CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用，属于生物技术领域。本发明专利技术首次提出CD73

【技术实现步骤摘要】
CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用。

技术介绍

[0002]糖尿病可引起皮肤炎症、皮肤大疱、皮肤感染和硬化性水肿等皮肤损伤，造成皮肤血供减少，伴随着真皮结缔组织和其他附属器官受损。糖尿病皮肤损伤属于慢性创面，患者多以中老年为主。相关研究表明，其发生多与病原微生物、炎症介质、不等渗糖分子、晚期糖基化终末产物(AGEs)等在皮肤损伤局部形成一个特殊的细胞微环境，损伤局部修复细胞呈现不活泼的低反应性，细胞增殖、迁移、分化等修复功能下降，创面局部血管新生、再上皮化等迟缓等机制有关，成为临床防治的重点和难点。因此，探究糖尿病皮肤损伤的治疗方法具有重要的现实意义。
[0003]细胞移植疗法为糖尿病皮肤损伤的治疗带来了新的曙光。脂肪间充质干细胞(ADMSCs)因其易于获取、伦理问题少，体外增殖速度快等优点，具有广阔的应用前景。目前本领域采用ADMSCs进行疾病的治疗时大多采用的是未分选ADMSCs混合细胞群，使用纯化的ADMSCs细胞亚群开展的体内外研究鲜有报道。此外，在体外所培养的ADMSCs有多种免疫表型表达，但是缺乏特异的标记分子。大部分扁平细胞伴随损失一个或多个MSC表面标记，主要缺乏CD73表达。前期实验结果表明CD105、CD56显示出高度协同的表达特性，而CD73的表达呈现出高度异质性，且与培养时间呈负相关，其在MSC分化的早期阶段下调。推测CD73可能是描述ADMSCs最敏感的标记物，可为细胞治疗糖尿病皮肤损伤提供细胞筛选的分子参考标准和实验依据。
[0004]糖尿病皮肤损伤创面愈合过程可以被恶劣的缺氧微环境(HME)所阻碍，HME由一系列内源性和外源性因素组成，如局部出血、细菌感染和微血管病变
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缺氧反馈循环等。急性缺氧可通过缺氧诱导因子HIF
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1促进血管生成，而糖尿病慢性缺氧可通过多个因素抑制血管生成，例如，暴露于高糖水平可通过调节HIF
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1α翻译后羟化和降解导致HIF
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1α稳定性降低，进而逆转缺氧诱导的血管内皮生长因子(VEGF)的表达。在这些病理条件下，正反馈加重了缺血缺氧综合征。CD73又称为胞外
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核苷酸酶，通过糖基
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磷脂酰肌醇锚定于细胞膜外表面，本质上是一种糖蛋白，具有酶活性和信号转导的双重功能。本领域尚未有关于CD73阳性ADMSCs对糖尿病皮肤损伤具有治疗优势的相关报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用，首次提出纯化的CD73
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ADMSCs较ADMSCs和CD73
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ADMSCs明显增加血管密度，促进血管新生，进而促进糖尿病皮肤损伤创面愈合，治疗效果显著。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用。
[0008]本专利技术还提供了CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进糖尿病创面愈合产品中的应用。
[0009]本专利技术还提供了CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进血管新生产品中的应用。
[0010]本专利技术还提供了CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进人脐静脉血管内皮细胞迁移和/或愈合产品中的应用。
[0011]本专利技术还提供了CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进血管内皮生长因子A表达产品中的应用。
[0012]优选的，所述产品包括药物。
[0013]优选的，所述糖尿病包括2型糖尿病。
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015]本专利技术首次提出CD73
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ADMSCs比ADMSCs和CD73
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ADMSCs更易促进糖尿病创面愈合，纯化的CD73
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ADMSCs与ADMSCs和CD73
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ADMSCs相比，能够明显增加血管密度，促进血管新生，促进创面愈合，治疗效果较好，是治疗糖尿病皮肤损伤的优势亚群。
[0016]在临床应用领域，本专利技术首次提出CD73可以作为细胞体外扩增，使用时的质量控制鉴定标准。
附图说明
[0017]图1不同组别hADMSCs上清培养HUVEC细胞的结果，其中A为Transwell小室实验结果，bars＝100μm，**p<0.01，B为划痕实验结果，bars＝100μm，**p<0.01；
[0018]图2为不同组别ADMSCs对糖尿病压疮小鼠皮肤创面作用结果，其中A为各组细胞皮下移植治疗C57BL/6N糖尿病压疮小鼠，创面愈合的图像，bars＝100μm；B为细胞移植后糖尿病压疮组织中VEGFA的IHC染色结果，bars＝100μm，**p<0.05；C为VEGFR2转基因糖尿病压疮小鼠接受各组细胞移植，第7天用小动物活体成像仪进行拍照的结果，**p<0.01；D为第7天采集创面蛋白样品，Westernblotting检测不同组别HIF
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1α和VEGFA的表达结果，**p<0.01；
[0019]图3为对CD73
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hADMSCs和CD73
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hADMSCs进行基因芯片分析的结果，其中A为CD73
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和CD73
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hADMSCs细胞内的差异表达基因热图；B为在CD73的差异表达基因中筛选出TOP20基因并分析相关的信号通路结果；C为根据热图做出GO分析图展示与CD73相关的信号通路结果。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用。
[0021]本专利技术对于脂肪间充质干细胞的具体来源没有特殊限定。在本专利技术中，所述产品优选的包括药物。
[0022]本专利技术还提供了CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进糖尿病创面愈合、促进血管新生、促进人脐静脉血管内皮细胞迁移和/或愈合、促进血管内皮生长因子A表达产品中的应用。
[0023]本专利技术以从人体美容术后所取脂肪组织为取材标本，培养ADMSCs，以CD73为分选标准，采用流式细胞仪分选出CD73
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ADMSCs和CD73
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ADMSCs。本专利技术将培养的人ADMSCs移植入糖尿病皮肤损伤小鼠体内，发现并无明显的免疫排斥反应。在本专利技术中，所述产品优选的包括药物，所述糖尿病优选的包括2型糖尿病。
[0024]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0025]下述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CD73在制备增强脂肪间充质干细胞促血管新生产品中的应用。2.CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进糖尿病创面愈合产品中的应用。3.CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进血管新生产品中的应用。4.CD73
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脂肪间充质干细胞在制备促进人脐静脉...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琼，侯慧芳，张达，孙雪雪，王国栋，李宗金，郭志坤，崔朝初，
申请(专利权)人：新乡医学院三全学院，
类型：发明
国别省市：