一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用，实验动物：SD大鼠(体重180

【技术实现步骤摘要】
一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体来说，涉及一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用。

技术介绍

[0002]肺动脉高压是一种由多种原因导致的肺动脉内压力异常升高的常见心肺疾病。以肺小动脉血管重构、肺动脉血管平滑肌细胞的增殖的为主要病理特征，表现为肺循环压力和阻力增加，可出现右心负荷增大，右心功能不全，肺血流减少，从而引起一系列临床表现，病程中肺动脉高压常呈进行性发展，成为严重威胁人类生命健康的疾病，野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压成为研究人类肺血管压力的主要模型，临床上用于治疗肺动脉高压的药物非常有限，只能提高患者的生活质量，而不能延长他们的生命，因此，寻找治疗该病的新的有效药物迫在眉睫，陈皮性辛温而苦，辛能散，温能和，苦能燥能泻，为脾、肺气分之药，调中快膈，导滞消痰，洁古曰：陈皮定呕止嗽，利水破症，宣通五脏，统治百病，川陈皮素作为中药陈皮的有效提取物，具有抗氧化、抗心肌重塑、抗炎等多种药理作用，在心脑血管疾病中应用广泛，川陈皮素的广泛作用促使我们探索它是否具有减轻肺动脉高压的作用及其潜在的分子机制，川陈皮素大鼠灌胃给药可减轻野百合碱诱导引起的大鼠平均肺动脉压升高、肺血管重构和右室肥厚，其机制可能是通过PI3K/Akt/STAT3途径抑制炎症，因此，川陈皮素作为一种利用率高、价格低廉、生物安全性好的中药提取物，将为肺动脉高压的治疗提供新的线索，也将为众多肺动脉高压患者带来福音，血流动力学检测中大鼠肺动脉压力的检测是本研究项目的技术关键，针对这些问题拟开展的主要研究内容：1)研究川陈皮素对野百合碱诱导大鼠肺动脉压力升高和右心室肥厚指数的影响；2)研究川陈皮素对野百合碱诱导大鼠肺动脉重构的影响；3)研究川陈皮素对野百合碱诱导大鼠肺组织炎症因子IL
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6,IL
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1β和TNF
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α的影响；4)研究川陈皮素是否通过PI3K/Akt/STAT3信号通路的抑制改善野百合碱诱导大鼠肺动脉高压；5)研究川陈皮素是否通过PI3K/Akt/STAT3信号通路抑制野百合碱诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖和炎症反应。

