尿酸酶-白蛋白偶联物、其制备方法及其用途技术

本申请文件公开了一种尿酸酶

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】尿酸酶
‑
白蛋白偶联物、其制备方法及其用途


[0001]本说明书公开了将非天然氨基酸位点特异性地引入其中的尿酸氧化酶变体及其制备方法、在其中通过接头将尿酸氧化酶变体与白蛋白偶联的偶联物及其制备方式。此外，本说明书公开了尿酸氧化酶白蛋白偶联物的用途。
[0002]
技术介绍

[0003]尿酸氧化酶(尿酸酶，Uricase)是一种在灵长类动物(包括人)中无法合成的酶，它的功能是将尿酸分解为尿囊素。尿酸氧化酶具有将尿酸(其为痛风的主要原因)分解为可排泄形式的直接治疗机制，因此具有强烈的降低尿酸效果的优势。然而，尿酸氧化酶在治疗痛风方面的用途有限，因为1)由于在体内的半衰期短，它只能用作注射剂；以及2)因为它是外部来源的蛋白质，当施用至身体时免疫应答发生，导致副作用。
[0004]在另一方面，已经报道治疗性蛋白在治疗各种疾病中是有效的，并且它是制药工业的重要增长动力之一。然而，有一个问题是，治疗性蛋白通过患者身体中的肾小球滤过、胞饮作用和免疫应答被不断去除。因此，当开发治疗性蛋白时，通过降低它由于这种现象而被从患者的身体中去除的速率来延长药物作用的持续时间是非常重要的。通过将白蛋白物理地或化学地结合至治疗性蛋白来改善半衰期以解决问题的技术被称为白蛋白化。
[0005]在本说明书中，为了解决当使用尿酸氧化酶作为治疗剂时可能出现的上述问题，公开了通过尿酸氧化酶的白蛋白化产生的尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物。
[0006]
技术实现思路

