一种用于制备手性醇化合物的羰基还原酶突变体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种羰基还原酶突变体及其用途，所述羰基还原酶突变体是在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸序列存在下述突变之一或者两种以上的组合：45位的V突变为I(V45I)，63位的K突变为Q(K63Q)，141位的G突变为A(G141A)，141位的G突变为V(G141V)，195位的I突变为L(I195L)，204位的A突变为V(A204V)。本发明专利技术羰基还原酶突变体用于手性醇合成时，底物浓度可达100g/L以上，并且有高达99.5％的的立体选择性，酶活性高，催化效率好。本发明专利技术方法与化学合成法相比，显著减少或消除了各类污染性化学品的使用，从而显著降低了环境污染风险。选择了特定的羰基还原酶突变体，酶活性高，立体选择性好，极大地提高生产效率，降低生产成本，适合大规模的工业生产。业生产。业生产。

【技术实现步骤摘要】
一种用于制备手性醇化合物的羰基还原酶突变体及其用途


[0001]本专利技术属于酶工程和有机合成领域，尤其涉及一种用于制备手性醇化合物的羰基还原酶突变体及其用途。

技术介绍

[0002]手性双醇类化合物是靶向肝脏药物所使用的关键中间体，已在多个临床及临床前研究药物中使用。例如甲磺酸帕拉德福韦，该肝靶向前药目前由西安新通医药股份有限公司开发，已完成临床二期，目前正在开展临床三期。该关键双醇中间体均采用化学的合成路线。
[0003]在专利文献US20030225277中报道了制备方法，工艺路线如下：
[0004][0005]该技术方案需要使用有机催化剂(+)
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DIPCl，该催化剂价格昂贵，工艺操作繁琐，难以应用于规模化生产。使用该工艺路线制备的双醇化合物的手性纯度为98％，为了满足注册申报要求，需要对其手性纯度进行精制，进一步增加了生产成本，整体路线生产成本较高，因此迫切需要一条满足商业生产的制备方法。
[0006]现有技术中有很多使用羰基还原酶及其突变体对羰基进行还原的文献。羰基还原酶可以实现羰基的高立体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羰基还原酶突变体，其特征在于，是在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸序列存在下述突变之一或者两种以上的组合：45位的V突变为I(V45I)，63位的K突变为Q(K63Q)，141位的G突变为A(G141A)，141位的G突变为V(G141V)，195位的I突变为L(I195L)，204位的A突变为V(A204V)。2.根据权利要求1所述的羰基还原酶突变体，其特征在于，在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸序列存在下述突变之一：(i)141位的G突变为A(G141A)，且195位的I突变为L(I195L)，其氨基酸序列如SEQ ID No：4所示；(ii)141位的G突变为V(G141V)，且195位的I突变为L(I195L)，其氨基酸序列如SEQ ID No：6所示；(iii)45位的V突变为I(V45I)；141位的G突变为V(G141V，I195L)，195位的I突变为L(I195L)，其氨基酸序列如SEQ ID No：8所示；(iv)45位的V突变为I(V45I)，141位的G突变为V(G141V，I195L)，195位的I突变为L(I195L)，204位的A突变为V(A204V)，其氨基酸序列如SEQ ID No：10所示；(v)45位的V突变为I(V45I)，63位的K突变为Q(K63Q)，118位的L突变为M(L118M)，141位的G突变为V(G141V，I195L)，204位的A突变为V(A204V)，其氨基酸序列如SEQ ID No：12所示。3.根据权利要求1或2所述的羰基还原酶突变体，其特征在于，还包括以下范围：对SEQ ID No:4、6、8、10、或12所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，进行一个或多个氨基酸的替换、缺失、改变、插入或增加，所得到的氨基酸序列；或对SEQ ID No:4、6、8、10、或12所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，在序列的N端或C端进行一个或多个氨基酸的插入，所述插入的氨基酸残基个数为1
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20个；优选1
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10个，更优选1
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5个。4.一种手性双醇类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以式Ⅳ化合物为底物，在辅酶存在下，在权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：倪国伟，尚中栋，郭元勇，袁培斋，高全喜，张数，郜宪兵，高青磊，
申请(专利权)人：山东寰酶生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：