一种AAV载体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种AAV载体及其应用。所述AAV载体包括编码tat

【技术实现步骤摘要】
一种AAV载体及其应用


[0001]本专利技术涉及一种AAV载体及其应用，属于腺相关病毒载体药物领域。

技术介绍

[0002]传统多肽药物，特别是纯天然氨基酸组成的多肽药物，通常容易在体内快速降解而使得体内有效药物浓度维持时间短使其药物治疗效果难以体现，并且传统多肽药物无法口服需要反复肌肉注射。另外，传统多肽药物通常无法高效跨越血脑屏障，难以达到中枢系统发挥治疗作用。传统降解肽，临床上多用于急性治疗(如脑卒中)，存在如：难以在体内维持有效药物浓度，慢性疾病治疗效果较低，长期注射患者依从性差等问题。
[0003]面对纯天然氨基酸组成的多肽药物存在的问题，如容易在体内快速降解，体内有效药物浓度维持时间短，药效难以稳定体现，个体异质性较高等，临床上可以选择腺相关病毒(adeno
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associated virus，AAV)治疗技术。该技术的核心是简单搭载目的基因的AAV载体药物，目的是在感染细胞中表达目的基因补充感染细胞缺失/减少的蛋白。一次性给予AAV载体药物，药效可以长达5
‑
10年。但是这种技术存在显著缺点：
①
感染效率低，干预作用局限于少部分感染细胞。
②
传统腺相关病毒(AAV)或其编码的蛋白无法跨越血脑屏障和细胞膜，亦难实现跨越感染细胞、脑区甚至外周中枢的广泛干预。

技术实现思路

[0004]为解决现有技术中存在的问题，我们提出一种AAV载体及其应用。
[0005]本专利技术首先提供一种AAV载体，所述AAV载体包括编码tat
‑
降解肽的核酸片段。
[0006]本专利技术所述的降解肽是指能够靶向内源蛋白，使内源蛋白降解的肽。
[0007]本专利技术所述的tat
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降解肽是分泌型tat
‑
降解肽，本专利技术设计的包括编码分泌型tat
‑
降解肽的核酸片段的AAV载体，可以在外周持续表达，表达的降解肽可跨越血脑屏障和细胞膜实现中枢疾病长效干预，或在中枢持续表达跨越细胞膜在AAV感染细胞和非感染细胞中均发挥作用。即，本专利技术的AAV载体实现了降解肽药物广泛且长效的递送。
[0008]本专利技术所述的tat是指1型人免疫缺陷病毒转录激活因子(human immunodeficiency virus
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1transcription activator)，亦可简写为HIV
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1tat，是细胞穿透肽，它凭借一种无毒的、高效的方式进入细胞。
[0009]根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述降解肽为：携带deg标签或CTM标签的介导内源蛋白降解的肽；
[0010]优选地，所述deg标签的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0011]SEQ ID NO.1：RRRG；
[0012]优选地，所述CTM标签的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0013]SEQ ID NO.2：KFERQ。
[0014]根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述tat的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
[0015]SEQ ID NO.3：YGRKKRRQRRR；
[0016]优选地，所述编码tat的核酸序列如SEQ ID NO.4所示；
[0017]SEQ ID NO.2：TATGGCAGGAAGAAGCGGAGACAGCGACGAAGA。
[0018]根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述降解肽为βSyn
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deg；
[0019]其中，βsyn
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deg的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；
[0020]SEQ ID NO.5：YGRKKRRQRRRRTKSGVYLVGRRRG；
[0021]优选地，所述编码βsyn
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deg的核酸序列如SEQ ID NO.6所示；
[0022]SEQ ID NO.6：
[0023]CGTACTAAATCTGGTGTTTATTTGGTTGGTCGACGACGAGGC。
[0024]本专利技术所述deg亦称degron，在tat
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βsyn
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degron结构中介导α
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突触核蛋白(α
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synuclein，α
‑
syn)与蛋白酶体的结合，诱发α
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synuclein降解。本专利技术的tat
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βsyn
‑
degron能够有效地、特异地降低α
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synuclein。
[0025]生理状态突触核蛋白包括α
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突触核蛋白(α
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syn)、β
‑
突触核蛋白(β
‑
syn)和γ
‑
突触核蛋白(γ
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syn)三种类型。生理状态的α
‑
突触核蛋白为无序单体，病理状态的突触核蛋白为单体在病理性的聚合状态，即毒性α
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突触核蛋白。本专利技术所述的分泌型tat
‑
降解肽能够通过编码的βsyn序列识别并结合α
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synuclein，介导靶向降解。
[0026]根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述降解肽为βsyn
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CTM；
[0027]其中，βsyn
‑
CTM的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；
[0028]SEQ ID NO.7：YGRKKRRQRRRRTKSGVYLVGKFERQ。
[0029]根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述AAV载体还包括启动子序列；
[0030]优选地，所述启动子为CMV启动子或细胞类型特异的启动子；
[0031]优选地，所述细胞类型特异的启动子为：EF1a或hSyn。
[0032]根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述AAV载体的血清型为：AAV9、AAV2、AAV5或AAV8。本专利技术对所用AAV病毒的血清型没有明确限制，在实际应用时，可以根据注射部位不同采用相应的血清型AAV病毒，例如，选用具有跨越血脑屏障的能力的血清型AAV9用于外周注射，选用不具有跨越血脑屏障的能力的血清型AAV2、AAV5或AAV8用于中枢局部注射。
[0033]本专利技术第二方面提供所述的AAV载体在制备用于干预中枢疾病的药物中的应用。所述药物对中枢疾病的干预效果是广泛且长效的。
[0034]本专利技术第三方面提供一种药物，其包括所述的AAV载体，以及药学上可接受的辅料。
[0035]根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述药物为注射剂；进一步优选地，所述药物为脑部注射剂。
[0036]本专利技术的有益效果：
[0037]1.本专利技术设计的包括编码tat
‑
降解肽的核酸片段的AAV载本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种AAV载体，所述AAV载体包括编码tat
‑
降解肽的核酸片段。2.根据权利要求1所述的AAV载体，其中，所述降解肽为：携带deg标签或CTM标签的介导内源蛋白降解的肽；优选地，所述deg标签的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；SEQ ID NO.1：RRRG；优选地，所述CTM标签的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；SEQ ID NO.2：KFERQ。3.根据权利要求1所述的AAV载体，其中，所述tat的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；SEQ ID NO.3：YGRKKRRQRRR；优选地，所述编码tat的核酸序列如SEQ ID NO.4所示；SEQ ID NO.2：TATGGCAGGAAGAAGCGGAGACAGCGACGAAGA。4.根据权利要求1所述的AAV载体，其中，所述降解肽为βSyn
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deg；其中，βsyn
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deg的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；SEQ ID NO.5：YGRKKRRQRRRRTKSGVYLVGRRRG；优选地，所述编码βsyn
‑
deg的核酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨欣，田恬，王玉田，
申请(专利权)人：深圳理工大学筹，
类型：发明
国别省市：