一种快速高效构建条件性基因敲除动物模型的方法及应用技术

本发明专利技术属于动物模型构建技术领域，披露了一种构建条件性基因敲除动物模型的方法，针对靶基因外显子区域设计sgRNA靶点序列，构建质粒，将PiggyBACmRNA和质粒显微注射到C57/B6受精卵中，得到sgRNA/Cas9转基因动物，将组织特异性Cre

【技术实现步骤摘要】
一种快速高效构建条件性基因敲除动物模型的方法及应用


[0001]本专利技术属于动物模型构建
，更具体的，涉及一种快速高效构建条件性基因敲除动物模型的方法及应用。

技术介绍

[0002]CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeat sequences)/Cas9系统是一种有效简单的基因组工程工具，该技术的基本原理是：单链指导RNA(Single guide,sgRNA)可以靶向目的基因的序列并与之进行特异性结合，sgRNA引导Cas9核酸酶对目的序列进行切割，进而导致DNA双链的断裂(Double
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strandbreaks，DSB)。最后通过同源重组(Homology directed repair，HDR)或非同源末端连接(Non
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homologous endjoining，NHEJ)等内源性的DNA修复方式进行修复，在断裂处插入异常的碱基或者使碱基缺失，造成移码突变，最终实现基因敲除的目的。该技术因其系统成分简单、操本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种构建条件性基因敲除动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、针对靶基因区域设计sgRNA序列；S2、构建PiggyBAC质粒：设计sgRNA表达元件，扩增目的片段，并将sgRNA表达元件和目的片段连接至载体骨架上得到PiggyBAC质粒；S3、将PiggyBACmRNA和PiggyBAC质粒注射入小鼠受精卵中，培育受精卵并传代至F1代即sgRNA/Cas9转基因小鼠；S4、将sgRNA/Cas9转基因小鼠与组织特异性Cre
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driver品系进行繁育，得到针对靶基因的条件性基因敲除动物模型。2.权利要求1所述的方法在构建小鼠子宫特异性敲除Foxa2小鼠模型中的应用。3.一种用于构建Foxa2基因敲除小鼠动物模型的特异性靶位点sgRNA，其特征在于，包括sgRNA1、RNA2、sgRNA3和RNA3，所述sgRNA1、RNA2、sgRNA3和RNA3的序列如下：sgRNA1：AAGGGCACGAGCCATCCGAC；sgRNA2：CAGCTACTACGCGGAGCCCG；sgRNA3：CGGTTCCGGCAACATGAGCG；sgRNA4：GGAATGAGCCCGTCGCTAGC。4.一种子宫特异性敲除Foxa2小鼠模型的快速构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建PiggyBAC质粒：设计针对权利要求3所述sgRNA的表达元件，扩增目的片段，并将sgRNA表达元件和目的片段连接至P...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨世华，张子琦，郑展宏，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：