用于基因表达调节的非阴离子多核苷酸类似物的基于肽的转导制造技术

本文描述了用于经由合成肽穿梭剂将非阴离子多核苷酸类似物货物递送至真核细胞的胞质溶胶/细胞核隔室的组合物和方法。所述非阴离子多核苷酸类似物货物能够是电荷中性或阳离子的，并且所述合成肽穿梭剂是包含具有带正电荷的亲水性外面和疏水性外面两者的两亲性α

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于基因表达调节的非阴离子多核苷酸类似物的基于肽的转导
[0001]本说明书涉及非阴离子多核苷酸类似物货物的细胞内递送。更具体地，本说明书涉及合成肽穿梭剂用于细胞内递送非阴离子多核苷酸类似物货物的用途。
[0002]本说明书引用了许多文献，将其内容通过引用以其整体并入本文。

技术介绍

[0003]大多数非阴离子多核苷酸类似物货物遭受与它们的细胞内递送相关的问题，经常需要它们与递送部分共价缀合，从而使它们的合成和商业化更加复杂。增加非阴离子多核苷酸类似物货物的胞质溶胶/细胞核递送的改善的方法是非常希望的。

技术实现思路

[0004]合成肽穿梭剂表示一种最近定义的肽家族，其先前被报道为快速且高效地将蛋白质货物转导到许多种靶真核细胞的胞质溶胶和/或细胞核中。与传统的基于细胞穿透肽的细胞内递送策略相反，合成肽穿梭剂不共价连接至其多肽货物。事实上，将穿梭剂共价连接至其货物通常对它们的转导活性有负面影响。WO/2016/161516中描述了第一代此类肽穿梭剂，其中所述肽穿梭剂包含与细胞穿透结构域(CPD)可操作地连接的内体渗漏结构域(ELD)。WO/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，所述组合物包含用于细胞内递送的非阴离子多核苷酸类似物货物和独立于或不共价连接至所述非阴离子多核苷酸类似物货物的合成肽穿梭剂，所述合成肽穿梭剂是包含具有带正电荷的亲水性外面和疏水性外面两者的两亲性α
‑
螺旋基序的肽，其中与不存在所述合成肽穿梭剂的情况相比，合成肽穿梭剂增加所述非阴离子多核苷酸类似物货物在真核细胞中的胞质溶胶/细胞核递送。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述非阴离子多核苷酸类似物货物是电荷中性或阳离子的反义合成寡核苷酸(ASO)。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述非阴离子多核苷酸类似物货物是：(a)具有磷酸二酰胺骨架、酰胺(例如，肽)骨架、甲基膦酸酯骨架、中性磷酸三酯骨架、砜骨架或三唑骨架的电荷中性多核苷酸类似物货物；或(b)具有氨基烷基化氨基磷酸酯骨架、胍鎓骨架、S
‑
甲基硫脲骨架或核苷基氨基酸(NAA)骨架的阳离子多核苷酸类似物货物。4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述非阴离子多核苷酸类似物货物是磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(PMO)、肽核酸(PNA)、甲基膦酸酯寡聚物、或短干扰核糖核酸中性寡核苷酸(siRNN)。5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述非阴离子多核苷酸类似物货物是5至50聚体、5至75聚体、或5至100聚体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述非阴离子多核苷酸类似物货物不共价连接至细胞穿透肽、八胍树枝状聚合物、或其他细胞内递送部分。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述穿梭剂是：(1)长度为至少12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的肽，所述肽包含(2)两亲性α
‑
螺旋基序，其具有(3)带正电荷的亲水性外面和疏水性外面，其中遵守以下参数(4)至(15)中的至少五个：(4)基于每圈具有3.6个残基的α
‑
螺旋的开放圆柱形表示，所述疏水性外面包含由空间上相邻的L、I、F、V、W和/或M氨基酸组成的高疏水性核心，所述氨基酸占所述肽的氨基酸的12％至50％；(5)所述肽具有3.5至11的疏水力矩(μ)；(6)所述肽在生理pH下具有至少+3或+4的预测净电荷；(7)所述肽具有8至13的等电点(pI)；(8)所述肽由35％至65％的以下氨基酸的任何组合构成：A、C、G、I、L、M、F、P、W、Y和V；(9)所述肽由0％至30％的以下氨基酸的任何组合构成：N、Q、S和T；(10)所述肽由35％至85％的以下氨基酸的任何组合构成：A、L、K或R；(11)所述肽由15％至45％的以下氨基酸的任何组合构成：A和L，前提是所述肽中存在至少5％的L；(12)所述肽由20％至45％的以下氨基酸的任何组合构成：K和R；(13)所述肽由0％至10％的以下氨基酸的任何组合构成：D和E；(14)所述肽中A和L残基的百分比(A+L％)与所述肽中K和R残基的百分比(K+R)之间的差小于或等于10％；以及
(15)所述肽由10％至45％的以下氨基酸的任何组合构成：Q、Y、W、P、I、S、G、V、F、E、D、C、M、N、T和H。8.根据权利要求7所述的组合物，其中：(a)所述穿梭剂遵守参数(4)至(15)中的至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或遵守其全部；(b)所述穿梭剂是具有12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸的最小长度和40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、60、65、70、80、90、100、110、120、130、140或150个氨基酸的最大长度的肽；(c)所述两亲性α
‑
螺旋基序具有在3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0的下限与9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9或11.0的上限之间的疏水力矩(μ)；(d)所述两亲性α
