一种鉴定黑牛肝菌YL1701-2菌株单核体交配型的引物及方法技术

本发明专利技术提供了一种鉴定黑牛肝菌YL1701

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株单核体交配型的引物及方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种鉴定黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株单核体交配型的引物及方法。

技术介绍

[0002]黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)是牛肝菌目(Boletales)小牛肝菌科(Boletinellaceae)脉柄牛肝菌属(Phlebopus)的一种大型真菌，暗褐脉柄牛肝菌(又名暗褐网柄牛肝菌)的商品名。菌种选育是黑牛肝菌产业发展的重中之重，单核体是其杂交育种工作的重要原材料，对单核体交配型的鉴定则是杂交育种的前提条件之一。
[0003]目前，对黑牛肝菌单核体交配型的鉴定主要采取两两对峙培养，镜检锁状联合的方法，然而该方法工作量大，耗时长，对材料观察不全时容易造成误差，很大降低了杂交育种的效率。
[0004]黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株是目前黑牛肝菌工厂化种植使用的主栽品种之一，也是杂交育种工作中最常用到的材料，因此，快速准确鉴定黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株单核体交配型对提升黑牛肝菌杂交育种工作效率具有重要意义。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术实施例提供一种鉴定黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株单核体交配型的引物及方法，能够快速准确地鉴定YL1701
‑
2菌株单核体的交配型，从而提高基于YL1701
‑
2菌株的杂交育种工作效率。
[0006]为达到上述目的，本专利技术主要提供如下技术方案：
[0007]一方面，本专利技术实施例提供一种鉴定黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株单核体交配型的引物，包括：第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对、第五引物对、第六引物对、第七引物对和第八引物对中的一对或多对；
[0008]所述第一引物对具有如序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列；
[0009]所述第二引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示序列；
[0010]所述第三引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列；
[0011]所述第四引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示序列；
[0012]所述第五引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示序列；
[0013]所述第六引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示序列；
[0014]所述第七引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示序列；
[0015]所述第八引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示序列。
[0016]另一方面，本专利技术实施例提供一种鉴定黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株单核体交配型的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物。
[0017]另一方面，本专利技术实施例提供一种鉴定黑牛肝菌YL1701
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2菌株单核体交配型的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括上述的引物。
[0018]另一方面，本专利技术实施例提供一种鉴定黑牛肝菌YL1701
‑
2菌株单核体交配型的方法，其特征在于，包括：
[0019]使用上述的引物对待测单核体菌株的基因组DNA模板进行PCR扩增；
[0020]若使用所述第一引物对、第二引物对、第三引物对或第四引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后得到扩增产物，则所测菌株交配型基因A位点判断为A1型；反之，若使用所述第一引物对、第二引物对、第三引物对或第四引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后无扩增产物，则所测菌株交配型基因A位点判断为A2型；
[0021]若使用所述第五引物对或第六引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后得到扩增产物，或者所述第七引物对或第八引物对进行PCR扩增后无扩增产物，则所测菌株交配型基因B位点判断为B1型；反之，若使用所述第五引物对或第六引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后无扩增产物，或者所述第七引物对或第八引物对进行PCR扩增后得到扩增产物，则所测菌株交配型基因B位点判断为B2型；
[0022]结合交配型基因A、B位点的判断结果，判定所测菌株单核体的交配型，包括A1B1，A1B2，A2B1，A2B2。
[0023]具体地，所述基因组DNA通过CTAB法提取；该CTAB法提取基因组DNA具体为：
[0024]S1：所述待测菌株的菌丝体中加入石英砂和250μL的2
×
CTAB裂解液，研磨至匀浆状，再加入600μL的2
×
CTAB裂解液，颠倒混匀；
[0025]S2：置于65℃水浴1小时，且每10分钟进行翻转；
[0026]S3：加入苯酚和氯仿各300μL，翻转多次后，13000rpm离心10分钟；然后收集上层水相；
[0027]S4：重复步骤S3多次，直至两相界面上无沉淀；
[0028]S5：加入等体积的氯仿抽提一次，收集上层水相；
[0029]S6：加入0.5
–
1倍体积预冷的异丙醇或者2倍体积的无水乙醇，4℃下13000rpm离心10分钟，弃除上清液；
[0030]S7：加入1mL预冷的75％乙醇，翻转多次，13000rpm离心10分钟，弃除上清液，重复两次；
[0031]S8：置于室温或真空系统中干燥；
[0032]S9：加入50μL无菌水室温溶解，于
‑
20℃保存备用。
[0033]具体地，所述PCR扩增的反应体系为：
[0034]50ng/μL的模板1μL，25mM的MgCl
2 5μL，10mM的dNTPs 1μL，6μM的引物各1μL，5U/μL的DNA Taq酶0.2μL，10
×
PCR反应缓冲液5μL，去离子水35.8μL。
[0035]具体地，所述PCR扩增的反应程序为：在95℃预变性5min，94℃变性1min，退火1min，72℃延伸1min，35个循环，72℃延伸10min；
[0036]其中，各引物从SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.16其退火温度分别为59.7℃、59.3℃、55.8℃、62℃、62.7℃、62.5℃、60.9℃、61.2℃、54.3℃、53.9℃、59.6℃、58.2℃、55.25℃、55.9℃、58.4℃、60.4℃。
[0037]进一步地，上述的方法还包括：将扩增后的产物进行电泳鉴定；所述电泳鉴定具体包括将扩增后的产物与加有染色剂的10
×
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定黑牛肝菌YL1701
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2菌株单核体交配型的引物，其特征在于，包括：第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对、第五引物对、第六引物对、第七引物对和第八引物对中的一对或多对；所述第一引物对具有如序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列；所述第二引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示序列；所述第三引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列；所述第四引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示序列；所述第五引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示序列；所述第六引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示序列；所述第七引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示序列；所述第八引物对具有如序列表中如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示序列。2.一种鉴定黑牛肝菌YL1701
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2菌株单核体交配型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的引物。3.一种鉴定黑牛肝菌YL1701
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2菌株单核体交配型的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括如权利要求1所述的引物。4.一种鉴定黑牛肝菌YL1701
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2菌株单核体交配型的方法，其特征在于，包括：使用权利要求1所述的引物对待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增；若使用所述第一引物对、第二引物对、第三引物对或第四引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后得到扩增产物，则所测菌株交配型基因A位点判断为A1型；反之，若使用所述第一引物对、第二引物对、第三引物对或第四引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后无扩增产物，则所测菌株交配型基因A位点判断为A2型；若使用所述第五引物对或第六引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后得到扩增产物，或者所述第七引物对或第八引物对进行PCR扩增后无扩增产物，则所测菌株交配型基因B位点判断为B1型；反之，若使用所述第五引物对或第六引物对对所述待测单核体菌株的DNA模板进行PCR扩增后无扩增产物，或者所述第七引物对或第八引物对进行PCR扩增后得到扩增产物，则所测菌株交配型基因B位点判断为B2型；结合交配型基因A、B位点的判断结果，判定所测菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹旸，纪开萍，罗顺珍，果花，代静，刘霄，纪光燕，
申请(专利权)人：景洪宏臻农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：