表达lncRNAENSBTAT00000084270ORF区的载体及应用制造技术

本发明专利技术属于基因生物工程技术领域，公开一种用于表达lncRNA ENSBTAT00000084270ORF区的载体，所述载体是通过将6

【技术实现步骤摘要】
表达lncRNA ENSBTAT00000084270 ORF区的载体及应用


[0001]本专利技术属于基因生物工程
，涉及重组蛋白载体，尤其是一种用于表达lncRNA ENSBTAT00000084270 ORF区的载体及其应用。

技术介绍

[0002]目前已知的RNA根据功能主要分为两大类：编码RNA(mRNA)和非编码RNA(ncRNA)，ncRNAs根据结构分为大RNA和小RNA。随着生物信息学的发展和各类高通量技术的应用，研究发现非编码RNA(ncRNAs)是除mRNA之外基因组转录的主要产物，具有多种生物功能，几乎参与所有重要的细胞生命过程。其中长链非编码RNA(lnc RNA)是一类长度大于200个核苷酸的ncRNA，主要存在于细胞核中，能够通过多种方式参与动物体生命活动的调节。最初研究认为lnc RNA可以作为重要的转录调节因子，参与基因表达调控，但没有编码功能，不能产生肽类产物。但随着研究的不断深入，越来越多的研究证实很多被定义为“非编码”的lncRNA是具有编码潜能，在这类lncRNA上存在着大量的短的，非典型性的开放阅读框(sORF)，这些sORF在特定时期或组织中可以与核糖体结合启动翻译过程，编码产生短微肽，参与机体生命活动。但是因为这些功能性微肽序列较短，表达丰度大多数比较低，同时，传统的蛋白肽段注释通常定义为至少包含100个氨基酸以上的肽段，因此，这类由sORF编码产生的微肽通常被判定为“转录噪声”而被忽略了。但随着测序技术，特别是翻译组测序的发展，在不同的生物体中鉴定出了很潜在的功能性微肽。而筛选和鉴定新的微肽并解析其生物学功能也称为了新的研究热点。
[0003]目前，各国学者已经通过多种手段鉴定出了很多潜在的微肽，但因为微肽序列短，特异性抗体不易获得，同时表达量也比较低，其检测和功能分析成为了一个难点。
[0004]骨骼肌卫星细胞是肌源性干细胞，能进行肌肉的增殖分化和再生。因此利用骨骼肌卫星细胞作为肌肉发育机制研究模型有利于开展骨骼肌发育机制研究，对于深入解析肌肉发育进程，开展肌损伤修复研究及肌源性疾病治疗具有重要作用，已有相关研究证实由非编码RNA编码产生的微肽在肌肉发育过程中具有一定的作用。因此，筛选和鉴定肌发育相关的功能性微肽无论对生物发育规律的研究还是肌源性疾病的治疗都具有积极意义。
[0005]通过检索，尚未发现与本专利技术专利申请相关的专利公开文献。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术上存在的问题，提供一种用于表达lncRNA ENSBTAT00000084270 ORF区的载体及其应用。
[0007]本专利技术解决技术问题所采用的技术方案是：
[0008]一种用于表达lncRNAENSBTAT00000084270 ORF区的载体，所述载体的核心表达原件由广谱强启动子CMV，T7启动子，6
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His表达标签，3
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FLAG表达标签和lncRNA ENSBTAT00000084270 ORF区核酸序列组成，所述载体是通过将6
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His表达标签，3
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FLAG表达标签和ENSBTAT00000084270的预测ORF区核酸序列串联连接在空载质粒pcDNA3.1
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HisB
上获得的；
[0009]其中，ENSBTAT00000084270的预测ORF区核酸序列为SEQ ID NO.1。
[0010]进一步地，所述载体的构建方法包括如下步骤：
[0011]依据多组学分析结果获得的ENSBTAT00000084270的ORF核酸序列信息，体外合成末端带有Xho I和Xba I酶切位点以及6
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His和3
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FLAG表达标签的目标片段序列(目标片段序列为：
[0012]CTCGAGGCCACCATGCATCATCACCATCACCATGACTACAAGGACGACGACGACAAGGATTACAAGGATGATGATGATAAGGACTATAAGGACGATGATGACAAGTGCACTCTCGGGGGAAGGGAGGCCAGGGCACAGGCAGGGGCGAGGGGCCAGAGCCGGGCACCGAGCCAGTGGGAGGGGCATTGGACTTCGAGCTCGTGGCCAAGGCGGGCCTCTGCGGGCGATGACGGAGCGGGATCGGTGCCTCTGAGCTCGGAACGGAGACGGAGCCACGTCTCCAGTGGGGTGTTGGTGCCTGCCAGCCACGGAGGCCGGGCGGCCAGGACGCGCACAGAGGGATATGATATGGTCCGGTGTGATGGAGAGAGCAGGCGGGACCGTCCAGCCTCCCAGGTGAGTGCAGATGCGGGCGGTGCCCCCACCCGGGGCCCGCTGACCCGCACTGAGCCTCATAGGCGCCTCTCTCCCATAGGACACTGGCCCCGCGGGGAGCCCGGATATCGACGTTCCTTTAGTCTCCTGACGGAGCAGACACACCACTGCTGCTCTTCAGACACCCAGAACCCTCAAGATGACAAGGTGAGAGGGCCCGCCACATGCAGGGTGGCGGGGCGCATGGGCCCCAGAGGTGGGCACTCACGCTCTCCCTCCCCGCAGAGATGGTGCTACCCAGCTCATGCCTGGGACTTGGAACACGGACTTCTTCAAGTCTTCTAGTCTAGA)；将ENSBTAT00000084270 ORF区的体外合成片段经酶切后与pcDNA3.1
‑
hisB空载质粒进行连接，获得融合蛋白载体。
[0013]进一步地，所述载体的构建方法还包括如下步骤：
[0014]获得的体外表达产物，并用考马斯亮蓝法和Western blot的方法验证其表达情况。
[0015]如上所述的载体在证实非编码RNA的ENSBTAT00000084270具有编码潜能方面中应用。
[0016]如上所述的载体在表达融合蛋白方面中的应用。
[0017]如上所述的载体在编码功能性微肽方面中的应用。
[0018]本专利技术取得的有益效果是：
[0019]1、本专利技术利用lncRNAENSBTAT00000084270的体外表达载体
[0020]pcDNA3.1
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HisB
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ENSBTAT00000084270，获得ENSBTAT00000084270体外表达产物，通过验证产物的表达水平，说明非编码RNAENSBTAT00000084270具有编码潜能，能编码产生微肽。
[0021]2、利用本专利技术建立的融合蛋白载体pcDNA3.1
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hisB
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ENSBTAT00000084270，为后续开展更为深入的ENSBTAT00000本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于表达lncRNAENSBTAT00000084270ORF区的载体，其特征在于：所述载体的核心表达原件由广谱强启动子CMV，T7启动子，6
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His表达标签，3
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FLAG表达标签和lncRNAENSBTAT00000084270ORF区核酸序列组成，所述载体是通过将6
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His表达标签，3
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FLAG表达标签和ENSBTAT00000084270的预测ORF区核酸序列串联连接在空载质粒pcDNA3.1
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HisB上获得的；其中，ENSBTAT00000084270的预测ORF区核酸序列为SEQ ID NO.1。2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于：所述载体的构建方法包括如下步骤：依据多组学分析结果获得的ENSBTAT00000...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新，郭若楠，张林林，罗锦堂，郭益文，胡德宝，丁向彬，郭宏，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：