‑
螺旋基序包含带正电荷的亲水性外面，基于连续氨基酸之间的旋转角为100度的α
‑
螺旋和/或每圈具有3.6个残基的α
‑
螺旋，所述带正电荷的亲水性外面包含：(i)在螺旋轮投影时至少两个、三个或四个相邻的带正电荷的K和/或R残基；和/或(ii)在螺旋轮投影时包含三至五个K和/或R残基的六个相邻残基的区段；(e)所述两亲性α
‑
螺旋基序包含疏水性外面，基于连续氨基酸之间的旋转角为100度的α
‑
螺旋和/或每圈具有3.6个残基的α
‑
螺旋，所述疏水性外面包含：(i)在螺旋轮投影时至少两个相邻L残基；和/或(ii)在螺旋轮投影时包含选自L、I、F、V、W和M的至少五个疏水性残基的十个相邻残基的区段；(f)所述疏水性外面包含高疏水性核心，所述高疏水性核心由空间上相邻的L、I、F、V、W和/或M氨基酸组成，所述氨基酸占所述穿梭剂的氨基酸的从12.5％、13％、13.5％、14％、14.5％、15％、15.5％、16％、16.5％、17％、17.5％、18％、18.5％、19％、19.5％或20％至25％、30％、35％、40％或45％；(g)所述穿梭剂具有在4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0的下限与9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4或10.5的上限之间的疏水力矩(μ)；(h)所述穿梭剂具有在+3、+4、+5、+6、+7、+8、+9至+10、+11、+12、+13、+14或+15之间的预测净电荷；(i)所述穿梭剂具有10至13的预测pI；或(j)(a)至(i)的任何组合。9.根据权利要求7或8所述的组合物，其中所述穿梭剂遵守以下参数中的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或全部：(8)所述穿梭剂由36％至64％、37％至63％、38％至62％、39％至61％或40％至60％的以下氨基酸的任何组合构成：A、C、G、I、L、M、F、P、W、Y和V；(9)所述穿梭剂由1％至29％、2％至28％、3％至27％、4％至26％、5％至25％、6％至24％、7％至23％、8％至22％、9％至21％或10％至20％的以下氨基酸的任何组合构成：N、Q、S和T；(10)所述穿梭剂由36％至80％、37％至75％、38％至70％、39％至65％或40％至60％的
以下氨基酸的任何组合构成：A、L、K或R；(11)所述穿梭剂由15％至40％、20％至40％、20％至35％或20％至30％的以下氨基酸的任何组合构成：A和L；(12)所述穿梭剂由20％至40％、20％至35％或20％至30％的以下氨基酸的任何组合构成：K和R；(13)所述穿梭剂由5％至10％的以下氨基酸的任何组合构成：D和E；(14)所述穿梭剂中A和L残基的百分比(A+L％)与所述穿梭剂中K和R残基的百分比(K+R)之间的差小于或等于9％、8％、7％、6％或5％；以及(15)所述穿梭剂由15％至40％、20％至35％或20％至30％的以下氨基酸的任何组合构成：Q、Y、W、P、I、S、G、V、F、E、D、C、M、N、T和H。10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述穿梭剂包含富含组氨酸的结构域，任选地其中所述富含组氨酸的结构域：(i)朝向所述穿梭剂的N末端和/或C末端定位；(ii)是包含至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％或至少90％组氨酸残基的至少3、至少4、至少5或至少6个氨基酸的延伸段；和/或包含至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8或至少9个连续组氨酸残基；或(iii)(i)和(ii)两者。11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述穿梭剂包含富含丝氨酸和/或甘氨酸残基的柔性接头结构域(例如，分隔所述穿梭剂的N末端和C末端区段；或定位在中心两亲性阳离子α螺旋结构域的N末端和/或C末端)。12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述穿梭剂包含以下氨基酸序列或由其组成：(a)[X1]
‑
[X2]
‑
[接头]
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[X3]
‑
[X4](式1)；(b)[X1]
‑
[X2]
‑
[接头]
‑
[X4]
‑
[X3](式2)；(c)[X2]
‑
[X1]
‑
[接头]
‑
[X3]
‑
[X4](式3)；(d)[X2]
‑
[X1]
‑
[接头]
‑
[X4]
‑
[X3](式4)；(e)[X3]
‑
[X4]
‑
[接头]
‑
[X1]
‑
[X2](式5)；(f)[X3]
‑
[X4]
‑
[接头]
‑
[X2]
‑
[X1](式6)；(g)[X4]
‑
[X3]
‑
[接头]
‑
[X1]
‑
[X2](式7)；或(h)[X4]
‑
[X3]
‑
[接头]
‑
[X2]
‑
[X1](式8)，(i)[接头]
‑
[X1]
‑
[X2]
‑
[接头](式9)；(j)[接头]
‑
[X2]
‑
[X1]
‑
[接头](式10)；(k)[X1]
‑
[X2]
‑
[接头](式11)；(l)[X2]
‑
[X1]
‑
[接头](式12)；(m)[接头]
‑
[X1]
‑
[X2](式13)；(n)[接头]
‑
[X2]
‑
[X1](式14)；(o)[X1]
‑
[X2](式15)；或(p)[X2]
‑
[X1](式16)，其中：
[X1]选自：2[Φ]
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2[Φ]
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1[ζ]
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；2[Φ]
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2[Φ]
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2[+]
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；1[+]
‑
1[Φ]
‑
1[+]
‑
2[Φ]
‑
1[ζ]
‑
1[+]
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；和1[+]
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1[Φ]
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1[+]
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2[Φ]
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2[+]
‑
；[X2]选自：
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2[Φ]
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2[Φ]
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2[ζ]
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；
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2[Φ]
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2[Φ]
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2[+]
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；
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2[Φ]
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2[Φ]
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1[ζ]
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；
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2[Φ]
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2[Φ]
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1[ζ]
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；
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2[Φ]
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2[+]
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1[Φ]
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2[+]
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；
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2[Φ]
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2[+]
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1[Φ]
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2[ζ]
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；
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2[Φ]
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2[+]
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1[Φ]
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1[ζ]
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；和
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2[Φ]
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2[+]
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1[Φ]
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；[X3]选自：
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G
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A；[X4]选自：
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A；

【专利技术属性】
技术研发人员：JP，
申请(专利权)人：费尔丹生物公司，
类型：发明
国别省市：