针对GUCY2C的抗体及其用途制造技术

本文公开了针对GUCY2C的抗体及其用途，特别是针对GUCY2C的单克隆抗体、针对GUCY2C和CD3的双特异性抗体、包含编码抗体的核苷酸序列的核酸、包含核酸的载体、以及包含核酸或载体的宿主细胞。还公开了包含抗体的药物组合物和缀合物，以及使用抗体的治疗方法。以及使用抗体的治疗方法。以及使用抗体的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
针对GUCY2C的抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及针对GUCY2C的抗体，以及此类抗体的用途，特别是它们在癌症治疗中的用途。

技术介绍

[0002]结直肠癌 (CRC) 是最常诊断的癌症之一，也是全球癌症死亡的主要原因。鸟苷酸环化酶2C（GUCY2C或GCC）属于鸟苷酸环化酶受体家族，并且已被报道在多种胃肠道癌症中表达，包括90%以上的各个阶段的CRC。GUCY2C是激素鸟苷素和尿鸟苷素以及源自肠道大肠杆菌的热稳定肠毒素(STa)的刷状缘膜受体。GUCY2C的表达仅限于健康肠道上皮的腔表面，并且由于肿瘤破坏了紧密连接结构，GUCY2C可为全身施用的T细胞重定向疗法的肿瘤特异性激活提供有希望的靶抗原。据报道，与低分化肿瘤相比，中分化至高分化肿瘤的GUCY2C细胞表面表达更高。
[0003]GUCY2C在CRC等癌细胞中的高表达显示其用于肿瘤治疗的潜在能力。