技术实现思路

[0003]针对相关技术中的问题，本专利技术提出一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用，以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。
[0004]为此，本专利技术采用的具体技术方案如下：
[0005]一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用，
[0006]步骤一，采用野百合碱构建肺动脉高压大鼠模型，并对构建的肺动脉高压大鼠模型基于安全剂量范围根据连续给药方案进行川陈皮素给药。
[0007]步骤二，获取肺动脉高压大鼠模型的右心室、左心室及隔膜的重量数据，测定血流动力学，并基于获取的数据计算肺血管阻力、平均肺动脉压以及右心肥厚指数。
[0008]步骤三，获取肺动脉高压大鼠模型的肺组织，采用苏木精
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伊红染色分析肺血管重
构的组织病理学病变状态。
[0009]步骤四：采用ELISA检测大鼠肺组织中炎症因子IL
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6、IL
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1β和TNF
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α表达。
[0010]步骤五：用CCK
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8检测PASMCs的增殖情况，在96孔板中接种了约3000个PASMC，PASMC牢固贴壁后，与1％胎牛血清同步培养24h，用20ng/ml PDGF
‑
BB和10μmol/l川陈皮素处理PASMC 24h，在37℃孵育1.5h后，加入10μl CCK
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8，用微板仪测定细胞在450nm处的吸光度。
[0011]作为本专利技术的进一步方案，步骤一中的肺动脉高压大鼠模型包括实验动物：SD大鼠，适应性喂养1周后，大鼠随机分为6组：对照组、模型组、西地那非治疗组、川陈皮素低剂量治疗组、中剂量川陈皮素治疗组、大剂量川陈皮素治疗组。
[0012]作为本专利技术的进一步方案，大鼠皮下注射1％ MCT 60mg/kg，从注射MCT的第1天开始，相应组别给予川陈皮素和西地那非，1次/d，连续3周，给药3周后处死大鼠，导管通过颈静脉插入肺动脉以测量肺动脉压力，并将另一根导管插入左侧颈动脉测量全身动脉压，采用热稀释法测定心输出量，肺血管阻力(PVR)方程：PVR＝平均肺动脉压(MPAP)/心输出量(CO)，血流动力学测定后，打开大鼠胸腔，采集右室静脉血，取大鼠心、肺组织，多聚甲醛固定，石蜡包埋，取左肺作组织学检查，右肺保存于
‑
80℃，为评价右室肥厚，将右室(RV)、左室(LV)和室间隔(L V+S)分开称重，计算富尔顿指数(Fulton Index)：RV/(L V+S)，所有血流动力学测量成功的大鼠的数据均纳入最终分析。
[0013]作为本专利技术的进一步方案，所有实验数据均以均值
±
标准差表示，数据分析采用单因素方差分析，然后进行Student Newman
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Keuls多组比较，P<0.05时，差异有统计学意义。
[0014]本专利技术的有益效果为：川陈皮素作为中药陈皮的有效提取物，具有抗氧化、抗心肌重塑、抗炎等多种药理作用，本技术研究结果表明：川陈皮素的治疗可显著降低mPAP、PVR和RV/[LV+S]，并且与阳性药西地那非相比展示出相似的药效强度(见图1)；川陈皮素可以显著抑制野百合碱诱导的肺血管重构和肺小动脉肌化(见图2)，川陈皮素能减轻野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺组织炎症因子IL
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6,IL
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1β、TNF
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α水平(见图3)，川陈皮素通过抑制PI3K/Akt/STAT3信号通路的激活减轻野百合碱诱导大鼠肺动脉高压(见图4)，此外，细胞实验结果也表明川陈皮素可以抑制PDGF
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BB诱导的肺动脉血管平滑肌细胞的增殖(见图5)，通过实验研究首次发现了川陈皮素具有减轻野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的作用，并能抑制PDGF
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BB诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖，首次发现川陈皮素通过抑制PI3K/Akt/STAT3信号通路减轻野百合碱诱导肺动脉高压的作用机制，进一步为野百合碱诱导所致肺动脉高压患者提供新药筛选和临床诊治提供理论依据，通过转化为临床试验造福广大肺动脉高压患者，值得进一步研究。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0016]图1所示：川陈皮素对大鼠肺动脉高压发展的影响，
[0017]A：大鼠平均肺动脉压(mPAP)
[0018]B：大鼠肺血管阻力(PVR)
[0019]C：大鼠右心室肥厚指数(RV/[LV+S])
[0020本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用，其特征在于，步骤一，采用野百合碱构建肺动脉高压大鼠模型，并对构建的肺动脉高压大鼠模型基于安全剂量范围根据连续给药方案进行川陈皮素给药；步骤二，获取肺动脉高压大鼠模型的右心室、左心室及隔膜的重量数据，测定血流动力学，并基于获取的数据计算肺血管阻力、平均肺动脉压以及右心肥厚指数；步骤三，获取肺动脉高压大鼠模型的肺组织，采用苏木精
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伊红染色分析肺血管重构的组织病理学病变状态；步骤四：采用ELISA检测大鼠肺组织中炎症因子IL
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6、IL
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1β和TNF
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α表达；步骤五：用CCK
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8检测PASMCs的增殖情况，在96孔板中接种了约3000个PASMC，PASMC牢固贴壁后，与1％胎牛血清同步培养24h，用20ng/mlPDGF
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BB和10μmol/l川陈皮素处理PASMC 24h，在37℃孵育1.5h后，加入10μlCCK
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8，用微板仪测定细胞在450nm处的吸光度。2.根据权利要求1所述的一种川陈皮素在肺动脉高压心肺动物模型中的应用，其特征在于，步骤一中的肺动脉高压大鼠模型包括实验动物：SD大鼠，适应性喂养1周后，大鼠随机分为6...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹琴，杨洁，范存愈，李娟，梅凤，彭雅丽，
申请(专利权)人：湖北省中西医结合医院湖北省职业病医院，
类型：发明
国别省市：