具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液及使用方法技术

本发明专利技术涉及化合物新用途技术领域，旨在提供一种具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液及使用方法。该工作液的有效成分是丁酸和棕榈酸，余量为用作溶剂的DMSO和ddH2O，以及用于提供细胞营养和促进细胞生长增殖的细胞培养基；其中，丁酸与细胞培养基的质量比为0.013︰100，棕榈酸与细胞培养基的质量比为0.00064︰100。本发明专利技术试剂用于细胞培养时的增强细胞免疫、缓解细胞周期阻滞效果非常显著。试剂成分均为脂肪酸，是机体细胞代谢产物组分之一，对机体细胞无明显毒副作用，作为调节细胞周期、增强细胞免疫的试剂在使用时更安全、便捷、副作用少。副作用少。副作用少。

【技术实现步骤摘要】
具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液及使用方法


[0001]本专利技术属于化合物新用途
，涉及一种具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液及使用方法。

技术介绍

[0002]丁酸作为一种短链脂肪酸，除了能够提供能量给肠道细胞，还能促进肠道细胞的分化、增殖和成熟外，增强肠道免疫，具有广泛的药理作用，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤活性和代谢调节等。研究报道丁酸对小鼠肠道诱导炎症反应有抑制作用，丁酸可激活结肠内免疫细胞如巨噬细胞，促进T淋巴细胞的分化，最终抑制结肠炎症。丁酸还可以通过抑制内质网应激的PERK
‑
CHOP通路来保护消化腺细胞免于凋亡。
[0003]棕榈酸作为一种长链饱和脂肪酸，常被作为饲料添加剂，可直通过促进促炎细胞因子IL
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6和TNF
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α产生等多种途径或者直接刺激宿主产生免疫应答，尤其是产生IgA抗体，形成肠道黏膜免疫，从而保障肠道免疫屏障功能。
[0004]现有技术中对丁酸和棕榈酸的应用研究，均只局限于两种脂肪酸分别对宿主本体相关细胞的刺激或促进作用以提升宿主本体细胞或机体的免疫能力。关于丁酸、棕榈酸两种脂肪酸组合使用的方法及相应效果研究，目前还未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供丁酸、棕榈酸两种脂肪酸组合使用的新用途，具体是提供一种具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液及使用方法。
[0006]为解决技术问题，本专利技术的技术方案是：
[0007]提供一种具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液，该工作液的有效成分是丁酸和棕榈酸，余量为用作溶剂的DMSO和ddH2O，以及用于提供细胞营养和促进细胞生长增殖的细胞培养基；其中，丁酸与细胞培养基的质量比为0.013︰100，棕榈酸与细胞培养基的质量比为0.00064︰100。
[0008]本专利技术中，所述丁酸的cas号为107
‑
92
‑
6，分子式为C4H8O2，分子量为88.11；所述棕榈酸cas号为57
‑
10
‑
3，分子式为C
16
H
32
O2，分子量为256.424。
[0009]作为本专利技术的优选方案，所述细胞培养基是DMEM培养基、1640培养基、F12培养基或MEM培养基中的任意一种；这些均为成熟的商业化产品，可通过市购获得。
[0010]细胞培养基的有效成分，包括氨基酸、糖、矿物质、维生素、氧化剂和抗生素。作为示例，氨基酸包括：甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、谷氨酸等。糖类包括：葡萄糖、半乳糖、胞糖、聚乳酸和多聚葡萄糖等。矿物质的主要成分有钙、磷、镁、钠、钾等。维生素有维生素B12、烟酰胺、乙酰胆碱、肌醇、叶酸、维生素E和维生素C等。氧化剂包括：蛋白酶去除剂、谷胱甘肽、过氧化氢和吲哚三醇等。抗生素包括：链霉素、链霉素、两性霉素B等。
[0011]本专利技术还提供了前述工作液的制备方法，包括以下步骤：
[0012](1)按25.65mg︰10mL的比例，将棕榈酸溶于DMSO中，得到浓度为10mM的棕榈酸母液；按0.881g︰10mL的比例，将丁酸溶于ddH2O中，得到浓度为1M的丁酸母液；
[0013](2)按母液︰细胞培养基的比例为2.5μL/mL和1.5μL/mL，分别取棕榈酸母液和丁酸母液；然后依次加入细胞培养基中混匀，配成工作液；工作液中丁酸和棕榈酸的百分比含量为分别为0.013％和0.00064％。
