一种用于制备手性醇化合物的羰基还原酶突变体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种羰基还原酶突变体及其用途，所述羰基还原酶突变体是在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸序列存在下述突变：45位的V突变为I(V45I)；141位的G突变为V(G141V，I195L)，195位的I突变为L(I195L)。本发明专利技术羰基还原酶突变体用于手性醇合成时，底物浓度可达100g/L以上，并且有高达99.5％的的立体选择性，酶活性高，催化效率好。本发明专利技术方法与化学合成法相比，显著减少或消除了各类污染性化学品的使用，从而显著降低了环境污染风险。选择了特定的羰基还原酶突变体，酶活性高，立体选择性好，极大地提高生产效率，降低生产成本，适合大规模的工业生产。业生产。业生产。

【技术实现步骤摘要】
一种用于制备手性醇化合物的羰基还原酶突变体及其用途


[0001]本专利技术属于酶工程和有机合成领域，尤其涉及一种用于制备手性醇化合物的羰基还原酶突变体及其用途。

技术介绍

[0002]本专利技术是CN202111154268.7的分案申请。
[0003]手性双醇类化合物是靶向肝脏药物所使用的关键中间体，已在多个临床及临床前研究药物中使用。例如甲磺酸帕拉德福韦，该肝靶向前药目前由西安新通医药股份有限公司开发，已完成临床二期，目前正在开展临床三期。该关键双醇中间体均采用化学的合成路线。
[0004]在专利文献US20030225277中报道了制备方法，工艺路线如下：
[0005][0006]该技术方案需要使用有机催化剂(+)
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DIPCl，该催化剂价格昂贵，工艺操作繁琐，难以应用于规模化生产。使用该工艺路线制备的双醇化合物的手性纯度为98％，为了满足注册申报要求，需要对其手性纯度进行精制，进一步增加了生产成本，整体路线生产成本较高，因此迫切需要一条满足商业生产的制备方法。
[0007]现有技术中有很本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羰基还原酶突变体，其特征在于，是在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸序列存在下述突变：(iii)45位的V突变为I(V45I)；141位的G突变为V(G141V，I195L)，195位的I突变为L(I195L)，其氨基酸序列如SEQ ID No：8所示。2.根据权利要求1所述的羰基还原酶突变体，其特征在于，还包括以下范围：对SEQ ID No:8所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，进行一个或多个氨基酸的替换、缺失、改变、插入或增加，所得到的氨基酸序列；或对SEQ ID No:8所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，在序列的N端或C端进行一个或多个氨基酸的插入，所述插入的氨基酸残基个数为1
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20个；优选1
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10个，更优选1
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5个。3.一种手性双醇类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以式Ⅳ化合物为底物，在辅酶存在下，在权利要求1或2所述羰基还原酶催化下，进行不对称还原反应，得到式
Ⅴ
化合物；其中R基团选自其中R基团选自中的至少一种；X选自F、Cl、Br、I。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述羰基还原酶的加入形式包括菌体、粗酶液、粗酶粉或纯酶。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述反应体系中，所述底物，即式
Ⅵ
化合物的浓度为50～200g/L；更优选为100～150g/L；羰基还原酶的用量与底物质量比率优选为1wt％～6wt％。6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的反...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪国伟，尚中栋，郭元勇，袁培斋，高全喜，张数，郜宪兵，高青磊，
申请(专利权)人：山东寰酶生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：