一种用于miRNA-222检测的碳点构建Y型DNA结构的电致化学发光生物传感器制造技术

技术编号:38523897 阅读:71 留言:0更新日期:2023-08-19 17:01
本发明专利技术公开一种用于miRNA

【技术实现步骤摘要】
具有的高导电性、生物兼容性和比表面积大的特点,而被用来富集固载大量CDs,实现其在传感界面的有效富集,达到增强信号的目的,再结合锁核酸技术,构建“Y”型DNA结构的电致化学发光生物传感器,成功实现甲状腺乳头状癌相关基因miRNA

222的检测。
[0008]3. 本专利技术的一种用于miRNA

222检测的碳点构建Y型DNA结构的电致化学发光生物传感器,依序包括如下步骤:(1)碳点(CDs)的合成碳纤维作为前驱体,采用硝酸为氧化剂,利用加热回流法合成CDs。实验过程如下:首先精确称取750 mg碳纤维剪成细碎小段后,置于250 mL三颈圆底烧瓶中,于圆底烧瓶加入150 mL 7.5M的硝酸溶液,使用球形冷凝管冷凝回流,油浴锅加热至圆底烧瓶中反应溶液沸腾,以溶液沸腾开始计时,反应12个小时后,结束反应,自然冷却至室温,收集反应后的溶液。加入适量的NaOH固体,将合成的CDs溶液pH调至中性后,以8000 rpm的转速离心10 min ,以去除沉淀。然后依次用微孔滤膜过滤(0.45 μm和0.22 μm)去除杂质,将过滤溶液装入截留分子量(M本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于miRNA

222检测的碳点构建Y型DNA结构的电致化学发光生物传感器,其特征在于,结合碳点CDs和锁核酸技术构建一种“Y”型DNA结构的电致化学发光生物传感器,用于甲状腺乳头状癌相关基因miRNA

222的特异灵敏检测。2.根据权利要求1所述的用于miRNA

222检测的碳点构建Y型DNA结构的电致化学发光生物传感器,其特征在于,用于检测miRNA

222的锁核酸探针包括:(1)双氨基修饰锁核酸发卡捕获探针(CP),序列:5'

NH2‑
C6‑
GGCTGTTTTTT GAGA(C
L
)CCACGATAGATTTTTTTCAGCC

C6‑
NH2‑
3';(2)氨基修锁核酸辅助探针(AP),序列:5'

TCTATCGGTAG(C
L
)CAGAT(G
L
) TAGCT
ꢀ‑
C6‑
NH2‑
3'。3.根据权利要求1或2所述的用于miRNA

222检测的碳点构建Y型DNA结构的电致化学发光生物传感器,其特征在于,碳点构建Y型DNA结构的CDs

PEI

GO复合物修饰锁核酸辅助探针的制备方法,包括如下步骤:取20 mL 1 mg/mL GO溶液于三颈圆底烧瓶中,加入6.67 mg PEI,60 ℃ 油浴下加热,冷凝回流12 h,室温下自然冷却,获得的PEI

GO产物溶液离心、洗涤,用超纯水重新分散制得PEI

GO溶液;然后取4 mL PEI

GO溶液与1 mL CDs混合搅拌混匀,80 ℃条件下加热回流3 h,所得CDs

PEI

GO产物溶液离心、洗涤,重新分散制得CDs

PEI

GO溶液;取200 μL EDC和NHS的混合溶液加入到0.5 mL CDs

PEI

GO溶液中,振荡反应0.5 h,然后加入 20 μL 10 μM的氨基修锁核酸辅助探针(AP),室温下振荡反应2 h获得混合溶液,将混合溶液离心、洗涤,得到标记CDs

PEI

GO的锁核酸辅助探针,并重新分散在由10 mM Tris

HCl缓冲液和100 mM NaCl组成的pH 7.4的杂交溶液中,4 ℃下保存,备用。4.根据权利要求1、2或3所述的用于miRNA

222检测的碳点构建Y型DNA结构的电致化学发光生物传感器,其特征在于,碳点构建Y型DNA结构为:在电极表面采用miRNA

222与双氨基修饰锁核酸发卡捕获探针(CP)、标记CDs

PEI

GO的锁核酸辅助探针杂交后,在电极表面形成Y型DNA结构。5.根据权利要求1、2、 3或4所述的用于miRNA

222检测的碳点构建Y型DNA结构的电致化学发光生物传感器,其特征在于,电致化学发光生物传感器的制备方法,包括如下步骤:(1)玻碳电极(GCE)依次在0.3、0.05 μm 的Al2O3粉末中打磨、抛光至镜面,然后分别放入1:1 HNO3、无水乙醇及超纯水中超声,其中HNO3浓度8 M,N2吹干,备用;(2)将GCE置于5 m...

【专利技术属性】
技术研发人员:雷云刘爱林林木土张子阳张宇韩舒桦
申请(专利权)人:福建医科大学
类型:发明
国别省市:

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