技术问题
[0007]本说明书旨在提供尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物。
[0008]本说明书旨在提供制备尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物的方法。
[0009]本说明书旨在提供包含在尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物中的尿酸氧化酶变体。
[0010]本说明书旨在提供制备尿酸氧化酶变体的方法。
[0011]本说明书旨在提供包含尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物的药物组合物。
[0012]本说明书旨在提供尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物的用途。
[0013]技术方案
[0014]在本说明书中，由式1表示的尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物：[式1]Uox
‑
[J1‑
A
‑
J2‑
HSA]n
，其中，Uox是尿酸氧化酶变体，J1是尿酸氧化酶
‑
接头接合处，A是锚(anchor)，J2是白蛋白
‑
接头接合处，HSA是人血清白蛋白，尿酸氧化酶变体包含三种以上的具有二烯官能团的非天然氨基酸，通过非天然氨基酸的二烯官能团和连接至锚的亲二烯官能团的逆电子需求的Diels
‑
Alder(IEDDA)反应形成尿酸氧化酶
‑
接头接合处，并且n是3或4。
[0015]本文提供了尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物，包含：3或4个由式2表示的白蛋白亚基偶
联物：[式2]p
’‑
J1‑
A
‑
J2‑
HSA，其中，p
’
是尿酸氧化酶变体亚基，J1是尿酸氧化酶
‑
接头接合处，A是锚，J2是白蛋白
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接头接合处，HSA是人血清白蛋白。通过用含有四嗪官能团或三嗪官能团的非天然氨基酸置换野生型尿酸氧化酶亚基序列中的至少一个氨基酸形成尿酸氧化酶变体亚基。通过非天然氨基酸的四嗪或三嗪官能团与连接至锚的反式环辛烯官能团之间的逆电子需求的Diels
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Alder(IEDDA)反应形成尿酸氧化酶
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接头接合处；以及任选地，一个尿酸氧化酶变体亚基，当所述尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物包含三个白蛋白亚基复合物，并且所述尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物包含一个尿酸氧化酶变体亚基时，每个白蛋白亚基复合物的尿酸氧化酶变体亚基与一个尿酸氧化酶变体亚基低聚以形成四聚体。当尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物包括四个白蛋白
‑
亚基复合物时，所述尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物不包含尿酸氧化酶变体亚基，并且相应的白蛋白
‑
亚基复合物的尿酸氧化酶变体亚基低聚以形成四聚体。
[0016]本说明书公开了用于预防或治疗尿酸相关疾病的药物组合物，所述药物组合物包含：治疗有效量的尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物和药学上可接受的运载体。
[0017]在一个实施方式中，所述尿酸相关疾病是以下的任何一种：高尿酸血症、急性痛风性关节炎、间歇性痛风、慢性结节性痛风、慢性肾脏疾病，以及肿瘤溶解综合征(TLS)。
[0018]在一个实施方式中，所述药学上可接受的运载体包括选自以下的一种或多种：粘合剂，例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、支链淀粉、纤维素或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙等；崩解剂，例如玉米淀粉或甘薯淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂富马酸钠或聚乙二醇蜡；甜味剂；空气清新剂；糖浆；液体运载体，例如脂肪油；无菌水性溶液；丙二醇；聚乙二醇；可注射的酯，例如油酸乙酯；悬浮剂；乳剂；冻干制剂；外用制剂；稳定剂；缓冲剂；动物油；植物油；蜡；石蜡；淀粉；西黄蓍胶；纤维素衍生物；聚乙二醇；硅；膨润土；二氧化硅；滑石；和氧化锌。
[0019]本说明书公开了尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物应用于尿酸相关疾病的治疗剂的制备中的用途。
[0020]本说明书公开了制备尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物的方法，所述方法包括：使白蛋白和接头反应，其中，所述接头包含亲二烯官能团、锚和硫醇反应性部分，其中，接头的硫醇反应性部分通过反应与白蛋白的硫醇部分结合以形成白蛋白
‑
接头偶联物；以及使所述白蛋白
‑
接头偶联物和尿酸氧化酶变体反应，其中，所述尿酸氧化酶变体通过用包含二烯官能团的非天然氨基酸互换野生尿酸氧化酶序列中的三个以上的氨基酸形成，其中，所述尿酸氧化酶变体的二烯官能团和所述白蛋白
‑
接头偶联物的亲二烯官能团通过逆电子需求Diels
‑
Alder(IEDDA)反应结合以形成尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物，其中，所述尿酸氧化酶变体的特征在于通过接头结合三种以上的白蛋白。
[0021]本说明书公开了尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物，包含：在其序列中的三个以上的非天然氨基酸，其中，每个非天然氨基酸包含四嗪官能团或三嗪官能团。
[0022]在一个实施方式中，所述尿酸氧化酶变体是通过一个野生型尿酸氧化酶亚基和三个尿酸氧化酶变体亚基的低聚而形成的四聚体，其中，每个尿酸氧化酶变体亚基通过用包含四嗪官能团或三嗪官能团的非天然氨基酸置换野生型尿酸氧化酶亚基序列中的一个或多个氨基酸而形成。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种由[式1]表示的尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物：[式1]Uox
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[J1‑
A
‑
J2‑
HSA]
n
其中，Uox是尿酸氧化酶变体，J1是尿酸氧化酶
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接头接合处，A是锚，J2是白蛋白
‑
接头接合处，HSA是人血清白蛋白，n是3或4，所述尿酸氧化酶变体是由四个尿酸氧化酶变体亚基低聚而形成的四聚体，所述尿酸氧化酶变体亚基中的每一个是独立地选自于SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：50的肽，或与选自于SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：50的肽具有90％以上的一致性的肽；所述选自于SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：50的肽包含非天然氨基酸X，所述非天然氨基酸X是4
‑
(1,2,3,4
‑
四嗪
‑3‑
基)苯丙氨酸(frTet)，所述尿酸氧化酶
‑
接头接合处是由所述尿酸氧化酶变体的所述非天然氨基酸的四嗪部分和连接至所述锚的反式环辛烯基部分之间的逆电子需求Diels
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Alder(IEDDA)反应所形成的结构，所述尿酸氧化酶
‑
接头接合处由以下表示，其中，所述(1)连接至所述非天然氨基酸的残基，所述(2)连接至所述锚，其中，所述白蛋白
‑
接头接合处是通过所述白蛋白的硫醇部分和所述锚的硫醇反应性部分之间的反应所形成的结构。2.如权利要求1所述的尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物，其中，所述尿酸氧化酶变体包含四个SEQ ID NO：29的尿酸氧化酶变体亚基，其中，所述SEQ ID NO：29的非天然氨基酸X是frTet。3.如权利要求1所述的尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物，其中，所述白蛋白
‑
接头接合处选自以下：以及
其中，所述(1)连接至所述白蛋白，并且所述(2)连接至所述锚。4.如权利要求1所述的尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物，其中，所述锚选自以下：以及其中，J1是尿酸氧化酶
‑
接头接合处，J2是白蛋白
‑
接头接合处。5.如权利要求1所述的尿酸氧化酶
‑
白蛋白偶联物，其中，所述白蛋白是选自于SEQ ID NO：133至SEQ ID NO：144的序列，或与选自于SEQ ID NO：133至SEQ ID NO：144的序列具有90％以上的一致性的序列。6.一种用于制造尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物的方法，所述方法包括：使白蛋白和接头反应，其中，所述接头包含亲二烯官能团、锚和硫醇反应性部分，其中，所述亲二烯官能团是反式环辛烯或反式环辛烯的衍生物，并且所述硫醇反应性部分选自于马来酰亚胺或马来酰亚胺的衍生物以及3
‑
芳基丙炔腈或3
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芳基丙炔腈的衍生物，其中，所述接头的硫醇反应性部分与白蛋白的硫醇部分通过反应结合以形成白蛋白
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接头偶联物；以及使所述白蛋白
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接头偶联物和尿酸氧化酶变体反应，其中，所述尿酸氧化酶是其中四个尿酸氧化酶亚基低聚的四聚体，其中，所述尿酸氧化酶亚基中的每一个由独立地选自于SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：50的序列所表示，或者由与选自于SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：50的序列具有90％以上的一致性的序列所表示，其中，SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：50的序列的X为非天然氨基酸，所述非天然氨基酸为4
‑
(1,2,3,4
‑
四嗪
‑3‑
基)苯丙氨酸(frTet)，其中，所述尿酸氧化酶变体包含四个frTet，
其中，所述frTet的残基的四嗪官能团通过逆电子需求Diels
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Alder(IEDDA)反应与所述接头的亲二烯官能团结合以形成尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物，并且其中，所述尿酸氧化酶
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白蛋白偶联物的特征在于三个以上的白蛋白通过所述接头偶联至所述尿酸氧化酶变体。7.如权利要求6所述的方法，所述接头选自以下：所述接头选自以下：以及8.如权利要求6所述的方法，其中，所述尿酸氧化酶变体是四个由SEQ ID NO：29所表示的尿酸氧化酶变体亚基进行低聚的四聚体，其中，SEQ ID NO：29的X是frTet。9.如权利要求6所述的方法，其中，所述白蛋白由选自SEQ ID NO：133至SEQ ID NO：144的序列或与选自SEQ ID NO：133至SEQ ID NO：144的序列具有90％以上的一致性的序列表示，其中，所述接头的硫醇反应性部分通过反应与所述白蛋白序列的第34位...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵正行，申先伍，金炫宇，金亨锡，朴东浩，权仁赞，梁炳燮，
申请(专利权)人：ProAb生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：