12a亚基包含与SEQ ID NO:2有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一性的氨基酸序列。19.根据权利要求17所述的脂质纳米颗粒，其中所述IL
‑
12β亚基包含与SEQ ID NO:3有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一性的氨基酸序列。20.根据权利要求17所述的脂质纳米颗粒，其中所述IL
‑
12α亚基和所述IL
‑
12β亚基通过接头连接。21.根据权利要求20所述的脂质纳米颗粒，其中所述接头包含至少约2个、至少约5个、至少约6个、至少约7个、至少约8个、至少约9个、至少约8个、至少约约10个、至少约11个、至少约12个、至少约13个、至少约14个、至少约15个、至少约16个、至少约17个、至少约18个、至少约19个或至少约20个氨基酸的氨基酸接头。22.根据权利要求21所述的脂质纳米颗粒，其中所述接头包含(GS)接头。
23.根据权利要求22所述的脂质纳米颗粒，其中所述GS接头具有通式(Gly4Ser)n或S(Gly4Ser)n，其中n是选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80或100组成的群组的正整数。24.根据权利要求23所述的脂质纳米颗粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：雅各布，
申请(专利权)人：斯特兰德生物科技公司，
类型：发明
国别省市：