[0014]本专利技术进一步提供了前述工作液的使用方法，是将该工作液用于细胞培养。在使用时，丁酸与棕榈酸工作浓度分别为1.5mM和25μM，即每100g(mL)细胞培养基中有0.013g丁酸和0.00064g棕榈酸。
[0015]作为本专利技术的优选方案，按下述任意一种方法使用工作液：
[0016](1)预处理：对于进行中的细胞培养试验，弃去孔板中原有细胞培养基；加入2mL工作液对细胞进行预处理，然后弃去工作液用Hank
’
s液洗两遍，再根据实验方案对细胞进行后续操作；
[0017](2)同时处理：对于进行中的细胞培养试验，弃去孔板中原有细胞培养基，用Hank
’
s液洗两遍；在根据实验方案对细胞进行后续操作的同时，使用2mL工作液进行细胞培养；
[0018](3)后处理：根据实验方案对细胞进行操作后，用Hank
’
s液洗两遍，加入2mL工作液进行细胞培养。
[0019]专利技术原理描述：
[0020]本专利技术提供的组合试剂能调节细胞周期及细胞免疫功能，丁酸可以通过影响关键干扰素刺激因子ISG15上调，直接增强细胞先天免疫功能，棕榈酸可以通过调节CyclinA2等蛋白缓解细胞周期阻滞，促进细胞生长和复制。
[0021]据文献报道，丁酸可通过诱导未成熟的DC细胞、促进T淋巴细胞的分化等，使其发挥特有的细胞免疫功能，棕榈酸则可通过提升免疫细胞的白介素等炎性反应及特异性抗体表达水平，使其特异性免疫功能增强，从而提高抵抗病菌入侵能力。
[0022]本专利技术以上皮细胞等无特化免疫功能且炎性反应较弱的细胞作为研究对象，经过深入研究发现，丁酸可通过干扰素刺激因子ISG15等激活上皮细胞干扰素相关通路，直接增强细胞的先天免疫功能，提升上皮细胞免疫屏障作用。在有棕榈酸同时使用时，干扰素通路的先天免疫分子ISG15的转录及表达水平显著高于没有棕榈酸时，这表明棕榈酸对丁酸产生的直接增强细胞的先天免疫功能具有协同促进作用。棕榈酸可通过调节CyclinA2等蛋白缓解因丁酸引起的细胞周期阻滞，促进细胞生长和复制。同时，在有丁酸共同使用时，CyclinA2的表达水平较棕榈酸单独使用时上调更为显著，提示丁酸对棕榈酸产生的调节细胞周期阻滞、促进细胞生长复制的作用具有协同促进作用。
[0023]结合现有结果及文献报道，丁酸抑制炎症、抑制细胞凋亡的作用，可减轻棕榈酸引起的炎性反应及细胞损伤，从而调节细胞状态；棕榈酸可调节细胞周期，促进细胞生长，从而提升细胞数量。而本专利技术将丁酸与棕榈酸以特定比例组合使用，能使细胞处于良好的生长状态，两者相互协同可达到最优的调节细胞周期及细胞免疫功能效果。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的技术效果是：
[0025]1、本专利技术所述试剂用于增强细胞免疫、缓解细胞周期阻滞效果非常显著。实验证明在IPEC
‑
J2细胞上可显著提高的细胞先天免疫标志分子ISG15及细胞周期标志分子
CyclinA2的表达水平，所述试剂应用于细胞感染病毒试验时呈现出抗病毒活性，可以缓解病毒感染导致的细胞周期阻滞现象，显著降低细胞内病毒拷贝数，抑制病毒蛋白表达。
[0026]2、不同于目前用于细胞免疫功能及细胞周期调节的激素、抗生素、人工合成化学物等类型的药物，所述试剂成分丁酸及棕榈酸均为脂肪酸，是机体细胞代谢产物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液，其特征在于，该工作液的有效成分是丁酸和棕榈酸，余量为用作溶剂的DMSO和ddH2O，以及用于提供细胞营养和促进细胞生长增殖的细胞培养基；其中，丁酸与细胞培养基的质量比为0.013︰100，棕榈酸与细胞培养基的质量比为0.00064︰100。2.根据权利要求1所述的工作液，其特征在于，所述丁酸的cas号为107
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92
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6，分子式为C4H8O2，分子量为88.11；所述棕榈酸cas号为57
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10
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3，分子式为C
16
H
32
O2，分子量为256.424。3.根据权利要求1所述的工作液，其特征在于，所述细胞培养基是DMEM培养基、1640培养基、F12培养基或MEM培养基中的任意一种，其有效成分包括氨基酸、糖、矿物质、维生素、氧化剂和抗生素。4.权利要求1所述具备调节细胞周期及细胞免疫功能的工作液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)按25.65mg︰10mL的比例，将棕榈酸溶于DMSO中，得到浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：单颖，毛俊勇，张楚妮，徐计东，李肖梁，方维焕，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：