一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法及其应用，所述方法包括以下步骤：将待测样品与内标工作溶液、沉淀剂混合，之后采用小柱进行过滤，取滤液进行液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法及其应用


[0001]本专利技术属于临床检测领域，具体涉及一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法及其应用，尤其涉及一种准确度高的同时检测血液中多种抗菌药物的方法及其应用。

技术介绍

[0002]阿米卡星、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑及泊沙康唑均为临床上常用的抗菌药物。其中阿米卡星、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶可针对严重的细菌感染，伏立康唑及泊沙康唑则为抗真菌的药物。由于这五种药物的过量使用均会造成不良反应或引发患者中毒，使用量不足时又无法抑制菌群生长甚至产生耐药性，故应对其在血液中的浓度进行及时监测。
[0003]针对这几种药物的检测，目前市面上有微生物法、HPLC法及LC
‑
MS法等等，但对于同时检测血浆中阿米卡星、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑及泊沙康唑五种抗菌药物的方法则未见报道，针对合并细菌及真菌感染的免疫力低下的病人，如HIV病人，这几种药物存在联合用药的可能，因此需要建立一种同时检测这五种抗菌药物的方法，以确保这五种药物的浓度均在合适的抑菌范围内，且应建立一种快速、准确的检测手段，以满足临床实验室随到随检的要求。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法及其应用，尤其提供一种准确度高的同时检测血液中多种抗菌药物的方法及其应用。本专利技术提供的方法能够同时检测多种抗菌药物，并且处理速度快，检测速度快，准确度高。
[0005]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一方面，本专利技术提供了一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0007]将待测样品与内标工作溶液、沉淀剂混合，之后采用小柱进行过滤，取滤液进行液相色谱
‑
质谱检测，结合标准曲线计算结果。
[0008]所述抗菌药物包括阿米卡星、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑或泊沙康唑中至少三种的组合。
[0009]本专利技术提供的方法能够同时检测多种抗菌药物，且处理速度快，检测速度快，准确度高；采用小柱进行过滤，相比常规离心法能够显著减少处理时间；并通过小柱与沉淀剂相互配合，既能够减少处理时间，又能够避免产生的沉淀对液相分离和后续检测的影响。
[0010]优选地，所述抗菌药物为阿米卡星、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑和泊沙康唑的组合。
[0011]本专利技术提供的方法能够同时检测上述五种极性和溶解性相差较大的抗菌药物，为临床检测提供了一种便捷有效全新的方法。
[0012]优选地，所述沉淀剂为甲酸的乙腈溶液，其中甲酸的体积分数为0.5
‑
7％，例如
0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％或7％等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0013]上述特定沉淀剂相比其他沉淀剂能够有效提高待测抗菌药物的峰面积。
[0014]优选地，所述待测样品与内标工作溶液、沉淀剂的体积比为(40
‑
70):(2
‑
10):(170
‑
280)，其中待测样品的比例份数可以是40、45、50、55、60、65或70等，内标工作溶液的比例份数可以是2、3、4、5、6、7、8、9或10等，沉淀剂的比例份数可以是170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270或280等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0015]优选地，所述小柱为谱易快萃取小柱。
[0016]优选地，所述采用小柱进行过滤后还对滤液进行稀释，所述稀释用的试剂为氨水水溶液。
[0017]优选地，所述液相色谱中，流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为甲酸、添加剂混合水溶液，所述流动相B为甲酸、添加剂混合甲醇溶液。
[0018]优选地，所述添加剂为甲酸铵、乙酸铵或氨水中任意一种或至少两种的组合。
[0019]上述特定流动相通过添加甲酸和添加剂，能够有效减少拖尾现象，提高检测的准确度。
[0020]优选地，所述流动相A和流动相B中甲酸的体积分数独立地为0.05
‑
0.15％，所述添加剂的浓度独立地为3
‑
10mM。
[0021]优选地，所述液相色谱中，流速为0.3
‑
0.8mL/min，柱温为30
‑
40℃，进样量为2
‑
10μL。
[0022]其中，甲酸的体积分数可以是0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％或0.15％等，添加剂的浓度可以是3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM或10mM等，流速可以是0.3mL/min、0.4mL/min、0.5mL/min、0.6mL/min、0.7mL/min或0.8mL/min等，柱温可以是30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃或40℃等，进样量可以是2μL、3μL、4μL、5μL、6μL、7μL、8μL、9μL或10μL等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0023]优选地，所述液相色谱洗脱过程为梯度洗脱，所述梯度洗脱的流程如下：
[0024]第0
‑
2min，流动相A的体积分数由90％匀速变为5％，流动相B的体积分数由10％匀速变为95％；
[0025]第2
‑
3min，流动相A的体积分数为5％，流动相B的体积分数为95％；
[0026]第3
‑
3.1min，流动相A的体积分数由5％匀速变为90％，流动相B的体积分数由95％匀速变为10％；
[0027]第3.1
‑
4.5min，流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％。
[0028]另一方面，本专利技术还提供了如上所述的方法在临床上抗菌药物检测中的应用。
[0029]相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
[0030]本专利技术提供了一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法，且处理速度快，检测速度快，准确度高；采用小柱进行过滤，相比常规离心法能够显著减少处理时间；并通过小柱与沉淀剂相互配合，既能够减少处理时间，又能够避免产生的沉淀对液相分离和后续检测的影响。
附图说明
[0031]图1是实施例1中五种抗菌药物典型色谱图。
[0032]图2是实施例3中仅使用甲酸作为流动相添加剂时的阿米卡星色谱结果；
[0033]图3是实施例3中仅使用甲酸和乙酸铵作为流动相添加剂时的阿米卡星色谱结果；
[0034]图4是实施例4中仅使用甲酸和甲酸铵(5mM)作为流动相添加剂时的阿米卡星色谱结果；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测血液中多种抗菌药物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将待测样品与内标工作溶液、沉淀剂混合，之后采用小柱进行过滤，取滤液进行液相色谱
‑
质谱检测，结合标准曲线计算结果；所述抗菌药物包括阿米卡星、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑或泊沙康唑中至少三种的组合。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗菌药物为阿米卡星、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑和泊沙康唑的组合。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述沉淀剂为甲酸的乙腈溶液，其中甲酸的体积分数为0.5
‑
7％。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其特征在于，所述待测样品与内标工作溶液、沉淀剂的体积比为(40
‑
70):(2
‑
10):(170
‑
280)。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其特征在于，所述小柱为谱易快萃取小柱。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其特征在于，所述采用小柱进行过滤后还对滤液进行稀释，所述稀释用的试剂为氨水水溶液。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱中，流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为甲酸、添加剂混合水溶液，所述流动...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：美罗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：