技术实现思路

[0004]本公开提供了靶向GUCY2C或其抗原结合片段的新型抗体，其可以是单克隆抗体或双特异性抗体的形式，如双特异性T细胞接合剂(BiTE)。已经对抗体的体外 T 细胞依赖性功效以及体内抗肿瘤活性进行了评估。这些功能测定的结果证明了这些工程化抗体，特别是BiTE形式的抗体的有效抗肿瘤作用。
[0005]在一个方面，本公开提供了特异性结合GUCY2C的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中VL包含分别具有如SEQ ID NO: 1
‑
3所示氨基酸序列的LCDR 1
‑
3，并且VH包含分别具有如SEQ ID NO: 6
‑
8所示氨基酸序列的HCDR 1
‑
3。
[0006]在本文公开的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO: 4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且VH包含与SEQ ID NO: 9具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中,VL包含与SEQ ID NO: 11具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且VH包含与SEQ ID NO: 12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，VL包含如SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列并且VH包含如SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，VL包含如SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列并且VH包含如SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列。
[0007]在一些实施方案中，抗体是鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中，抗体属于选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同种型。在一些实施方案中，抗体属于选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚型。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、scFv和ds
‑
scFv。
[0008]在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体包含轻链和重
链，所述轻链包含与SEQ ID NO: 5具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且所述重链包含与SEQ ID NO: 10具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列。
[0009]在其他实施方案中，抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。在一些实施方案中，抗体是双特异性抗体，其进一步包含与第二抗原结合的第二抗原结合区。在一些实施方案中，第二抗原是肿瘤相关抗原或免疫细胞抗原。在一些实施方案中，第二抗原是T细胞抗原。在一些实施方案中，T细胞抗原选自T细胞受体(TCR)、CD3、CD4、CD8、CD16、CD25、CD28、CD38、CD44、CD62L、CD69、ICOS、41
‑
BB (CD137)和NKG2D。
[0010]在一些实施方案中，第二抗原是CD3，并且第二抗原结合区包含VL和VH，其中VL包含分别具有如SEQ ID NO: 13
‑
15所示氨基酸序列的LCDR 1
‑
3，并且VH包含分别具有如SEQ ID NO: 17
‑
19所示氨基酸序列的HCDR 1
‑
3。
[0011]在一些实施方案中，第二抗原结合区包含VL和VH，其中VL包含与SEQ ID NO: 16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且VH包含与SEQ ID NO: 20具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含VL和VH，其中VL包含如SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列，并且VH包含如SEQ ID NO: 20所示的氨基酸序列。
[0012]在一些实施方案中，抗体包含scFv，该scFv包含特异性结合GUCY2C的抗体的VL和VH，并且scFv任选地经由接头连接至第二抗原结合区的VL或VH的N端。在一些实施方案中，抗体包含：第一多肽链，其从N端至C端包含：scFv、任选的接头、第二抗原结合区的VL、轻链恒定区(CL)、重链恒定区2 (CH2)和重链恒定区3 (CH3)；和第二多肽链，其从N端至C端包含：第二抗原结合区的VH、重链恒定区1 (CH1)、重链恒定区2 (CH2)和重链恒定区3 (CH3)。
[0013]在一些实施方案中，接头包含选自(G4S)n和GS(G4S)n的氨基酸序列，其中n为选自1
‑
5的整数，优选地接头包含如SEQ ID NO: 23或24所示的氨基酸序列。
[0014]在一些实施方案中，第一多肽链包含与SEQ ID NO: 21具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且第二多肽链包含与SEQ ID NO: 22具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列。
[0015]在一些实施方案中，双特异性抗体是双特异性T细胞接合剂(BiTE)。
[0016]在另一方面，本公开提供了双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含与GUCY2C结合的第一抗原结合区和与CD3结合的第二抗原结合区，该第一抗原结合区包含第一轻链可变区(VL1)和第一重链可变区(VH1)，该第二抗原结合区包含第二轻链本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 特异性结合GUCY2C的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中所述VL包含分别具有如SEQ ID NO：1
‑
3所示氨基酸序列的LCDR 1
‑
3，并且所述VH包含分别具有如SEQ ID NO：6
‑
8所示氨基酸序列的HCDR 1
‑
3。2. 根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中(i)所述VL包含与SEQ ID NO：4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且所述VH包含与SEQ ID NO：9具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的氨基酸序列；或者(ii)所述VL包含与SEQ ID NO：11具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且所述VH包含与SEQ ID NO：12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列。3. 根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中(i)所述VL包含如SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列并且所述VH包含如SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列；或者(ii)所述VL包含如SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列并且所述VH包含如SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。5.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体属于选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同种型。6.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体属于选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚型。7.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、scFv和ds
‑
scFv。8.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为单克隆抗体。9. 根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含轻链和重链，所述轻链包含与SEQ ID NO：5具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列，并且所述重链包含与SEQ ID NO：10具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列。10.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为双特异性抗体或多特异性抗体。11.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为双特异性抗体，其进一步包含与第二抗原结合的第二抗原结合区。12.根据权利要求11所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原为肿瘤相关抗原或免疫细胞抗原。13.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原为T细胞抗原。14. 根据权利要求13所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述T细胞抗原选自T细胞受体(TCR)、CD3、CD4、CD8、CD16、CD25、CD28、CD44、CD62L、CD69、ICOS、41
‑
BB (CD137)和NKG2D。15. 双特异性抗体或其抗原结合片段，包含结合GUCY2C的第一抗原结合区和结合CD3
的第二抗原结合区，所述第一抗原结合区包含第一轻链可变区(VL1)和第一重链可变区(VH1)，所述第二抗原结合区包含第二轻链可变区(VL2)和第二重链可变区(VH2)，其中所述VL1包含分别具有如SEQ ID NO：1
‑
3所示氨基酸序列的LCDR 1
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3，并且所述VH1包含分别具有如SEQ ID NO：6
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8所示氨基酸序列的HCDR 1
‑
3；和所述VL2包含分别具有如SEQ ID NO：13
‑
15所示氨基酸序列的LCDR 1
‑
3，并且所述VH2包含分别具有如SEQ ID NO：17
‑
19所示氨基酸序列的HCDR 1
‑
3。16. 根据权利要求15所述的双特异性抗体或其抗原结合片段，其中(i)所述VL1包含与SEQ ID NO：4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列并且所述VH1包含与SEQ ID NO：9具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列；或者(ii)所述VL1包含与SEQ ID NO：11具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列并且所述VH1包含与SEQ ID NO：12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的氨基酸序列；...

【专利技术属性】
技术研发人员：孝作祥，周东文，周炜，
申请(专利权)人：浙江时迈药业有限公司，
类型：发明
国别省市：